Name: גזירת בתאי גזע עובריים אנושיים על ידי Immunosurgery (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-12-13T00:28:00.000+00:00
Duration: 11 min 56 s
Description: למדו פרוטוקול מפורט לגזירת תאי גזע עובריים אנושיים באמצעות טכניקת אימונוכירורגיה לבידוד מסת התאים הפנימית. שיטה זו מספקת בסיס אמין למחקר בביולוגיה של תאי גזע ורפואה רגנרטיבית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

AEC הוא עמית של קופין ג&#39;יין צ&#39;יילדס הזיכרון הקרן למחקר רפואי ו מעבדות המחקר של מרק. אנו מודים ד Egli ו-C קוואן עצה דיון ניסיוניים.

<html> עוברי אדם קפוא המשמש הגזירה עובריים אנושיים (הס) בתאי גזע נתרמו למחקר בעקבות הסכמה מדעת תקין תחת פרוטוקולים המחקר נבדקו ואושרו על ידי הוועדה הן על שימוש בבני אדם ואת בתאי גזע עובריים למחקר ועדת פיקוח באוניברסיטת הרווארד . בפרוטוקול נכתב להלן מתבסס על פרמטרים שפורסמו שדווחו על ידי קוון et al. 2004, עם שינויים קלים. העובר תרבות הפשירי עוברים אנושיים באמצעות הפשירי יתרון של קווין קיט תרבות טיפות של המדיום הגלובלי בתוספת Plasmanate 15% עד פיתוח לשלב הבלסטוציסט מורחבת. Immunosurgery מבוססי הבידוד של מסת התאים הפנימית אופן ההכנה: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכינו צלחות להסרת pellucida zona ו immunosurgery (ראה להלן) על ידי הקמת טיפות של תמיסת כל צלחות 10 ס&quot;מ. שכבת עם שמן מינרלי כדי למנוע אידוי. הכן שורה אחת לכל העובר מיועד הגזירה. <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> EmbryoMax Tyrodes חומציים, כמו גם השימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגזירה הס תא התקשורת: 75% KO-DMEM, 10% KO-סרום החלפה, Plasmanate 10%, 2.5% תאים ES נבדק בסרום שור העובר (FBS), 2mm Glutamax-I, 1% שאינם חיוניים חומצות אמינו, 50 יחידות / ml לפניצילין, סטרפטומיצין 50μg/ml, 0.055mM ב-mercaptoethanol, 5ng/ml bFGF. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הארנב נגד אדם דם אדומים תא נוגדן ראשוני, מחדש על פי הצעתו של היצרן, בדילול מלא ב 1:10 עם הגזירה התקשורת הס התא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גינאה חזירים משלים בסרום, מחדש על פי הצעתו של היצרן, בדילול מלא ב 1:10 עם הגזירה התקשורת הס התא. <img src="/files/ftp_upload/old/574_2008_9_18_6/574_Figure-01.png" alt="574_Figure-01" width="600" height="166" /> </li></ul></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאזן את כל צלחות 37 ° C בתרבות רקמה חממה לפני השימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך 50μl-100μl pipettes נימי (VWR) לשימוש עוברי העברה. גזור מסתיים עם עט היהלומים לשימוש עם צינורות פיפטה בפה מצויד במסנן 0.2μm. </li></ol> Immunosurgery נוהל: הערות: <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בהליך זה, תאים של trophectoderm נהרסים על ידי חשיפה קצרה נוגדנים כנגד תאים אנושיים בד בבד עם פעילות משלימים. לפיכך, הפרוטוקול עובד בצורה הטובה ביותר עם איכות גבוהה בעוברים עם trophectoderm שלמים, כמו שרק את השלמות המבנית של הבלסטוציסט מונע ICM החל גם להיות רגישים התגובה החיסונית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל ההליכים שבוצעו באמצעות היקף לנתיחה מצויד הבמה מחומם. </li></ul> שלבים: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את הפה פיפטה לשמש להעברת העובר עם FBS למנוע עוברים יידבקו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת הבלסטוציסט מצלחת התרבות לירידה החזקה הס של AT צלחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בגין ההליך על ידי העברת הבלסטוציסט מירידה הס באמצעות סדרה של AT טיפות. ירידה ב שלישי, לצפות פירוק zona pellucida (בדרך כלל 5-30 שניות). היזהר שלא שלמות לטיפול יתר או העובר עלול להיות בסכנה. <img