Name: לגרימת חניכיים הרשמי בעכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-08-06T13:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 26 s
Description: למדו לגרום לחניכיים הרשמי בעכברים באמצעות חשיפת שורשי שן וזיהום מבוקר. פרוטוקול זה מאפשר ניתוח מיקרו-CT והיסטולוגיה של דלקת מקומית וספיגת עצם.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים לדוקטור עודד היימן על עזרתו במיצוב בעלי חיים, רפאל ליבר לקבלת עזרה בניתוח מיקרו-CT, ופרופ ' אנערה דה רוסי דאלדגאן לקבלת ייעוץ לגבי הקמת הניסוי. אנו גם רוצים להכיר בדוקטור סידני כהן על קריאה ועריכה ביקורתית.
עבודה זו נתמכת על-ידי מענק מקרן המחקר של ד ר איזאדור א. קאח'בוי לח ולחקירות פנים, ומלגת יצחק נבון ממשרד המדע והטכנולוגיה בישראל לדוגמה.

כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול בבעלי חיים (IACUC) של האוניברסיטה העברית (אתיקה לא. MD-17-15093-5).
1. הרדמה ומיצוב בעלי חיים
<ol><li>הכינו פתרונות סטריליים כמתואר להלן.<ol>
<li>להכין 5 מ ל 7 מ"ג/mL של קטמין ו 0.09 mg/mL Medetomidine מדולל בתמיסה מאגר פוספט (PBS)/Saline.</li>
		<li>הכינו פתרון סטרילי של אטיפיאזול (0.4 מ"ג/mL) מדולל ב PBS/תמיסת מלח (מומלץ להכין כמות של 5 מ ל).</li>
		<li>הכינו פתרון סטרילי של מפיייטין (7.5 מ"ג/mL) מדולל ב-PBS/תמיסת מלח להרדמה מקומית (בקבוקון אחד שסופק על ידי מפיייטין מספיק עבור מלאי של 7.2 mL).</li>
	</ol>
</li>
	<li>השתמש 6-8 נקבה בת שבועות C57BL/6 עכברים לניסוי. לשמור על בעלי חיים ביחידת בעלי חיים מסוימים הפתוגן חינם (SPF), עם מים סטנדרטיים ומזון שסופקו על ידי המתקן ואת בעלי חיים האכלה libitum.</li>
	<li>שוקלים עכברים ולהזריק intraperitoneally (IP) נפח של 10 μL עבור כל גרם של המשקל. לדוגמה, עבור עכבר ששוקל 20 גרם, להזריק 200 μL של פתרון קטמין/Medetomidine. זה ייתן ריכוז סופי של (70 מ"ג/ק"ג) קטמין ו (0.9 מ"ג/ק"ג) מדטומאינין לכל חיה.</li>
	<li>על מנת למנוע כיבית עין עקב יובש במהלך ההליך, להחיל משחה העין המכילה כchloramphenicol (5%) על עיני החיות כשהן תחת הרדמה. לשמור על החיות חמות עם מנורה בזמן שהם מורדם. בדוק את עומק ההרדמה על ידי בדיקת רפלקס הדוושה (ביצוע צביטה הבוהן המשרד).</li>
	<li>לאחר העכבר הוא מורדם, מיקום העכבר הנחת על הצד הימני שלה (עבור חוקר יד ימין) על פני השטח פוליסטירן בגוון קלקר הבלטת המשטח ולהצמיד רגליים אל פני השטח באמצעות קלטת.</li>
	<li>פתח את הפה באמצעות להקות גומי קטנות סביב החותכות (1 עבור החותכות העליון, ו 1 עבור חותכות נמוך יותר) שנערך במקום על ידי מחטים ארוכות המוצמדים למשטח פוליסטירן מוקצף עם קצף הבלטת תאים.</li>
	<li>למשוך את הלחי הימנית באמצעות מלקחיים מודבק על פני השטח. השתמש מלקחיים כי הם סגורים במצב יציב.</li>
	<li>מניחים את פני השטח עם העכבר בתנוחת עבודה נוחה המאפשרת גישה טוחנות הלסת, באמצעות הגדלה נכונה (מיקרוסקופ המשקפת או מיקרוסקופ קליני) ואור.</li>
	<li>למשוך את הלשון באמצעות מלקחיים או שיניים מרית ולהזריק הרדמה מקומית עם 27 מד מחט לתוך קיפול mucoבוקה בסמוך טוחנת הלסת הראשונה. 25-50 μL זה מספיק. נפיחות של הרקמה סביב האתר ההזרקה צריך להיות דמיינו.</li>
</ol>2. חשיפה זולה
<ol><li>השימוש 1/4 עגול בבור שיניים, או באותו בר יהלום בגודל (שאנק ארוך מומלץ) במהירות של 800 סיבובים לדקה (rpm), מחובר לכל מנוע שיניים מתאים (למשל הפחתת מומנט האוטומטי (ATR) מנוע).</li>
	<li>מקדחה על החלק האחר של טוחנת הלסת הראשונה ימינה עד הקרניים הזולה הם גלויים דרך ה-דנטטין. להשתמש בצרורות קצרים של המנוע כדי למנוע השטח מתחמם.</li>
	<li>השתמש בקובץ K או בקובץ H-file #8 או #10 כדי לנקב את הציפה ולהכניס את הקובץ לתוך הקרניים הזולה (מכאן והמרוחק) על-ידי שבירת ה-דנטל המכסים אותם. קבצים הם מעוקר על ידי החיטוי.</li>
	<li>המשך לעבוד עם הקבצים שבתוך הספרות עמוק ככל האפשר, תוך הרחבת הפתחים עם הקבצים. בדרך כלל יש דימום. גלוי מהעיסה</li>
	<li>הקפד לעגל את הקצוות החדים של השן עם הבור ולהסיר את השן מחסימה, כדי להפחית את הכאב במהלך הניסוי. לנקות את הפסולת במהלך ההליך עם מיקרו מברשת.</li>
	<li>השאר את השן הצלעות (טוחנת הלסת הראשונה השמאלית) כפקד.</li>
</ol>3. סוף הליך קליני
<ol><li>לשחרר את העכבר ממצב הקיבעון ולהזריק האטיפידול IP (10 μL עבור כל גרם של משקל הגוף. זה ייתן מנה אחרונה של (4 מ"ג/ק"ג) אטיפיאזול.</li>
	<li>הכנס בופרנורפין מדולל ב-PBS/תמיסת מלח (0.05 מ"ג/ק"ג) IP (מומלץ להכין כמות של 3 מ ל ביום ההליך). ראה דיון להסבר מדוע ההקלה בכאב הכרחית.</li>
	<li>ודא שהחיות מחלימים מהרדמה לפני שהוא עוזב אותם. תן להם מזון רך כי הם אולי לא מסוגלים לאכול מזון קשה עקב כאבי השן.</li>
</ol>4. המשך טיפול בפרוצדורה (42 ימים)
<ol><li>במשך 3 הימים הראשונים לאחר ההליך, לשקול את החיות ולהזריק בופרנורפין (0.1 מ"ג/ק"ג) IP פעם ביום (מומלץ להכין כמות של 6mL).</li>
	<li>במהלך הניסוי (42 ימים כאשר הדלקת מצטבר) לפקח על בעלי החיים על ידי משקל והערכה כללית התנהגותית 2-3 פעמים בשבוע.</li>
	<li>מספקים מזון רך לבעלי חיים במהלך תקופת המעקב. הרטיב את האוכל במים ושים אותו בצלוחית פטרי על רצפת הכלוב.</li>
</ol>5. הניסוי הסיום והניתוח
<ol><li>כאשר 42 ימים11 של מעקב הושלמו, מורדם בעלי חיים IP עם קטמין/xylazine בריכוז של 106.25 mg/ק"ג, ו 75 mg/Kg xylazine (פתרון מניות 42.5 של מעלות Mg/ml קטמין, ו 1.5 Mg/ML xylazine בנפח כולל של 2 מ ל הוא מומלצים) ופריקה בצוואר הרחם. הערה: ישנן אפשרויות שונות לניתוחים אפשריים כדי להעריך דלקת20,21. כאן ניתוח של הרקמה על ידי מיקרו-CT ו כתמים היסטולוגית יהיה מתואר.</li>
	<li>לאחר המתת חסד, השתמשו במספריים ומלקחיים כירורגיים כדי לגזור חלק מהלסת, כולל 3 טוחנות (בנפרד לכל שליטה על הצדדים ולשליטה שאינה מטופלת). על ידי שימוש מלקחיים לקלף את הרקמה הרך ככל האפשר, עוזב בעיקר עצם ושיניים על המדגם.</li>
	<li>לשטוף את הרקמה לזמן קצר ב-PBS, ולאחר מכן לשים אותו בתוך פאראפורמלדהיד (בלגון) 4% (מדולל ב-PBS) עבור 24-48 שעות עבור קיבעון. התראה: השתמש בכיוון הקרח הכימי במכסה כימי, ובהתאם להנחיות של גיליון הנתונים של בטיחות החומרים (MSDS).</li>
	<li>לאחר 24-48 שעות, לשטוף עם PBS 3x על מנת לשטוף את הלמעלה בלבד.</li>
	<li>מיקרו-CT<ol>
<li>עבור ניתוח מיקרו-CT, לקחת את הרקמות שנקטפו (חלק הלסת התחתונה כולל 3 טוחנות, בממדים של כ 4 מ"מ x 5 mmx 1 מ"מ) לסורק מיקרו-CT, למקם אותם בצינור 12 מ"מ קוטר מלא עם 1.5 mL של PBS בכיוון כך או משטחים לשוני של השן והשורש מונחים במקביל לתחתית הצינור. הפרידו בין הדגימות עם הספוג, וכיסו את החלק העליון של הצינור בסרט גמיש.</li>
		<li>פתחו את לוח הסריקה ובחרו במספר המדידה. בחר את קובץ הבקרה עם הפרמטרים הבאים: אנרגיה של 70 kV, העוצמה של 114 μa, והרזולוציה של 6 יקרומטר3 בגודל voxel.</li>
		<li>לחץ על תצוגת סייר, וכאשר התמונה מופיעה, לחץ על קו התייחסות וסמן את האזור של דגימות לסריקה. לאחר כל לדוגמה לחץ על הוספת סריקה. כשתסיים לסמן את הדגימות, עבור לרשימת המשימות ובחר באפשרות ' התחל משימות אינטראקציה'. הערה: ניתן להשתמש באותם דגימות עבור היסטולוגיה. חשוב שהם לא להתייבש במהלך סריקת CT.</li>
	</ol></li>
	<li>השתמש בתוכנת מחשב מתאימה ליישור וניתוח מיקרו-CT.<ol><li>פתח את המדגם על מישור XY בהערכת מיקרו-CT. בחרו שלוש נקודות על כל אחת מהדוגמאות ליישור: מגדיר את מקור מערכת הקואורדינטות. החלק הקורולי של התעלה המיומנת-מגדיר נקודה על ציר Z. הכיוון המרוחק-מגדיר נקודה במישור XZ.</li>
		<li>השתמשו בכלי המדידה שבלוח השמאלי, וציירו קו שמגיע לכל נקודה. הגדירו כל אחת משלוש הנקודות בערך X, Y & Z, כפי שהוא מופיע בלוח הימני.</li>
		<li>הגדר את אזור העניין במדגם על- ידי בחירת משימה תחת הערכת μctולחץ על הערכה תלת- ממדית. מלבן וחלון עם הממדים לכל ציר יופיעו על המסך. התאם את מידות המלבן כך שיתאימו לאזור העניין בציר ה-XY על-ידי לחיצה בפינות עם הלחצן האמצעי של העכבר. בחר את הממדים בציר Z על-ידי הוספת מספר הפרוסה הראשון המעניין בריבוע Z תחת Voi Start, ומספר הפרוסות מהראשון עד למספר הפרוסה האחרון המעניין בריבוע Z תחת עמעום.</li>
		<li>לחץ על יישומים תחת מנהל ההפעלותובחר decterm. המתן מספר שניות לפתיחת חלון ולאחר מכן הקלד את חמשת השלבים של כתב נטוי משופע המתואר להלן בהתאם להוראות הבאות (בין השורות לחץ על enter): ipl isq_to_aim aim1</li>
		<li>העתק את השם isq (קובץ הריבית): בחר תצוגות תחת מנהל ההפעלות ולחץ על Microctdata. מצא את הקובץ העובד על, ולחץ באמצע על הקובץ. לאחר מכן לחץ באמצע לאחור בחלון של DECterm.</li>
		<li>הזן את ערכי X, Y & Z (עם רווח ביניהם) אשר נקבעו תחת Voi בעת בחירת אזור מעניין.</li>
		<li>הזן את ערכי X, Y & Z (עם רווח ביניהם) שנקבעו תחת עמעום בעת בחירת אזור מעניין.</li>
		<li>המתן עד לקבלת הודעה: isq כדי לכוון הושלם. (שלב ב'-יישור): ליישר z aim1 aim2</li>
		<li>הזן את ערכי X, Y & Z (עם רווח ביניהם) שנקבעו עבור מקור מערכת הקואורדינטות.</li>
