Name: פגיעה באיבר איסכמיה-רפרופוזיה על ידי הדמיית שינויים המודינמיים במודל השתלת כבד עכברוש (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-03-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 7 s
Description: חקור פגיעת איסכמיה-רפרפוזיה באיברים חוץ-כבדיים במודל השתלת כבד בעכברוש. שיטה זו משלבת הדמיית שינויים המודינמיים ומספקת בסיס למחקר בסיסי בתחום השתלות הכבד.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ברצוננו להכיר בהצעות השימושיות שניתנו על ידי ד"ר וון-טאו לי וד"ר ג'י-הואה וו מבית החולים השני המסונפים של האוניברסיטה הרפואית גואנגשי. המחברים רוצים להודות לחברי הצוות שלנו על הערות ודיונים שימושיים. המחברים גם רוצים להודות לסוקרים ולעורכים האנונימיים של JoVE על הערותיהם. תודה מיוחדת צריכה ללכת להוריו של ד"ר יואן על תמיכתם המתמשכת ועידודם. העבודה נתמכה על ידי הקרן למדעי הטבע Ningbo (2014A610248).

ועדת האתיקה של בעלי החיים אישרה את הניסוי של האוניברסיטה הרפואית גואנגשי (No20190920). כל בעלי החיים סופקו על ידי המרכז לניסויים בבעלי חיים של האוניברסיטה הרפואית גואנגשי. השתמשנו בחולדות Sprague Dawley זכר SPF (200-250 גרם, 10-12 שבועות), נשמר תחת טמפרטורת החדר של 25 ± 2 מעלות צלזיוס ולחות של 50 ± 10%. האכלה הופסקה 24 שעות לפני הניתוח; עם זאת, סופקו מים.
הערה: מפעיל אחד יכול לבצע את כל הפעולות ללא בסיס מיקרוכירורגיה או מיקרוסקופ כירורגי.
1. מבצע
<ol><li>לאחר שקילה, יש לה רדום את החולדות עם isoflurane (5%) באמצעות מכונת הרדמה לבעלי חיים.</li>
	<li>לאחר 1-2 דקות, בעדינות מהדקים את בהונות החולדה בפינצטה. אם החולדה אינה מגיבה לאחר צביטה, היא נכנסה למצב של הרדמה. השתמש משחה וטרינר על העיניים כדי למנוע יובש. השתמש מנורות חימום בעלי חיים כדי לשמור על טמפרטורת הגוף של החולדות ב 37-38 מעלות צלזיוס.</li>
	<li>לאחר חיטוי בטן (פתרון יוד povidone), לתקן את החולדה על שולחן ניתוח בעלי חיים. בצע חתך חציוני של 3 ס"מ מתחת לתהליך xiphoid באמצעות מלקחיים ומספריים.</li>
	<li>פתח את חלל הבטן, לחשוף את הכבד באמצעות מפשק, ולגייס את הרצועה hepatogastric. השתמש ספוגיות כותנה כדי להפוך את האונה האמצעית של הכבד בעדינות ולהפוך אותו כלפי מעלה כדי לחשוף את הפטיס פורטה. זהה את CBD, PV ו- HA.</li>
	<li>לדחוף את המעי הדק לכיוון חלל הבטן התחתון השמאלי באמצעות ספוגיות כותנה, לכסות אותו עם גזה רטובה, ולהעביר את הווריד הווריד התוך-הפטי לווריד הכליה הימני.</li>
	<li>לבודד את וריד הפורטל, עורק הכבד, ואת הווריד הווריד הווריד הנחות מעל וריד הכליה הימני עם עדשה תוך עינית ומלקחיים המסומנים בחוט משי 3-0, כל אחד עם קשר להחליק.</li>
	<li>חותכים לפתוח את העור השמאלי והימני בגפיים התחתונות ולחשוף את וריד הירך באמצעות מלקחיים עיניים. לאט להזריק הפרין משקל מולקולרי נמוך 625 IU/kg דרך וריד הירך כדי heparinize את כל הגוף.</li>
	<li>לייגייט וריד הפורטל, עורק הכבד, ו vena קאווה נחות מעל וריד הכליות הימני עם מספר 3-0 תפרים, שנמשך 45 דקות (איור 1). החלף את המעי הדק בחלל הבטן ולכסות אותו עם גזה. להפחית הרדמה שאיפה בתקופות אלה.</li>
	<li>לאחר 45 דקות, לשחרר את וריד הפורטל, עורק הכבד, ואת הווריד הווריד נחות מעל וריד הכליה הימני.</li>
	<li>לתפור את השריר והעור, שכבה אחר שכבה, ולסיים את ההרדמה בשאיפה. לספק משכך כאבים לאחר הניתוח באמצעות מורפיום תת עורי של 5 מ"ג / קילוגרם כל 4 שעות.</li>
	<li>שימו לב לחולדה עד שהיא מתעוררת וניזונים בטמפרטורה של 25 ± 2 מעלות צלזיוס ולחות של 50 ± 10%. מנורות חימום בעלי חיים נחוצות.</li>
</ol>

<ol><li>Dar, W. A., Sullivan, E., Byon, J. S., Eltzschig, H., Ju, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischaemia+reperfusion+injury+in+liver+transplantation%3A+Cellular+and+molecular+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+International%22%5BJournal%5D)">Ischaemia reperfusion injury in liver transplantation: Cellular and molecular mechanisms.</a> Liver International. 39 (5), 788-801 (2019).</li>
<li>Qiao, P. F., Yao, L., Zhang, X. C., Li, G. D., Wu, D. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat+shock+pretreatment+improves+stem+cell+repair+following+ischemia-reperfusion+injury+via+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Heat shock pretreatment improves stem cell repair following ischemia-reperfusion injury via autophagy.</a> World Journal of Gastroenterology. 21 (45), 12822-12834 (2015).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+YAP+attenuates+hepatic+damage+and+fibrosis+in+liver+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Activation of YAP attenuates hepatic damage and fibrosis in liver ischemia-reperfusion injury.</a> Journal of Hepatology. 71 (4), 719-730 (2019).</li>