src="/files/ftp_upload/old/574_2008_7_21_2/574_Figure-02.png" alt="574_Figure-02" width="551" height="273" /> </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הבלסטוציסט העברה באמצעות סדרה של הגזירה התקשורת הס תא טיפות כדי לשטוף AT. פיפטה וטעינה מוקדמת עם התקשורת מומלץ לנטרל מיד AT התגובה. Blastocysts ניתן לקיים עד כאן הכל היה AT-מעובד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת הבלסטוציסט דרך סדרה של טיפות נוגדן ראשוני, עוזב ירידה השלישי 30 דקות של הדגרה ב 37 מעלות צלזיוס תרבות רקמות חממה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הבלסטוציסט העברה באמצעות סדרה של הגזירה התקשורת הס תא טיפות כדי לשטוף העיקרי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת הבלסטוציסט דרך סדרה של טיפות משלימים, עוזב ירידה השלישי לצפות תמוגה של תאים trophectoderm. שימו לב הבלסטוציסט במשך 30 השניות הראשונות על הבמה &quot;מבעבע&quot; של תאים trophectoderm כפי שהם lyse. אם תמוגה הוא ציין במסגרת הזמן הזה, לשמור על צלחת על הבמה מיקרוסקופ כדי לפקח על התגובה עד לסיום. אם לא מבעבע הוא ציין במהלך 30 השניות הראשונות, לחזור החממה, בדיקת כל 5 דקות עד שרוב trophectoderm יש lysed. זה יכול לקחת 5-15 דקות. צג התגובה מקרוב כדי למזער את זמן התגובה נזק אפשרי מסת התאים הפנימית. <img src="/files/ftp_upload/old/574_2008_7_21_3/574_Figure-03.png" alt="574_Figure-03" width="571" height="273" /> </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הבלסטוציסט העברה באמצעות סדרה של הגזירה התקשורת הס תא טיפות כדי לשטוף את פעילות משלימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת פיפטה זכוכית בקוטר כי הוא מעט קטן יותר הבלסטוציסט (הנשלפת 10μl צינורות VWR נימי), לצייר את הבלסטוציסט מעלה ומטה כדי להפשיט את רוב trophectoderm lysed. g &quot;alt =&quot; 574_Figure-0 &quot;width =&quot; 577 &quot;גובה =&quot; 270 &quot;/&gt; </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלייט ICM לבודד תאים על מזין של מומת mitotically העובר fibroblasts העכבר (MEFs). MEFs יש להכין יום לפני הגזירה ועברו יום הס הגזירה התקשורת של התא. 4-היטב מנות NUNC לעבוד גם עבור השלבים הראשונים של הגזירה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נא לא להפריע צלחת 1-2 הימים הראשונים. לאחר מכן, לבדוק מדי יום תולדה של מושבות גזע עובריים (בדרך כלל לעין בתוך 1-2 שבועות). התקשורת צריכה להיות שונה בכמויות וחצי בכל תחילת יום אחר יום 3. </li></ol> ES תולדה התא passaging כאשר תוצאה תא הס הגיע כ 0.5mm או יותר, הוא מוכן להרחבת ידי בחירת מכני. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מבחינה מכנית לפזר מחצית תוצאה ולהעביר צלחות חדשות המכילות ניזונים טריים. תא גזע עובריים גושים צריך להיות כ 30-50 תאים כל אחד. השאירו החצי השני של תוצאה כמו גיבוי למעבר הראשון (P1). תוצאה (P0) יכול להיות שנקטפו מספר פעמים, תוך שהיא ממשיכה להתרחב. <img src="/files/ftp_upload/old/574_2008_7_21_5/574_Figure-05.png" alt="574_Figure" width="639" height="219" /> </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מושבות משני ניתן לפזר באופן דומה והרחיב על פני תרבות מנות גדולות עד 3-5 קטעים, בו בזמן שורות תאים חדשים ניתן להתאים passaging האנזימטית עם טריפסין. התוכן בסרום של התקשורת והתרבות צריכים גם להיות מופחת בהדרגה עד 1% 0% במהלך מעברים אלה הראשוני כדי למזער את התא בידול ES. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוקמה כל קווי גזע עובריים יש הפקידה על ידי הקפאת למטה חלק קטעים מוקדם הרחבות בעתיד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בנוסף, כל שורה התא צריך להיות מאופיין על ידי ניתוח קריוטיפ ומאומתים על ידי מחקרים pluripotency והבחנה במבחנה in vivo. </li></ol>