		<li>הזן את ערכי X, Y & Z (עם רווח ביניהם) שנקבעו עבור הנקודה על ציר Z.</li>
		<li>הזן את ערכי X, Y & Z (עם רווח ביניהם) שנקבעו עבור הנקודה במישור XZ.</li>
		<li>המתן עד לקבלת הודעה: "align_Z הושלמה" (שלב III-כותרת): כותרת aim2 0 0 0 0 0 0</li>
		<li>לחץ על enter. (שלב IV-המרת הקובץ חזרה ממטרה isq): מיכל ברקן aim2</li>
		<li>העתק את השם isq (קובץ הריבית): בחר תצוגות תחת מנהל ההפעלות ולחץ על נתוני microct. מצא את הקובץ שעליו אתה עובד, ולחץ באמצע על הקובץ. לאחר מכן לחץ באמצע לאחור בחלון של DECterm. מחק (באמצעות "backspace") את ". ISQ "בסוף הקובץ, וכתוב:" _ new. ISQ "כדי לזהות את הקובץ המיושר.</li>
		<li>לחץ על enter | enter.</li>
		<li>המתן עד לקבלת הודעה: "toisq_from_aim הושלמה" (צעד V-להעיף): מיכל שלמה קצת</li>
		<li>העתק את השם isq החדש (קובץ הריבית): בחר תצוגות תחת מנהל ההפעלות ולחץ על נתוני microct. מצא את הקובץ העובד על, ולחץ באמצע על הקובץ. לאחר מכן לחץ באמצע לאחור בחלון של DECterm.</li>
		<li>לחץ על enter | enter. המתן לקבלת הודעה: "isq_to_aim הושלמה" הפוך קצת aa zx המתן לקבלת הודעה: "flip_aim הושלמה" מן aa</li>
		<li>העתק את שם ה-isq החדש: בחר תצוגות תחת מנהל ההפעלות ולחץ על נתוני microct. מצא את הקובץ העובד על, ולחץ באמצע על הקובץ. לאחר מכן לחץ באמצע לאחור בחלון של DECterm. מחק (באמצעות "backspace") את ". ISQ "בסוף הקובץ, וכתוב:" _ flip. ISQ "כדי לזהות את הקובץ המיושר.</li>
		<li>המתן עד לקבלת הודעה: "from_aim_to_isq הושלמה"</li>
	</ol></li>
	<li>Contouring<ol>
<li>בחר את הפרוסה המייצגת בקירוב את מרכז השן, בה מוצגות הספרות הזולה והזולה של שתי התעלות, והוא מוצג בשני הצדדים.</li>
		<li>סימון ידני של מתאר הריבית בפרוסה האמצעית על-ידי לחיצה על חלונית המתאר השמאלית העליונה-החל מהנקודה המסנית של קודקוד השורש המרוחק מסמן את הגבול האפילי לאזור העילי, דרך הגבול ה, של קודקוד השורש בעקבות הגבול המרוחק של השורש והגבול הבין-משני של השורש המרוחק דרך אזור הפריון (ראה איור 3 ב', IV).</li>
		<li>העתק מתאר זה (Ctrl + C, Ctrl + V) והתאם אותו בהתאם ל-5 פרוסות הממוקמות משני צדי הפרוסה האמצעית.</li>
		<li>כדי לחשב את נפח הרקמה של המתאר המסומן עבור כל דוגמה לבחור משימה תחת הערכה μct, ולחץ על הערכה 3d. בחלון ההערכה התלת-ממדית לחץ על בחירה ליד פעילות ובחר מסנן כדי לחשב את נפח הרקמה (טלוויזיה).</li>
	</ol></li>
	<li>יסטולוגיה<ol>
<li>לאחר הסרת הרקמות מסורק מיקרו-CT, decalcify את הרקמות על ידי הצבת כל מדגם בצינור מיקרוצנטריפוגה עם 1 מ ל של חומצה ethylenediamאצטט (EDTA) 0.5 M pH 8.0 עבור 10 ימים. שנה את פתרון ה-EDTA כל 3 ימים.</li>
		<li>התייבשות: דגימות לשים בקלטות היסטולוגית, ו לתוך ריכוזי האתנול הגוברת, שעה כל אחד, כדלקמן: 70% אתנול (בשלב זה התהליך יכול להיעצר במשך מספר שבועות, כל עוד דגימות נשמרות אתנול), 90% אתנול 2x, 100% אתנול 2x, קסילן 2x (זהירות: השימוש קסילן במכסה כימי, ועל פי הנחיות msds שלה).<ol>
<li>העברת קלטות לפרפין נוזלי (60 ° c) והשאירו במכסה הכימי לילה כדי שהקסילן להתאדות.</li>
		</ol>
</li>
		<li>חסימת: השתמש במכונת חסימה היסטולוגית כדי להטביע את הדגימות בפרפין. היזהר להטביע אותם בתנוחה נכונה (כלומר, הכתר והשורשים צריך להיות מונחה במקביל לחלק התחתון של העובש, באופן שהשן היא "שוכב למטה") על מנת לקבל סעיפים משונן. הדגימות מוכנות כעת. לחתוך עם מיקרוטומה</li>
		<li>חיתוך סעיפים: להתחיל על ידי חיתוך פרוסות עבות של ~ 20 יקרומטר עד להגיע לחלק הרלוונטי של רקמות. לאחר הכרה בחלק כלשהו של השן (כתר או שורשים) לשנות סעיפים של 6 μm, ולשנות את זווית החיתוך בהתאם לסעיף הקודם.<ol>
<li>לדוגמה, אם הסעיף הקודם כלל את הכתר אך לא את השורשים, לשנות את זווית הבלוק במיקרוטומה כך השורשים להתקרב הסכין, ואת הכתר חוזר (חלקים של השן ניתן לזהות עם עין עירומה על הבלוק עצמו).</li>
			<li>המשך לכוונן את הזווית עד לקבלת סעיפים משונן, כולל ציפה מקורילית ומפרק, והקודקוד לאמן. גזור בכיוון זה כמה פרוסות ככל האפשר, עד הרקמה הרלוונטית לחתוך.</li>
		</ol>
</li>
		<li>עבור פרוטוקולים כתמים (למשל, Haemotoxylin ו אאוזין צביעת (H & e), חום & בצבע ברנאן, tartrate חומצה עמיד חומצות פוספאטאז (המלכודת) כתמים, אימונוהיסטוכימיה), ראה20,21.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Azuma, M. M., Samuel, R. O., Gomes-Filho, J. E., Dezan-Junior, E., Cintra, L. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+IL-6+on+apical+periodontitis%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22International+Endodontics+Journal%22%5BJournal%5D)">The role of IL-6 on apical periodontitis: a systematic review.</a> International Endodontics Journal. 47 (7), 615-621 (2014).</li>
<li>Marton, I. J., Kiss, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overlapping+protective+and+destructive+regulatory+pathways+in+apical+periodontitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endodontics%22%5BJournal%5D)">Overlapping protective and destructive regulatory pathways in apical periodontitis.</a> Journal of Endodontics. 40 (2), 155-163 (2014).</li>
<li>Graunaite, I., Lodiene, G., Maciulskiene, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+apical+periodontitis%3A+a+literature+review%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oral+and+Maxillofacial+Research%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of apical periodontitis: a literature review.</a> Journal of Oral and Maxillofacial Research. 2 (4), e1(2012).</li>
<li>Hussein, F. E., Liew, A. K., Ramlee, R. A., Abdullah, D., Chong, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+Associated+with+Apical+Periodontitis%3A+A+Multilevel+Analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endodontics%22%5BJournal%5D)">Factors Associated with Apical Periodontitis: A Multilevel Analysis.</a> Journal of Endodontics. 42 (10), 1441-1445 (2016).</li>
<li>Takahashi, K., MacDonald, D. G., Kinane, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+immunoglobulin-synthesizing+cells+in+human+dental+periapical+lesions+by+in+situ+hybridization+and+immunohistochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oral+Pathology+Medicine%22%5BJournal%5D)">Analysis of immunoglobulin-synthesizing cells in human dental periapical lesions by in situ hybridization and immunohistochemistry.</a> Journal of Oral Pathology Medicine. 25 (6), 331-335 (1996).</li>
<li>Lin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enterococcus+faecalis+lipoteichoic+acid+regulates+macrophages+autophagy+via+PI3K%2FAkt%2FmTOR+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Community%22%5BJournal%5D)">Enterococcus faecalis lipoteichoic acid regulates macrophages autophagy via PI3K/Akt/mTOR pathway.</a> Biochemical and Biophysical Research Community. 498 (4), 1028-1036 (2018).</li>
<li>Wu, Y., Sun, H., Yang, B., Liu, X., Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((5-Lipoxygenase+Knockout+Aggravated+Apical+Periodontitis+in+a+Murine+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">5-Lipoxygenase Knockout Aggravated Apical Periodontitis in a Murine Model.</a> Journal of Dental Research. 97 (4), 442-450 (2018).</li>
<li>Barreiros, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemical+and+mRNA+expression+of+RANK%2C+RANKL%2C+OPG%2C+TLR2+and+MyD88+during+apical+periodontitis+progression+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Oral+Science%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemical and mRNA expression of RANK, RANKL, OPG, TLR2 and MyD88 during apical periodontitis progression in mice.</a> Journal of Applied Oral Science. 26, e20170512(2018).</li>
<li>Barreiros, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MMP2+and+MMP9+are+Associated+with+Apical+Periodontitis+Progression+and+Might+be+Modulated+by+TLR2+and+MyD88%5BTitle%5D)+AND+%22Brazillian+Dentistry+Journal%22%5BJournal%5D)">MMP2 and MMP9 are Associated with Apical Periodontitis Progression and Might be Modulated by TLR2 and MyD88.</a> Brazillian Dentistry Journal. 29 (1), 43-47 (2018).</li>
<li>Virtej, A., Papadakou, P., Sasaki, H., Bletsa, A., Berggreen, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VEGFR-2+reduces+while+combined+VEGFR-2+and+-3+signaling+increases+inflammation+in+apical+periodontitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oral+Microbiology%22%5BJournal%5D)">VEGFR-2 reduces while combined VEGFR-2 and -3 signaling increases inflammation in apical periodontitis.</a> Journal of Oral Microbiology. 8, 32433(2016).</li>