<li>Hirao, H., Dery, K. J., Kageyama, S., Nakamura, K., Kupiec-Weglinski, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heme+Oxygenase-1+in+liver+transplant+ischemia-reperfusion+injury%3A+From+bench-to-bedside%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radical+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Heme Oxygenase-1 in liver transplant ischemia-reperfusion injury: From bench-to-bedside.</a> Free Radical Biology and Medicine. 157, 75-82 (2020).</li>
<li>Motiño, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+role+of+hepatocyte+cyclooxygenase-2+expression+against+liver+ischemia-reperfusion+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Protective role of hepatocyte cyclooxygenase-2 expression against liver ischemia-reperfusion injury in mice.</a> Hepatology. 70 (2), 650-665 (2019).</li>
<li>Guo, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+search+for+a+magic+bullet+to+fight+multiple+organ+failure+secondary+to+ischemia%2Freperfusion+injury+and+abdominal+compartment+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">The search for a magic bullet to fight multiple organ failure secondary to ischemia/reperfusion injury and abdominal compartment syndrome.</a> Journal of Surgical Research. 184 (2), 792-793 (2013).</li>
<li>Elham, M., Mahmoudi, M., Nassiri-Toosi, M., Baghfalaki, T., Zeraati, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post+liver+transplantation+survival+and+related+prognostic+factors+among+adult+recipients+in+tehran+liver+transplant+center%3B+2002-2019%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Iranian+Medicine%22%5BJournal%5D)">Post liver transplantation survival and related prognostic factors among adult recipients in tehran liver transplant center; 2002-2019.</a> Archives of Iranian Medicine. 1 (23), 326-334 (2020).</li>
<li>Kim, E. H., Ko, J. S., Gwak, M. S., Lee, S. K., Kim, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+and+clinical+significance+of+hyperfibrinolysis+during+living+donor+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Coagulation+and+Fibrinolysis%22%5BJournal%5D)">Incidence and clinical significance of hyperfibrinolysis during living donor liver transplantation.</a> Blood Coagulation and Fibrinolysis. 29 (3), 322-326 (2018).</li>
<li>Czigány, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+research+practice+in+rat+orthotopic+and+partial+orthotopic+liver+transplantation%3A+a+review%2C+recommendation%2C+and+publication+guide%5BTitle%5D)+AND+%22European+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Improving research practice in rat orthotopic and partial orthotopic liver transplantation: a review, recommendation, and publication guide.</a> European Surgical Research. 55 (1-2), 119-138 (2015).</li>
<li>Kamada, N., Calne, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat.+Technique+using+cuff+for+portal+vein+anastomosis+and+biliary+drainage%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Orthotopic liver transplantation in the rat. Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage.</a> Transplantation. 28 (1), 47-50 (1979).</li>
<li>Zimmermann, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+for+orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat+and+some+studies+of+the+immunologic+responses+to+fully+allogeneic+liver+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation+Proceedings%22%5BJournal%5D)">Techniques for orthotopic liver transplantation in the rat and some studies of the immunologic responses to fully allogeneic liver grafts.</a> Transplantation Proceedings. 11 (1), 571-577 (1979).</li>
<li>Miyata, M., Fischer, J. H., Fuhs, M., Isselhard, W., Kasai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat.+Cuff+technique+for+three+vascular+anastomoses%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">A simple method for orthotopic liver transplantation in the rat. Cuff technique for three vascular anastomoses.</a> Transplantation. 30 (5), 335-338 (1980).</li>