<ol><li>Cowan, C. A., Klimanskaya, I., McMahon, J., Atienza, J., Whitmyer, J., Zucker, J. P., Wang, S. P., Morton, C. C., McMahon, A. P., Powers, D., Melton, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+embryonic+stem-cell+lines+from+human+blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22N+ENGL+J+MED%22%5BJournal%5D)">Derivation of embryonic stem-cell lines from human blastocysts.</a> N ENGL J MED. 350 (13), 1353-1356 (2004).</li>
</ol>

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.

הפרוטוקול המובא כאן מספק החוקרים עם תמציתי, קל לעקוב אחר קווי המתאר של איך להפיק האדם קווי גזע עובריים על ידי בידוד immunosurgical של מסת התאים הפנימית.

<table><tbody><tr><td>ערכת הפשרה Quinn&amp;rsquo;s Advantage</td><td>Sage</td><td>ART-8016</td><td></td></tr><tr><td>מדיום Global</td><td>Life Global</td><td>GMGB-050</td><td></td></tr><tr><td>Plasmanate</td><td>Talecris</td><td>61325</td><td></td></tr><tr><td>EmbryoMax Acidic Tyrodes</td><td>Chemicon International</td><td>MR-004-D</td><td></td></tr><tr><td>KO-DMEM</td><td>Invitrogen</td><td>10829-018</td><td></td></tr><tr><td>KO-Serum Replacement</td><td>Invitrogen</td><td>10828-028</td><td></td></tr><tr><td>סרום עגל עוברי (FBS) מוגדר, נבדק על תאי ES</td><td>Hyclone</td><td>SH30070.03</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax-I</td><td>Invitrogen</td><td>35050-079</td><td></td></tr><tr><td>חומצות אמינו לא חיוניות</td><td>Invitrogen</td><td>11140-076</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומייצין</td><td>Invitrogen</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>גורם גדילה בסיסי לפיברובלסטים אנושי רקומביננטי</td><td>Invitrogen</td><td>13256-029</td><td></td></tr><tr><td>בטא-מרקפט&amp;#8211;נול</td><td>Invitrogen</td><td>21985-023</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן ראשוני של ארנב נגד תאי דם אדומים אנושיים</td><td>Rockland Immunochemicals</td><td>109-4139</td><td></td></tr><tr><td>סרום קומפלימנט של חזירי ים</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S-1639</td><td></td></tr><tr><td>פיפטות קפילריות בנפחים של 10 µL, 50 µL, 100 µL</td><td>VWR international</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פיפטות פה עם צינורות</td><td>VWR international</td><td></td><td>סופקו עם הפיפטות הקפילריות מ-VWR</td></tr><tr><td>מסנן מזרק Acrodisc של 0.2 µm</td><td>Pall Corporation</td><td>PN4192</td><td></td></tr><tr><td>0.5% Trypsin-EDTA</td><td>Invitrogen</td><td>25300-120</td><td></td></tr><tr><td>צלוחיות לתרבית רקמה</td><td>VWR international</td><td></td><td></td></tr><tr><td>צלוחיות לתרבית רקמה</td><td>Nalge Nunc international</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ דיסקציה Nikon SMZ1500 המצויד בבמת חימום Nikon Tokai Hit ThermoPlate</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>פיברובלסטים עובריים של עכבר (E12.5)</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

גזירת בתאי גזע עובריים אנושיים על ידי immunosurgery

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

היכולת של בתאי גזע עובריים אנושיים עצמית לחדש להתמיין לכל סוגי התאים בגוף עולה כי הם מחזיקים הבטחה גדולה עבור שניהם יישומים רפואיים ככלי מחקר להתמודדות עם שאלות יסוד בהתפתחות מחלות. כאן, אנו מספקים תמציתי, צעד אחר צעד פרוטוקול הגזירה של בתאי גזע עובריים אנושיים מעוברים על ידי בידוד immunosurgical של מסת התאים הפנימית.