<li>De Rossi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cementocytes+Express+Receptor+Activator+of+the+Nuclear+Factor+Kappa-B+Ligand+in+Response+to+Endodontic+Infection+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endodontics%22%5BJournal%5D)">Cementocytes Express Receptor Activator of the Nuclear Factor Kappa-B Ligand in Response to Endodontic Infection in Mice.</a> Journal of Endodontics. 42 (8), 1251-1257 (2016).</li>
<li>Rider, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+CD14+%28Cluster+of+Differentiation+14%29+and+Toll-Like+Receptor+%28TLR%29+4+Signaling+Deteriorate+Periapical+Inflammation+in+TLR2+Deficient+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Anatomy+Records+%28Hoboken%29%22%5BJournal%5D)">Elevated CD14 (Cluster of Differentiation 14) and Toll-Like Receptor (TLR) 4 Signaling Deteriorate Periapical Inflammation in TLR2 Deficient Mice.</a> Anatomy Records (Hoboken). 299 (9), 1281-1292 (2016).</li>
<li>Martins, C. M., Sasaki, H., Hirai, K., Andrada, A. C., Gomes-Filho, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+between+hypertension+and+periapical+lesion%3A+an+in+vitro+and+in+vivo+study%5BTitle%5D)+AND+%22Brazillian+Oral+Research%22%5BJournal%5D)">Relationship between hypertension and periapical lesion: an in vitro and in vivo study.</a> Brazillian Oral Research. 30 (1), e78(2016).</li>
<li>Rao, N. J., Wang, J. Y., Yu, R. Q., Leung, Y. Y., Zheng, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+Periapical+Diseases+in+Medication-Related+Osteonecrosis+of+the+Jaws%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Research+International%22%5BJournal%5D)">Role of Periapical Diseases in Medication-Related Osteonecrosis of the Jaws.</a> Biomedical Research International. 2017, 1560175(2017).</li>
<li>Song, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preexisting+Periapical+Inflammatory+Condition+Exacerbates+Tooth+Extraction-induced+Bisphosphonate-related+Osteonecrosis+of+the+Jaw+Lesions+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endodontics%22%5BJournal%5D)">Preexisting Periapical Inflammatory Condition Exacerbates Tooth Extraction-induced Bisphosphonate-related Osteonecrosis of the Jaw Lesions in Mice.</a> Journal of Endodontics. 42 (11), 1641-1646 (2016).</li>
<li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxic+Preconditioning+Enhances+Dental+Pulp+Stem+Cell+Therapy+for+Infection-Caused+Bone+Destruction%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+A%22%5BJournal%5D)">Hypoxic Preconditioning Enhances Dental Pulp Stem Cell Therapy for Infection-Caused Bone Destruction.</a> Tissue Engineering Part A. 22 (19-20), 1191-1203 (2016).</li>
<li>Eichele, D. D., Kharbanda, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dextran+sodium+sulfate+colitis+murine+model%3A+An+indispensable+tool+for+advancing+our+understanding+of+inflammatory+bowel+diseases+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Dextran sodium sulfate colitis murine model: An indispensable tool for advancing our understanding of inflammatory bowel diseases pathogenesis.</a> World Journal of Gastroenterology. 23 (33), 6016-6029 (2017).</li>
<li>Choudhary, N., Bhatt, L. K., Prabhavalkar, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+animal+models+for+rheumatoid+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Immunopharmacology+and+Immunotoxicology%22%5BJournal%5D)">Experimental animal models for rheumatoid arthritis.</a> Immunopharmacology and Immunotoxicology. 40 (3), 193-200 (2018).</li>
<li>Shah, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clastic+cells+are+absent+around+the+root+surface+in+pulp-exposed+periapical+periodontitis+lesions+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Disease%22%5BJournal%5D)">Clastic cells are absent around the root surface in pulp-exposed periapical periodontitis lesions in mice.</a> Oral Disease. 24 (1-2), 57-62 (2018).</li>
<li>Wan, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MMP9+deficiency+increased+the+size+of+experimentally+induced+apical+periodontitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endodontics%22%5BJournal%5D)">MMP9 deficiency increased the size of experimentally induced apical periodontitis.</a> Journal of Endodontics. 40 (5), 658-664 (2014).</li>
<li>Bezerra da Silva, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MyD88+knockout+mice+develop+initial+enlarged+periapical+lesions+with+increased+numbers+of+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22International+Endod+Journal%22%5BJournal%5D)">MyD88 knockout mice develop initial enlarged periapical lesions with increased numbers of neutrophils.</a> International Endod Journal. 47 (7), 675-686 (2014).</li>
<li>Mehrazarin, S., Alshaikh, A., Kang, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Mechanisms+of+Apical+Periodontitis%3A+Emerging+Role+of+Epigenetic+Regulators%5BTitle%5D)+AND+%22Dental+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Molecular Mechanisms of Apical Periodontitis: Emerging Role of Epigenetic Regulators.</a> Dental Clinics of North America. 61 (1), 17-35 (2017).</li>
<li>Metzger, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+periapical+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Endodontics+Dentisrty+and+Traumatology%22%5BJournal%5D)">Macrophages in periapical lesions.</a> Endodontics Dentisrty and Traumatology. 16 (1), 1-8 (2000).</li>
<li>Lungova, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tooth-bone+morphogenesis+during+postnatal+stages+of+mouse+first+molar+development%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Anatomy%22%5BJournal%5D)">Tooth-bone morphogenesis during postnatal stages of mouse first molar development.</a> Journal of Anatomy. 218 (6), 699-716 (2011).</li>
<li>Zilberstein, L. F., Moens, Y. P., Leterrier, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+local+anaesthesia+on+anaesthetic+requirements+for+feline+ovariectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Journal%22%5BJournal%5D)">The effect of local anaesthesia on anaesthetic requirements for feline ovariectomy.</a> Veterinary Journal. 178 (2), 214-218 (2008).</li>
<li>Kaufman, E., Epstein, J. B., Gorsky, M., Jackson, D. L., Kadari, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preemptive+analgesia+and+local+anesthesia+as+a+supplement+to+general+anesthesia%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesia+Progress%22%5BJournal%5D)">Preemptive analgesia and local anesthesia as a supplement to general anesthesia: a review.</a> Anesthesia Progress. 52 (1), 29-38 (2005).</li>
<li>Song, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+Direct+Pulp-capping+Model+for+the+Evaluation+of+Pulpal+Wound+Healing+and+Reparative+Dentin+Formation+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visual+Experimentalization%22%5BJournal%5D)">Development of a Direct Pulp-capping Model for the Evaluation of Pulpal Wound Healing and Reparative Dentin Formation in Mice.</a> Journal of Visual Experimentalization. (119), (2017).</li>
<li>Yoneda, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+root+canal+treatment+model+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Development of a root canal treatment model in the rat.</a> Scientific Reports. 7 (1), 3315(2017).</li>
<li>AlShwaimi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+T+cells+in+mouse+periapical+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endodontics%22%5BJournal%5D)">Regulatory T cells in mouse periapical lesions.</a> Journal of Endodontics. 35 (9), 1229-1233 (2009).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף

שיטה מוצגת כאן עבור אינדוקציה של חניכיים פסגה בעכברים. מטרת השיטה היא לנצל את המצב חניכיים פסגה למחקר מנגנונים ותוצאות של תהליך דלקתי זה. חניכיים apical המושרה ב 6-8 בשבוע עכברים ישנים, גיל שבו השורשים מפותחים במלואו24. כדי לגרום חניכיים פסגה במודל זה, עיסת השן של טוחנות הלסת התחתונה נחשף באמצעות בור שיניים. חיידקים מן הצומח אוראלי של העכברים (בתנאי SPF) לפלוש התעלות הזולה והשורש של השיניים, גרימת נמק הזולה, ו lps הפרשה לרקמות פסגה, אשר מפעיל דלקת פסגה.
בעת...

המטרה של שיטה זו היא לגרום חניכיים פסגה בעכבר על ידי מזהם את הפיסגה עם microflora טבעי, ולאחר מכן ללמוד מאפיינים שונים של התהליך הזה פתולוגי.
חניכיים apical (AP) היא פתולוגיה נפוצה של טבע דלקתי ברקמות חניכיים המקיפים את שורש השן. זו מחלת שיניים יכול לגרום לכאב חמור יש לטפל על ידי רופא שיניים. אפשרויות הטיפול כוללות טיפול שורש (ראשי או משני), ניתוח אנדודונטי, מיצוי השן, או מעקב בהתאם לממצאים הקליניים והרדיוגרפיים, ולדעתו של המטפל. מנגנון התהליך הדלקתי, למרות שנחקר במשך מספר עשורים1,2,3, עדיין אינו מובן באופן מקיף. בהתחשב בחומרת הפתולוגיה הזו, יש לפיכך צורך ברור למחקר הפונה לטבעה הבסיסי. לפיכך, מערכות שבהן המחקר של AP אפשרי הן עניין מדעי רב.
מאחר שAP הוא תהליך פתולוגי מורכב הכרוך ברקמות המקומיות ובמערכת החיסונית, אין מספיק להבנת התהליכים במחקרים מחוץ לתחום. המחקר של דגימות קליניות של מחלה זו הם גם בעייתי בשל מגבלות אתיות והשתנות משמעותית בין אנשים שונים ושלבים קליניים שונים4,5, ומכאן את הצורך במודלים vivo. מודלים אלה מבוססים על הרעיון של חשיפת עיסת שיניים לזיהום והתבוננות התגובה הדלקתית של הגוף לגירוי זה ברקמות periapical6,7. נפוץ במודלים vivo כוללים מכרסמים או חיות גדולות כגון כלבים. למרות האתגר הקליני בטיפול בעכברים, שהם בעלי חיים קטנים מאוד עם שיניים זעירות, היתרונות של מודל העכבר הם משמעותיים: כמעט, עבודה עם עכברים היא פשוטה טכנית במונחים של מתקנים הוא העלות האפקטיבית ביותר, ו מדעית, העכבר הוא מודל לומד היטב עם כלים גנטיים ומולקולריים זמין בקלות וגנום למד היטב. אכן, המחקרים הקודמים השתמשו במודל העכבר לחקר אותות דלקתיות העצם ותאים מעורבים ב-פסגה חניכיים8,9,10,11. לכן, יש צורך בפרוטוקול ברור לגבי אופן השימוש במודל עכבר לחקר AP. . כאן, אנחנו מתארים נוהל כזה
הפרוטוקול המתואר כאן הוא בעל יתרון גדול של להיות מתאים ללמוד לנקוש (KO) עכברים וללמוד כיצד העדר גן ספציפי משפיע על דלקת שיניים7,12. יישומים שימושיים אחרים של פרוטוקול זה כוללים את המחקר של ההשפעות של תרופות ותנאים מערכתית על התפתחות חניכיים פסגה13, ההשפעה של חניכיים פסגה על התפתחות של מלתעות14 , 15 וטיפול בתאי גזע להתחדשות העצם16.
פרוטוקול זה יכול להיות גם כללית כמודל כדי ללמוד דלקת מקומית. כדי ללמוד את התהליך הדלקתי, כמה מודלים העכבר פותחו, אשר כוללים למשל קוליטיס המושרה או דלקת מפרקים17,18. למודלים אלה יש השפעות מערכתיות ואין להם שליטה מובנית באותה חיה. מודלים עבור חניכיים המושרה פסגה, אשר כוללים שליטה באמצעות צלעות ללא דלקת, יש את היתרון של התגברות על מגבלות אלה14,19.
הפרוטוקול המתואר להלן שימושי לפיכך לחוקרים המעוניינים בתהליכים דלקתיים מקומיים. האופי הנשלט של דלקת זו, הבידוד שלה למיקום מסוים, ואת השן בקרת הצלעות הקשורות, כל להפוך את הפרוטוקול הזה חשוב ללמוד את המנגנונים המעורבים בתהליך זה. יתר על כן, הפרוטוקול הוא שימושי עבור החוקרים המעוניינים בהיבטים הקליניים של דלקת periapical. מודל העכבר הוא אידיאלי כדי ללמוד משתנים שונים של המחלה, בנוסף ליתרון של היכולת לבצע בקלות מניפולציות גנטיות במודל העכבר, כדי לחקור את הפעילות של גנים ספציפיים בדלקת periapical.
מבחינה טכנית, ההליך הקליני הוא מאתגר לבצע בגלל הממדים הקטנים של השיניים עכברים. זה יהיה מועיל להמחיש הליך זה כדי ללמוד על מיצוב, הציוד הדרוש, וביצועים.