<li>Kamada, N. A., Calne, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+experience+with+five+hundred+thirty+liver+transplants+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Surgical experience with five hundred thirty liver transplants in the rat.</a> Surgery. 93 (1), 64-69 (1983).</li>
<li>Yang, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rat+model+of+orthotopic+liver+transplantation+using+a+novel+magnetic+anastomosis+technique+for+suprahepatic+vena+cava+reconstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A rat model of orthotopic liver transplantation using a novel magnetic anastomosis technique for suprahepatic vena cava reconstruction.</a> Journal of Visualized Experiments. 19 (133), e56933(2018).</li>
<li>Liu, L. X., He, C., Huang, T., Gu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+new+technique+for+reconstruction+of+hepatic+artery+during+liver+transplantation+in+sprague-dawley+rat%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Development of a new technique for reconstruction of hepatic artery during liver transplantation in sprague-dawley rat.</a> PLoS One. 10 (12), 0145662(2015).</li>
<li>Paller, M. S., Hoidal, J. R., Ferris, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxygen+free+radicals+in+ischemic+acute+renal+failure+In+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Oxygen free radicals in ischemic acute renal failure In the rat.</a> Journal of Clinical Investigation. 74 (4), 1156-1164 (1984).</li>
<li>Schmidt, J., Lewandrowsi, K., Warshaw, A. L., Compton, C. C., Rattner, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphometric+characteristics+and+homogeneity+of+a+new+model+of+acute+pancreatitis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pancreatology%22%5BJournal%5D)">Morphometric characteristics and homogeneity of a new model of acute pancreatitis in the rat.</a> International Journal of Pancreatology. 12 (1), 41-51 (1992).</li>
<li>Chui, C. J., McArdle, A. H., Brown, R., Scott, H. J., Gurd, F. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+mucosal+lesion+in+low-flow+states.+I.+A+morphological%2C+hemodynamic%2C+and+metabolic+reappraisal%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Intestinal mucosal lesion in low-flow states. I. A morphological, hemodynamic, and metabolic reappraisal.</a> Archives of Surgery. 101 (4), 478-483 (1970).</li>
<li>Kozian, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One-lung+ventilation+induces+hyperfusion+and+alveolar+damage+in+the+ventilated+lung%3Aan+experimental+study%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Anaesthesia%22%5BJournal%5D)">One-lung ventilation induces hyperfusion and alveolar damage in the ventilated lung:an experimental study.</a> British Journal of Anaesthesia. 100 (4), 549-559 (2008).</li>
<li>Shimada, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heavy+water+%28D2O%29+containing+preservation+solution+reduces+hepatic+cold+preservation+and+reperfusion+injury+in+an+isolated+perfused+rat+liver+%28IPRL%29+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Medicine%22%5BJournal%5D)">Heavy water (D2O) containing preservation solution reduces hepatic cold preservation and reperfusion injury in an isolated perfused rat liver (IPRL) model.</a> Journal of Clinical Medicine. 8 (11), 1818(2019).</li>
<li>Nakamura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sirtuin+1+attenuates+inflammation+and+hepatocellular+damage+in+liver+transplant+ischemia%2Freperfusion%3A+from+mouse+to+human%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Sirtuin 1 attenuates inflammation and hepatocellular damage in liver transplant ischemia/reperfusion: from mouse to human.</a> Liver Transplantation. 23 (10), 1282-1293 (2017).</li>
<li>Blaire, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+Considerations+of+Hilar+Cholangiocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Surgical+Oncology+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Surgical Considerations of Hilar Cholangiocarcinoma.</a> Surgical Oncology Clinics of North America. 28 (4), 601-617 (2019).</li>
</ol>

למחברי כתב היד הזה אין ניגודי אינטרסים לחשוף.