גזירת בתאי גזע עובריים אנושיים על ידי Immunosurgery

היכולת של תאי גזע עובריים אנושיים להתחדש עצמית ולהתמייז לכל סוגי התאים בגוף מעידה כי הם טומנים בחובם פוטנציאל רב הן עבור...

שלום, שמי אליס צ'ן. אני פוסט-דוקטורנטית במעבדת ה-melting והיום אדגים לכם כיצד אנו מפיקים תאי גזע עובריים מעוברי אדם. אנו מקבלים עובריים בשלבים שונים של התפתחות ומגדלים אותם בתרבית in vitro עד שהם מגיעים לשלב ה-expanded blastocyst המתאים.אלה הן דוגמאות לאופן שבו העובר מתפתח מהשלב הראשון, שלב התא הבודד, ועד לבלסטוציסטה מוקדמת, ולאחר מכן לבלסטוציסטה מורחבת ממנה אנו מפיקים תאי גזע עובריים אנושיים. עוברים באיכות גבוהה שנבחרו להפקה מועברים דרך שלוש טיפות של ACE roads, שם תניחו אותם ותמתינו להמסות של ה-zona lucida. תהליך הניורו-כירורגיה הוא תהליך לא-ספציפי שבו הנוגדן rabbit anti-human נקשר לשכבת התאים החיצונית.במקרה זה, מדובר בשילוב של שלושת סוגי התאים (trifecta derm). לאחר הוספת משלים מסרום של חזיר גיבס, כל התאים הללו שאל להם antibody תלויה יעברו ליזיס. ראשית, נכין שלוש צלחות.הצלחת הראשונה היא עבור ACE tyros, המשמשת אותנו להסרת ה-zita. הצלחות השנייה והשלישית הן עבור immunos surgery. אתחיל ביצירת הצלחת שבה נניח את טיפות ה-acid tyros ואת גזירת תאי הגזע העובריים האנושיים.טיפות מצע. הכינו שלוש טיפות של acid tyros בצדו השמאלי של הפלטה, ובצדה הימני של הפלטה הכינו שלוש טיפות של מצע גידול עבור תאי ES אנושיים. הפלטה השנייה מכילה את הנוגדן הראשוני, שהוא rabbit anti-human RBC.שוב, הצד השמאלי של הפלטה יוקדש לנוגדן הראשוני, שלוש טיפות לכל עובר, והצד הימני של הפלטה יוקדש לתרבית ES אנושית. טיפות מצע, שוב, שלוש טיפות לכל עובר עבור פלטת המשלים. שוב, נניח שלוש טיפות משלים בצד השמאלי של הפלטה, ולאחר מכן שלוש טיפות מצע תרבית ES אנושית בצד הימני של הפלטה.שוב, כל שורה מוקדשת לעובר אחד. שלושת הפלטות מכוסות בשמן מינרלי למניעת התאיידות ומונחות באינקובטור לצורך שיווי משקל. זהו מיקרוסקופ דיסקציה בתוך תא עבודה עם זרימה למינרית, בדומה לתא לתרביות רקמה, וכאן אנו מבצעים את רוב המניפולציות של העובריים האנושיים.הדבר הראשון שאתם צריכים להכין לפני שתתחילו עם העוברים שלכם הוא פיפטות פה. אלו הן צינוריות פיפטת פה סטנדרטיות, פרט לכך שהכנסנו מסנן של 0.2 micron בין הפה לבין המקום שבו ממוקמת הפיפטה. זאת כדי להבטיח סטריליות.הרשו לי להדגים כיצד למשוך פיפטים לפה. אני מעדיף למשוך מגוון של גדלים. ניתן להשיג את כל אלו מ-VWR, ואני נוהג למשוך קטרי של 10 microliter, 50 microliter ו-100 microliter.כעת אני משתמש במחט יהלום כדי לחתוך את צינור הקיבוע. בשלב ראשון זה, נדרש קוטר גדול למדי כיוון שמטפלים בעובר כולו. עוברים באיכות גבוהה שנבחרו להשגה (Derivation) מועברים לאחר מכן דרך שלוש טיפות.