<table><tbody><tr><td>Atipamezole hydrochloride</td><td>Eurovet Animal Health</td><td>CAS 104075-48-1</td><td></td></tr><tr><td>ATR</td><td>dentsply</td><td>tecnika</td><td></td></tr><tr><td>חסימת מכונה</td><td>Leica</td><td>EG1150H</td><td></td></tr><tr><td>buprenorphine</td><td>vetmarket</td><td>163451</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ קליני/משקפת</td><td>אולימפוס</td><td>Sz61</td><td></td></tr><tr><td>שיניים בור</td><td>Komet שיניים</td><td>ZR8801L 315 008</td><td></td></tr><tr><td>מרית שיניים</td><td>פרמייר</td><td>1003737</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>J.T Baker</td><td>8993</td><td></td></tr><tr><td>אנטלן</td><td>מרקורי</td><td>1.07961</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת Eosin Y,</td> תמיסת <td>SIGMA</td><td>אלכוהולית HT110116</td><td></td></tr><tr><td>המטוקסילין,</td><td>SIGMA</td><td>MHS 16</td><td></td></tr><tr><td>קטמין הידרוכלוריד</td> <td>של מאיירVetoquinol</td><td>CAS 1867-669</td><td></td></tr><tr><td>Medetomidine hydrochloride (cepetor)</td> <td>CP-pharma GmbH</td><td>CAS 86347-15-1</td><td></td></tr><tr><td>Mepivacaine HCl 3%</td> <td>טבע</td><td>CAS 96-88-8</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו-מברשות - אפליקטורים מדויקים מתכווננים</td><td>PARKELL</td><td>S379</td><td></td></tr><tr><td>סורק מיקרו-ct</td><td>scanco</td><td>uCT 40</td><td></td></tr><tr><td>parafin</td><td>Leica</td><td>39602004</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>SIGMA</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>PFA</td><td>EMS</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>משחת עיניים כלורמפניקול (5%)</td><td>Rekah pharmaceutical</td><td>CAS 56-75-7</td><td></td></tr><tr><td>פינצטה</td><td>WAM</td><td>Ref-CT</td><td></td></tr><tr><td>קסילזין</td><td>Eurovet בריאות בעלי חיים</td><td>CAS 7361-61-7</td><td></td></tr><tr><td>קסילן</td><td>גדות</td><td>CAS 1330-20-7</td><td></td></tr></tbody></table>