OLT בחולדות הוא מודל אידיאלי לחקר שימור איברים בהשתלת כבד, IRI, דחיית השתלות, סובלנות חיסונית, פתולוגיה ופרמקולוגיה של השתלות, הומוטרנספלנטציה ושנאת זרים. כיום, הוא נמצא בשימוש נרחב במחקר הניסיוני של השתלת כבד.
במהלך מחקרי פיילוט ניהלנו לראשונה הרדמה תוך-פרטית של נתרן פנטוברביטל ומצאנו כי הדבר הוביל לתמותה גבוהה לאחר הניתוח ולסובלנות קצרה לשינויים המודינמיים. לכן, השתמשנו בהרדמה בשאיפה בניסויים הבאים להתחלה מהירה של פעולה והדרה מהירה של מאפייני במבחנה. המעבר להרדמה בשאיפה שיפר באופן מ...

פגיעה בהפצרת איסכמיה (IRI) היא סיבוך נפוץ לאחר השתלת כבד. IRI כבד הוא תהליך פתולוגי מעורבים נזק לתאים בתיווך איסכמיה והידרדרות חריגה של רפרופורציה בכבד. IRI הכבד ואת התגובה החיסונית המולדת המקומית ניתן לחלק IRI חם וקר, על פי הבדלים בסביבה הקלינית1. IRI חם הוא המושרה על ידי פגיעה בתאי גזע, בדרך כלל כתוצאה של השתלת כבד, הלם, וטראומה2. קר IRI הוא סיבוך של השתלת כבד הנגרמת על ידי תאי אנדותל ומחזור הדם ההיקפי3. דוחות קליניים הראו כי IRI הכבד קשורה 10% של כשלים איברים מוקדמים ועלול להגביר את השכיחות של דחייה חריפה וכרונית4,5. בנוסף, IRI הכבד עשוי גם לגרום תסמונות תפקוד לקוי של איברים מרובים או תסמונת תגובה דלקתית מערכתית, עם תמותה גבוהה6. חולים עם מעורבות איברים extrahepatic נוטים להישאר זמן רב יותר בבית החולים, להוציא יותר כסף, ויש להם פרוגנוזה גרועה יותר7. התפתחות הסיבוכים קשורה קשר הדוק לאורך השלב האנהפטי של השתלת כבד8.