העבירו את המטריצות פשוט מהטיפה הראשונה לטיפה השנייה ואז לטיפה השלישית, שם תניחו אותן ותעקבו אחר התמוססות ה-zap palita. תהליך זה אורך בדרך כלל פחות מ-30 שניות, וניתן למעשה לראות את ה-zop palita נמוס. כאשר ה-zap palita התמוסס לחלוטין.לאחר מכן, העבירו את העוברים דרך שלוש טיפות שטיפה של מצע גידול human Es, במעבר דרך הטיפה הראשונה, השנייה והשלישית של השטיפה. לאחר מכן, העבירו את העוברים לטיפות של הנוגדן הראשוני, שוב במעבר מהטיפה הראשונה לשנייה ולאחר מכן לשלישית, שם יש להשאירם למשך חצי שעה של דגירה באינקובטור לתרביות רקמה. הליזה של ה-trophoderm הופכת ניכרת כאשר ניתן להבחין בבעבוע של התאים בחלקו החיצוני של העובר. זהו השלב שבו תאי ה-trophoderm מתחילים לעבור ליזה.כאשר הליסיס ניכר לאורך כל השפה החיצונית של העובר, העובר מוכן לשטיפה באמצעות שלוש טיפות של מצע תרבית humanus. לאחר הניתוח האימונוכימי, העוברים עוברים טריטורציה מכנית באמצעות פיפטה בעלת פיה קטנה יותר. פיפטה זו צריכה להיות בעלת קוטר קטן יותר מהפיפטה הראשונה, כדי להפוך את תהליך הטריטורציה ליעיל יותר להסרת שאריות הליסיס.תאי עור. בסיום הפעולה המכנית, נשאר מקבץ של תאים במרכז. זוהי מסת התאים הפנימית, שהיא שלמה.מסביב לכך ישנם תאי עור trifecta lysed רבים, וכן כמה תאי עור trifecta שלמים. בידוד גוש התאים הפנימי (inner cell mass) מועבר לאחר מכן לבאר שהוכנה עם תאי שכבת הזנה (feeder layer) של עובר עכבר. פלטת תאי שכבת ההזנה הוכנה בלילה שלפני, והבוקר החלפתי את המצע ממצע של פיברובלסטים של עובר עכבר למצע לגזירת human es.בידוד הגוש התאי הפנימי מועבר לאחר מכן מטיפות השטיפה, לאחר השלמה, לבאר זו המכילה את תאי שכבת המזינים. צלחת זו מוחזרת למדגרה ונשארת ללא התערבות למשך מספר ימים כדי לאפשר את היצמדותו של בידוד הגוש התאי הפנימי. זוהי דוגמה לאופן הפיתוח של הצמיחה החוצה.כאשר הצמיחה (outgrowth) הופכת לגדולה מספיק, ניתן להתחיל במעבר הראשון על ידי חלוקת הצמיחה הזו לשני חלקים. כעת, חלפו 14 ימים מאז הבידוד המקורי, והנה דוגמה לצמיחה מאחד הבידודים שביצענו.זוהי דוגמה לאחד מצמיחות אלה, שביום זה אני אקלוף מחצית מהצמיחה. צמיחה זו תחולק לשניים ולאחר מכן תיחתך לחתיכות ריבועיות, וכל אחת מהחתיכות הללו תועבר לבאר חדשה המכילה תאי מאכל (feeder cells). מומלץ להשאיר מחצית מהצמיחה ללא מגע, כדי שיהיה לך מקור תאים רציף שאליו תוכל לחזור לצורך הגברת התאים ולגיבוי של כל מעברי תאים (passages) שתבצע.עבור שני עד שלושה המעברים הראשונים. מומלץ לבצע מעבר מכני באופן זה ובסופו של דבר להתאים את התאים לפירוק אנזימטי למשם מעבר יעיל יותר. המעבדה שלנו מפיקה באופן עקבי קווי תאי גזע עובריים אנושיים לשימוש ולהבנת התפתחות ודיפרנציאציה.