לגרימת חניכיים הרשמי בעכברים

Inducing Apical Periodontitis in Mice

המנגנונים המעורבים בדלקות המושרה מקומי ניתן ללמוד באמצעות מספר מודלים בעלי חיים זמינים. אחד מאלה הוא אינדוקציה של חניכיים הרשמי (AP). חניכיים apical היא פתולוגיה נפוצה של טבע דלקתי ברקמות חניכיים המקיפים את שורש השן. כדי להבין טוב יותר את הטבע ואת המנגנון של הפתולוגיה הזו הוא יתרון לבצע את ההליך בעכברים. אינדוקציה של דלקת זו הדונטוגניים מושגת על ידי קידוח לתוך השן של העכבר עד עיסת השיניים נחשף. הבא, עיסת השן נשאר חשוף להיות מזוהם על ידי פלורה טבעי אוראלי לאורך זמן, גרימת חניכיים פסגה. לאחר זמן זה, מוקרב החיה, וניתן לנתח את השן ואת עצם הלסת בדרכים שונות. ניתוחים טיפוסיים כוללים הדמיה מיקרו-CT (כדי להעריך את ספיגת העצם), כתמים היסטולוגית, אימונוהיסטוכימיה, ו-RNA ביטוי. פרוטוקול זה שימושי עבור מחקר בתחום של ביולוגיה אוראלית כדי להבין טוב יותר זה תהליך דלקתי בהגדרה vivo ניסיוני עם תנאים אחיד. ההליך מחייב טיפול קפדני של העכברים והלסת המבודדת, והדגמה חזותית של הטכניקה שימושית. כל ההיבטים הטכניים של ההליכים המובילים חניכיים פסגה המושרה האפיון שלה במודל העכבר מומחש.

תרשים זרימה של הצעדים הניסיוניים מוצג באיור 1. כפי שהוזכר בפרוטוקול, העכברים מורדם, ואת טוחנת הלסת התחתונה הראשונה שלהם בצד אחד הוא קדח עד חשיפה זולה, בעוד השן הצלעות הצדדית נשאר כפקד. הבא, השיניים נותרו להיות מזוהמים על ידי פלורה אוראלי עבור 42 ימים, במהלכו הם מנוטרים ולקבל תרופות לכאב. לאחר 42 ימים, עכברים מורדמים, והשיניים והלסת הסמוכה נלקחים לניתוח.
איור 2 מדגים את ...

כאן, אנו מציגים פרוטוקול מקומי לגרום חניכיים פסגה בעכברים. אנו מראים כיצד לקדוח חור בשן העכבר ולחשוף את הציפה שלו, כדי לגרום לדלקת מקומית. ניתוח שיטות לחקור את טבעו של דלקת זו, כגון מיקרו-CT ו היסטולוגיה, מומחש גם.

The mechanisms involved in local induced inflammation can be studied using several available animal models. One of these is the induction of apical ...