שורות אלו מופצות באופן גלובלי גם לחוקרי תאי גזע. אני סבור כי ישנם ארבעה גורמים עיקריים המשפיעים על הצלחת הגזירה. הגורם הראשון קשור לאיכות העוברית, התלויה גם ברקע הגנטי, במידת האיכות שבה העוברים הוקפאו והופשרו, וכן באיכות התרבית בתנאי מעבדה (in vitro) עד לשלב הגזירה בשלב הבלסטוציסטה.הגורם השני הוא ככל הנראה שלמות האיכות של מסת התאים הפנימית לאחר הבידוד, ודבר זה עשוי להיות תלוי בטכניקה המשמשת לבידוד מסת התאים הפנימית וכן תלוי בניסיון ובמיומנות. הגורם השלישי הוא מידת ההיצמדות של מסת התאים הפנימית המבודדת לשכבות המזינות (feeder layers), והגורם הרביעי הוא הצמיחה החוצה של בידוד ה-ICM הזה. אינני סבורה כי מדובר בתהליך קשה מבחינה טכנית.זה דורש רק מעט תרגול. למעשה, כל שלב הוא פשוט למדי, כך שכל עוד ניתן לעקוב אחר הפרוטוקול, אני חושב שכל אחד יכול לעשות זאת עם מעט תרגול. מה שמצאנו במעבדה הוא שכל שושנ (line) שונה מעט, מסיבות שאיננו בטוחים לחלוטין שאנו מבינים.לדוגמה, אם תבחנו את פוטנציאל הדיפרנציאציה של 10 שורות תאים, ייתכן ששתיים או שלוש מהשורות הללו יהיו בעלות סבירות גבוהה יותר להתפתח לסוג התא שבו אתם מעוניינים. אני חושד שהבדלים אלה קשורים לשלב שבו התאים היו בעת גזירת שורות תאי הגזע העובריים, כמו גם לטיפול הידני בתאים אלו. אני סבור שתכונה זו משתנה לעיתים, וההומוגניות של שורות התאים ופוטנציאלן הן נושאים שכל חוקר של תאי גזע צריך לקחת בחשבון.שוב, אינני יודע מה גורם לכך, אך בוודאי כדוגמה למחקרי, המטרה הסופית שלנו היא ליצור תאי בטא מפיקים באינסולין בלבלב. השלב הראשון ביצירת סוג זה של שורת תאים הוא יצירת אנדודרם מתאי גזע עובריים, ובבדיקה השוואתית של 10 עד 20 שורות, מצאנו ששתיים או אחת מהן יכולות לייצר אנדודרם ביעילות, בעוד שמחציתן עשויות לייצר אנדודרם ביעילות פחותה, וחלקן כלל אינן יכולות לייצר אנדודרם היטב. לכן, באמצעות תהליך סינון ראשוני זה, אנו בוחרים תאים בעלי נטייה גבוהה יותר להיווצר לסוג התאים המבוקש, וממשיכים בתהליך הדיפרנציאציה שאר השלבים באמצעות סוגי תאים אלו.ההסקה הראשונה של תאי גזע עובריים אנושיים דווחה על ידי Thompson Etal בשנת 1998, ובשנת 2004 דיווח המעבדה שלנו על הסקה של 17 קווי תאי גזע עובריים אנושיים חדשים. על ידי שינוי הפרוטוקולים הגרסומים הללו, כאשר שינויים אלו נועדו למעשה להפוך את תהליך ההסקה ליעיל ומזורז יותר. הם כוללים שינויים בהרכב המצע, באופן העברת התאים (passaging) ובאופן ההפשרה לאחר הקפאה.מאז, בכל גזירה, אנו מחפשים דרכים חדשות לשיפור הפרוטוקול וקצב הגזירה. לדוגמה, המעבדה שלנו בוחנת דרכים חלופיות לבידוד המסה התאית הפנימית (inner cell mass), שלא יעשו שימוש בריאגנטים זרים כגון נוגדן של ארנב או משלים סרום של חזיר גינאה, אלא יתבססו על דיסקציה מכנית של המסה התאית הפנימית. אנו מקווים ששיטות אלו יובילו לדרך לבידוד המסה התאית הפנימית שתהיה לפחות שקולה, ואולי אף טובה יותר.