הפרוטוקול שלנו מאפשר חקר של דלקת קרום המוח פריאפית במודל עכבר נגיש ומבוקר. לכן, פרוטוקול זה יש יתרונות על פני דגימות המטופל או מודלים במבחנה. היתרונות העיקריים של טכניקה זו הם כי העכבר נחקר היטב, כי השיטה היא פשוטה מבחינה טכנית במונחים של דרישות המתקן והוא חסכוני.כמו הליך זה הוא מאתגר בשל הממדים הקטנים של השיניים, זה מועיל לדמיין את ההליך כדי ללמוד על המיקום והביצועים של הטכניקה. לאחר אישור חוסר תגובה לצביטת בוהן, מניחים את העכבר בצד היד הדומיננטי על משטח קצף פוליסטירן מובלט בתא סגור ומאבטחים את הכפות בקלטת. באמצעות גומייה אחת לכל זוג חותכים, ומחטים ארוכות מוצמדות למשטח קצף פוליסטירן מובלט בתא סגור, תומכים בפה פתוח.השתמש מדפים סגורים מודבקים לקצף כדי לחזור בו הלחי הימנית. ומ מניחים את הקצף והעכבר תחת מיקרוסקופ ומקור אור. לאחר מכן, לסגת את הלשון באמצעות מרית שיניים ולהשתמש מחט מד 27 להזריק 25 כדי 50 microliters של הרדמה מקומית לתוך קיפול ריר סמוך טוחנת הים הראשון.יש לצפות בנפיחות ברקמות סביב אתר ההזרקה. כדי לחשוף את עיסת, להשתמש בכל מנוע שיניים מתאים מצויד עגול, יהלום במהירות גבוהה 0.8 מילימטר בר שיניים במהירות של 800 סיבובים לדקה, כדי לקדוח את החלק occlusal של טוחן הים הימני הראשון עד קרני עיסת גלויים דרך דנטין. השתמש בקובץ K או H, מספר שמונה או מספר 10 כדי לנקב את העיסה ולשבור את הדנטין המכסה את קרני העיסה המסיאליות והדיסטליות כדי לאפשר הכנסת הקובץ לתוך הקרניים.המשך לעבוד עם הקבצים בתוך עיסת עמוק ככל האפשר תוך הרחבת הפתחים עם הקבצים, דימום מן העיסה הוא ציין בדרך כלל סביב הקצוות החדים של השן עם bur ולהסיר את השן מן aclusion כדי להפחית את הכאב במהלך הניסוי. השתמש במברשת מיקרו כדי לנקות את כל הפסולת. ולהשאיר את התבונה השמאלית ההפוזרתית הראשונה כשליטה.במשך שלושת הימים הראשונים לאחר ההליך, משקלל את בעלי החיים והזריק 0.1 מיליגרם לקילוגרם של buprenorphine תוך-אפית פעם ביום. המשך לעקוב אחר בעלי החיים במהלך 42 הימים הבאים על ידי שקילה והערכה התנהגותית כללית פעמיים עד שלוש פעמים בשבוע. ולספק כדורי מזון מרוככים במים בצלחת פטרי על רצפת הכלוב לאורך כל תקופת המעקב.בסוף הניסוי, השתמש במספריים כירורגיים ומדפים כדי לאסוף את החלק של הלסת הכולל את שלושת הטוסוחים הן בצדדים המטופלים והן בצדדים שאינם מטופלים. ולהשתמש במקלפים כדי לקלף כמה שיותר של הרקמה הרכה ככל האפשר, משאיר בעיקר עצם ושיניים על הדגימות. יש לשטוף את הרקמה לזמן קצר ב-PBS.לפני קיבעון בארבעה אחוזים paraformaldehyde במשך 24 עד 48 שעות. ואז לשטוף את הדגימות שלוש פעמים PBS טרי. עבור טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת, או ניתוח מיקרו-CT מקם את הרקמות שנקטפו בצינור בקוטר 12 מ"מ המכיל 1.5 מיליליטר של PBS על במת הסורק.עם הדגימות מכוונות כך משטחים buccal או לשוני של השן ואת השורש שכב במקביל לתחתית הצינור. השתמש בספוג כדי להפריד את הדגימות. ולכסות את החלק העליון של הצינור עם סרט גמיש.בחר את קובץ הבקרה והגדר את האנרגיה ל- 70 קילו-וולט, את העוצמה ל- 114 מיקרו אמפר ואת הרזולוציה לגודל Voxel עם קוביות של שישה מיקרומטר. לחץ על תצוגת צופים. כאשר התמונה מופיעה, לחץ על קו הפניה וסמן את אזור הדוגמאות לסריקה, תוך לחיצה על הוסף סריקה לאחר כל דגימה.לאחר שסומנו כל הדוגמאות, עבור אל רשימת המשימות ובחר התחל משימות אינטראקציה. לקווי המתאר של פרוסות המיקרו-CT, בחרו את הפרוסה המייצגת את האמצע המשוער של השן, שבו נמצאים עיסת קורונאל, עיסת ראדיקולר של שתי התעלות, ושני האפורים האפורים. לחץ על לוח קווי המתאר, ומתחיל מנקודת הדיסטלית של שאפקס השורש הדיסטלי, סמן את הגבול האפילמי עד לאזור הקוף הרדיאלי פאק, דרך הגבול המחיק של שאפקס השורש הקסיאלי, בעקבות הגבול הדיסטלי של השורש הקסיאלי, ואת הגבול הקסיאלי של השורש הדיסטלי, דרך אזור הזעם.העתיקו והדביקו את קווי המתאר המתקבלים, והתאיימו את קווי המתאר בהתאם לחמש פרוסות המוצבות משני צדי הפרוסה האמצעית. כדי לחשב את נפח הרקמה של קווי המתאר המסומנים עבור כל דגימה, תחת הערכת מיקרו-CT, בחר משימה ולחץ על הערכת תלת-מימד. לאחר מכן, בחלון של הערכת תלת-מימד, לחץ על בחר ובחר מסנן לחישוב עוצמת הקול של הרקמה.בסוף ניתוח מיקרו-CT, להעביר את הרקמות מהסורק לצינור מיקרו צנטריפוגה המכיל מיליליטר אחד של EDTA במשך 10 ימים. בסוף המ decalcification, למקם את הדגימות לתוך קלטות היסטולוגיות המכילות הגדלת ריכוזי אתנול, במשך שעה אחת לכל ריכוז. לאחר טבילת האתנול השנייה, מעבירים את הדגימות לקסילן לטבילה של שעתיים, לפני שמעבירים את הקלטות לפרפין נוזלי של 60 מעלות צלזיוס במכסה המנוע הכימי בן לילה כדי לאפשר לקצילן להתאדות.למחרת בבוקר, מניחים את הדגימות המיובשים עם הכתר והשורשים המכוונים במקביל לתחתית התבנית, במכונת חסימה היסטולוגית כדי להטמיע את הדגימות בפרפין. כדי להשיג חלקים, לאבטח את דגימת בלוק פרפין על בלוק חיתוך מיקרוטון, לקצץ את המדגם עד רקמת העניין הוא הגיע. כאשר כל חלק של השן גלוי, להתחיל להשיג שישה חלקים עבים מיקרומטר, התאמת זווית החיתוך עד קטעי קשת הכוללים עיסת coronal ו radicular ואת foramen apical מתקבלים.כאן מוצגת התמדה מטופלת שלמה. הגדלה של הסחבת הימנית הראשונה המטופלת, מאפשרת התבוננות בחשיפה של קרני עיסת המזיאליות והדיסטליות והכניסה לתעלות. הדמיית מיקרו-CT מאפשרת הדמיה של החשיפה לעיסה ה mesial, ואת האזורים רדיולנציאליים mesial ו דיסטלי של resorbtion העצם.ואכן, שינוי משמעותי של עצם פריאפית של נפח הרקמה נמדד בשיניים המטופלות, בהשוואה לפקדים. ניתוח היסטולוגי מציין כי בשן המטופלת, עיסת השיניים עצמה מציגה נמק, אשר ניתן לראות בבירור לאחר כתמי H ו- E בהשוואה לשליטה רקמת עיסת מאורגן. בנוסף, וחשוב מכך, באזור ההפיזי של השן המטופלת, נצפה הנגע האפורי המורכב מתאים חיסוניים, הנעדר בשני הבקרה.זה חיוני כדי למקם את העכבר כראוי במהלך החשיפה עיסת כמו מיקום נכון מאפשר גישה טובה לפה של החיה ותוצאות אופטימליות. שיטות נוספות של ניתוח דלקת פריאפית כגון כתמי רקמות אימונוהיסטוכימיים ופקס וניתוח מולקולרי מפורט של התאים ניתן לבצע בעקבות פרוטוקול זה. פרוטוקול זה הוא משמעותי, לא רק למחקר שיניים, אלא גם למחקר אימונולוגי, כפי שהוא מספק מודל לדלקת מקומית המושרה עם שליטה פנימית מובנית.

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

מודלים של בעלי החיים הוכיחו להיות כלי רב ערך בהגדרת מנגנונים ספציפיים מארח ופתוגן שתורמים להתפתחות של דלקת כרונית. כאן אנו מתארים מודל עכבר של זיהום אוראלי עם הפתוגן האנושי Porphyromonas gingivalis ומתודולוגיות פרט כדי להעריך את ההתקדמות של דלקת באתרים מקומיים ומערכתיים.

מודל של עכברים של דלקת כרונית הנגרם על ידי פתוגן באתרים מקומיים ומערכתיים

מאמר זה מציג פרוטוקול להקמת מודל המושרה לקשירה של חניכיים מורטין מעורבים טוחנות הלסת הכפולה מרובים, וכתוצאה מכך אזורים גדולים יותר של רקמת חניכיים מעורב ועצם עבור ניתוח עוקבות, כמו גם השימוש מופחת בעלי חיים. טכניקה להערכת נויטרופילים אוראלי באופן אנלוגי לנושאים אנושיים מתואר גם.

מודל חזק המושרה לקשירה של חניכיים Murine להערכת הנויטרופילים אוראלי

במחקר זה, מודל חולדה של השראת דלקת חניכיים מוצג באמצעות שילוב של ליגטורה חוזרת וזריקות חוזרות ונשנות של ליפופוליסכריד שמקורו בפורפירומונס חניכיים, במשך 14 יום סביב הטוחנות המקסילריות הראשונות. טכניקות הקשירה וההזרקה LPS היו יעילות בגרימת דלקת פרידונטיקה, וכתוצאה מכך אובדן עצם מכתשית ודלקת.

השראת דלקת חניכיים באמצעות שילוב של ליגטורה והזרקת ליפופוליסכריד במודל חולדה

מאמר זה מציג פרוטוקול יעיל לביסוס מודל דלקת מוך בעכברים באמצעות גאג פה חדשני, ואחריו ניתוח היסטולוגי עוקב.

הקמת מודל חשיפה למועיסת מוך עם פיו חדשני לחקר דלקת הדוכן

זהו דו"ח על מודל ניסיוני של peri-implantitis המושרה על ידי ליגטורה בעכברים. אנו מתארים את כל השלבים הכירורגיים, החל מניהול לפני ואחרי הניתוח של בעלי החיים, עקירות, מיקום שתלים ודלקת פרי-אימפלנטיטיס הנגרמת על ידי ליגטורות.

מודל ניסיוני של פרי-אימפלנטיטיס הנגרמת על ידי ליגטורה בעכברים

מחקר זה מתאר שיטת קשירת ניילון 6-0 שונה להשראת דלקת חניכיים בעכברים, הניתנת לשחזור מאוד ומהווה אלטרנטיבה לחוקרים לחקור מחלות חניכיים מהתפתחותה ועד לתוצאותיה הפתולוגיות.

מודל עכברי של דלקת חניכיים מתקדמת הנגרמת על ידי קשירת ניילון בטוחנות העליונות השנייה

הלב heterotopic העכבר מודל השתלת הוכח על ידי חוקרים רבים להיות שיטה חשובה לחקר המנגנונים של דחייה התגובה החיסונית. עם זאת, טכניקות מעורבות עדיין מאתגרת. על ידי שינוי שיטות סטנדרטיות יש לנו הצלחה עם יותר מ 1000 השתלות.

השתלת הלב Heterotopic ב עכברים

המעי הדק העכבר מודל השתלת הוכר ככלי חשוב ללמוד mechanismes הדחייה החיסונית מסך תרופות מדכאות חיסון חדש. עם זאת, מודל זה הוא מוגבל לשימוש בגלל טכניקות מעורב הוא אתגר מאוד מבחינה טכנית. עכשיו אנחנו מציגים את הטכניקה שונה.

מעי והשתלות קטן עכברים

היצרות העורקים רוחבי (TAC) על העכבר הוא מודל ניסיוני נפוץ ללמוד המנגנונים היפרטרופיה לב ואי ספיקת לב הפיתוח. כאן אנו מתארים נהלים להתכווץ אבי העורקים כדי ליצור תואר לשחזור של היפרטרופיה לב בעכברים.

אבי העורקים צמצום רוחבי של עכברים

Telemetric א.ק.ג. התפתחה ככלי חיוני להערכת במודלים של בעלי חיים על הפרעות בקצב הלב או מוות קרדיאלי פתאומי. כאן, אנו מציגים מדריך בשלבים להקלטות telemetric א.ק.ג. עבור היישום לניטור ארוך טווח א.ק.ג. אמבולטורי בעכברים.

רישום א.ק.ג. אמבולטורי ב עכברים

למדו לגרום לחניכיים הרשמי בעכברים באמצעות חשיפת שורשי שן וזיהום מבוקר. פרוטוקול זה מאפשר ניתוח מיקרו-CT והיסטולוגיה של דלקת מקומית וספיגת עצם.

לגרימת חניכיים הרשמי בעכברים

גלה סרטונים נוספים