derivation-of-human-embryonic-stem-cells-by-immunosurgery

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

זה פרוטוקול הפרטים גזירת להשתלה בתאי גזע hematopoietic מתאי גזע עובריים של עכבר (ESC) הזרקת הבאים שלהם לעכברים הנמען מוקרן קטלנית. בקצרה, הם ESC להבדיל גופים embryoid, אשר נגועים אז עם HoxB4 retroviral ושיתוף תרבותי עם OP9 תאים סטרומה וציטוקינים hematopoietic.

גזירת בתאי גזע hematopoietic מ Murine בתאי גזע עובריים

וידאו זה מציג את התהליך להפקת המושרה בתאי גזע pluripotent באמצעות lentivirus ועין מתנהלת המבטאים Oct4, Sox2, c-myc ו Klf4.

יצירת iPS תאים MEFS דרך ביטוי מאולץ של סוקס-2, אוקטובר-4, c-myc, ו Klf4

היכולת של תאים עובריים נבטי להתמיין לתאי נבטי קדמוני בשלבי הפיתוח המוקדמים הוא מודל מושלם לכתובת ההשערה שלנו לגבי סרטן פוריות. פרוטוקול זה מראה כיצד לבודד תאים נבטי קדמוני של בלוטות המין המתפתחות 10.5-11.5 ימים coitum עוברים לפרסם העכבר.

בידוד גזירת תאים עובריים בעכבר ז&#39;רמינל

בידול בימוי של hESCs לתוך תאים ספציפיים יצרה עניין רב ברפואה רגנרטיבית. אנו מספקים תמציתי, צעד אחר צעד פרוטוקול...

הגורל מיפוי בתאי גזע עובריים אנושיים על ידי גיבוש תפלצת

ניתן להתמיין בתאי גזע עובריים של עכבר לתאי T במבחנה באמצעות מערכת התרבות המשותפת OP9-DL1. הצלחה בהליך זה דורשת תשומת לב קפדנית לתחזוקת ריאגנט/תאים, ושלבים רגישים לטכניקה מרכזית. כאן אנו דנים בפרמטרים קריטיים אלה ומספקים פרוטוקול מפורט לעידוד אימוץ טכנולוגיה זו.

גזירה של תאי T במבחנה מתאי עכבר גזע העובריים

דור של תאי גזע pluripotent מושרה מספק סיכויים מרתקים לגזירה של השתלות אוטולוגית. עם זאת, ההתקדמות במדינת pluripotent מחדש בידול מייגע עדיין מעכבת תרגום קליני. כאן אנו מתארים את הגזירה של fibroblasts אדם הבוגר וההמרה הישירה שלהם לתאים עצביים מושרה ובידול שלאחר מכן לשושלות עצביות.

גזירה של fibroblasts אדם הבוגר וההמרה ישירה שלהם לתאים להרחבה עצבי אב

עריכת גנום של תאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים (hPSCs) יכולה להיעשות במהירות וביעילות. מוצג כאן הליך ניסיוני חזק להנדסה גנטית של hPSCs כפי שמודגם על ידי עריכת מיקום נמל המבטחים AAVS1 כדי לבטא EGFP ולהציג עמידות לאנטיביוטיקה.

הקמת שורות תאי גזע pluripotent האדם בעריכה-הגנום: ממיקוד לבידוד

כאן אנו מתארים שיטה לטיהור של תאי גזע עובריים אנושיים הבדילו כי מחויב כלפי האנדודרם הסופי לשיפור יישומים במורד בידול נוסף.

שיטה מהירה ויעילה עבור טיהור של תאים האנדודרם המופקים מתאי גזע עובריים אנושיים

פרוטוקול זה מתאר את השיטות לבניית מודל עכבר מח עצם/כבד/תימוס אנושי עם חסינות מהונדסת מבוססת תאי גזע נגד זיהום HIV.

תאי גזע מהונדסים חסינות בהתבסס נגד HIV זיהום במודל העכבר האנושי

מאמר זה מתאר פרוטוקול ביעילות להפיק, תרבות pluripotent שורות תאי גזע מעוברים עכבר בשלב הבלסטוציסט.

נגזרת של שורות תאי גזע מעוברים של עכבר

למדו פרוטוקול מפורט לגזירת תאי גזע עובריים אנושיים באמצעות טכניקת אימונוכירורגיה לבידוד מסת התאים הפנימית. שיטה זו מספקת בסיס אמין למחקר בביולוגיה של תאי גזע ורפואה רגנרטיבית.

גזירת בתאי גזע עובריים אנושיים על ידי Immunosurgery

גלה סרטונים נוספים