השתלת כבד אורתוטופית (OLT) בחולדות דווחה לראשונה על ידי הפרופסור האמריקאי לי בשנת 1973. הפעולה הניסיונית דימה את השלבים של השתלת כבד קלינית ואת anastomosis של כלי הדם ואת צינור המרה המשותף (CBD) באמצעות שיטת התפירה. ההליך קשה וגוזל זמן עם שיעור נמוך שלהצלחה 9. בשנת 1979, קמהדע ואח 'עשה שיפור משמעותי OLT בחולדות על ידי שימוש יצירתי "שתי חפתים שיטה" עבור anastomosis של וריד הפורטל כדי לשלוט בשלב האנהפטי בתוך 26 דקות10. באותה שנה הציע צימרמן את "שיטת סטנט המרה הבודדת". על בסיס עבודתו של לי, צימרמן השתמש בצינורות פוליאתילן כדי לאנוס ישירות את ה- CBD של התורם והמקבל, פישט את השחזור של CBD ושימר את תפקוד הסוגר, ושיטה זו הפכה לסטנדרט לשחזור מרה של דגמי OLT11. בשנת 1980, מיאטה ואח ' הציעו את 'שיטת שלושת החפתים' שבה וריד הפורטל (PV), וריד הווריד העל-חושי (SVC) והווריד הווריד התוך-הפטי (IVC) היו אנטומיים בשיטת האזיקים. עם זאת, קיים סיכון של עיוות של הצינורית עם שיטה זו, אשר יכול להוביל לחסימת רנודה נחותה12. בשנת 1983, "שיטת שני חפתים" הוצעה בשיטת האזיקים לאנסטומוזיס של PV ו- IVC, אך אימצה את שיטת התפר עבור SVC13. שיטה זו אומצה על ידי חוקרים ברחבי העולם כדי להקים מודלים OLT. מאז, צעדים anastomosis חפתים שופרו כדי לקצר את השלב האנהפטי ולשפר את שיעור ההישרדות של החולדות14. באופן דומה, שיטות משופרות משמשות בפרקטיקה קלינית כדי לקצר את השלב האנהפטי15. עם זאת, מחקר בסיסי לתוך IRI לאחר השתלת כבד הראה כי שיעור ההישרדות קשורה באופן הפוך למידת הפגיעה באיברים extrahepatic. לכן, דרוש מחקר נוסף, ויש צורך במודל פשוט וניתן לשחזור של בעלי חיים כדי לדמות IRI לאחר השתלת כבד.
בהתבסס על ההגדרה של השלב האנהפטי, הדמינו את השינויים המודינמיים בהשתלת כבד וכתוצאה מכך IRI של איברים extrahepatic בחולדות. בזאת, אנו מספקים תיאור מפורט של איך לבנות מודל בעלי חיים של השלב האנהפטי (איסכמיה בכבד) בחולדות כדי להקל על מחקר בסיסי לתוך IRI לאחר השתלת כבד.

<table><tbody><tr><td>4% תמיסת פרפורמלדהיד</td><td>שנחאי מקלין ביוכימיה ושות', בע"מ</td><td>תנור</td> ייבוש אוויר P804536 <td></td></tr><tr><td></td><td>שנחאי Binglin אלקטרוניקה טכנולוגיה ושות', בע"מ</td><td>BPG</td><td></td></tr><tr><td>אלנין אמינוטרנספראז (ALT) ערכת</td><td>Elabscience ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ</td><td>E-BC-K235-S</td><td></td></tr><tr><td>אמוניה</td><td>סינופארם ריאגנטים כימיים ושות' בע"מ</td><td>ערכת</td> עמילאז 10002118 <td></td></tr><tr><td></td><td>Elabscience ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ</td><td>E-BC-K005-M</td><td></td></tr><tr><td>אתנול נטול מים</td><td>סינופארם ריאגנטים כימיים ושות' בע"מ</td><td>100092183</td><td></td></tr><tr><td>בעלי חיים מכונת הרדמה</td><td>שנזן Ruiwode Life Technology Co. Ltd</td><td>R640</td><td></td></tr><tr><td>aspartate aminotransferase (AST) ערכת</td><td>Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd.</td><td>S03040</td><td></td></tr><tr><td>מנתח ביוכימי אוטומטי.</td><td>SIEMENS AG FWB:SIE, NYSE:SI Co., Ltd.</td><td>2400</td><td></td></tr><tr><td>ביוסיסטמס (כאשר נסרי)</td><td>צ'נגדו Taimeng אלקטרוניקה ושות', בע"מ</td><td>BL-420F</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה</td><td>Baiyang מכשיר רפואי ושות', בע"מ</td><td>BY-600A</td><td></td></tr><tr><td>כיסוי זכוכית</td><td>ג'יאנגסו שיטאי ציוד ניסיוני ושות 'בע"מ</td><td>10212432C</td><td></td></tr><tr><td>ערכת קריאטינין</td><td>Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd.</td><td>S03076</td><td></td></tr><tr><td>מכונת התייבשות</td><td>הונגריה 3DHISTECH ושות', בע"מ</td> מכונת הטבעה <td>מסדרת Donatello 2</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Hubei Xiaogan Kuohai Medical Technology Co., Ltd.</td><td>KH-BL1</td><td></td></tr><tr><td>קפוא מכונה</td><td>ווהאן ג'ונג'י אלקטרוניקה ושות', בע"מ</td><td>JB-L5</td><td></td></tr><tr><td>המטוקסילין-אאוזין פתרון צבע</td><td>ווהאן Saiwell ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ</td><td>G1005</td><td></td></tr><tr><td>יעילות גבוהה שעוות פרפין</td><td>שנחאי huayong שעוות פרפין ושות', בע"מ</td><td>Q / YSQN40-91</td><td></td></tr><tr><td>חומצה הידרוכלורית</td><td>סינופארם ריאגנטים כימיים ושות' בע"מ</td><td>10011018</td><td></td></tr><tr><td>עדשה תוך עינית (IOL) מלקחיים</td><td>גואנגג'ואו גואנגמיי ציוד רפואי ושות', בע"מ</td><td>JTZRN</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Shenzhen Ruiwode Life Technology Co., Ltd</td><td>&mdash;</td><td></td></tr><tr><td>מספריים מיקרו (כאשר נסתר)</td> <td>מפעל מכשירים כירורגיים בשנחאי</td><td>WA1010</td><td></td></tr><tr><td>מחזיקי מחטים</td><td>מפעל מכשירים כירורגיים בשנחאי</td><td>J32010</td><td></td></tr><tr><td>מסטיק ניטרלי</td><td>שנחאי Huashen ציוד ריפוי ושות', בע"מ</td><td>&mdash;</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ אופטי רגיל</td><td>Nikon Instrument Shanghai Co., Ltd</td><td>Nikon Eclipse CI</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים עיניים</td><td>מפעל מכשירים כירורגיים בשנחאי</td><td>J3CO30</td><td>מלקחיים עיניים ישרים</td></tr><tr><td></td><td>מפעל מכשירים כירורגיים בשנחאי</td><td>JD1060</td><td>כיפוף</td></tr><tr><td>מספריים עיניים</td><td>מפעל מכשירים כירורגיים בשנחאי</td><td>J1E0</td><td></td></tr><tr><td>פורס פתולוגי</td><td>שנחאי Leica Instrument Co., Ltd</td><td>RM2016</td><td></td></tr><tr><td>פיפטות</td><td>Dragon Laboratory Instruments Co., Ltd.</td><td></td><td></td>7010101008</tr><tr><td>מחזירים</td><td>בייג'ינג Jinuotai טכנולוגיה פיתוח ושות', בע"מ</td><td>סורק JNT-KXQ</td><td></td></tr><tr><td></td><td>הונגריה 3DHISTECH ושות', בע"מ</td><td>Pannoramic 250</td><td></td></tr><tr><td>שקופיות</td><td>ווהאן Saiwell ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ</td><td>G6004</td><td></td></tr><tr><td>קסילן</td><td>סינופארם ריאגנטים כימיים ושות' בע"מ</td><td>1330-20-7</td><td></td></tr></tbody></table>

פגיעה באיבר איסכמיה-רפרופוזיה על ידי הדמיית שינויים המודינמיים במודל השתלת כבד עכברוש

Organ Ischemia-Reperfusion Injury by Simulating Hemodynamic Changes in Rat Liver Transplant Model

השתלת כבד אורתוטופית (OLT) בחולדות היא מודל חיה מנוסה ומוכח המשמש למחקרים טרום ניתוחיים, תוך ניתוחיים ולאחר הניתוח, כולל פגיעה בהשמדת איסכמיה (IRI) של איברים חוץ-רחמיים. מודל זה דורש ניסויים והתקנים רבים. משך השלב האנהפטי קשור קשר הדוק לזמן לפתח IRI לאחר ההשתלה. בניסוי זה, השתמשנו בשינויים המודינמיים כדי לגרום נזק לאיברים חוץ-פתטיים בחולדות וקבענו את זמן הסובלנות המרבי. הזמן עד לפגיעה החמורה ביותר באיברים השתנה עבור איברים שונים. שיטה זו יכולה בקלות להיות משוכפל והוא יכול לשמש גם כדי ללמוד IRI של איברים extrahepatic לאחר השתלת כבד.

עמידות החולדות לאיסכמיה בכבד במודל זה של בעלי חיים, האתרים שבהם כלי הדם היו קשורים במהלך ההפעלה מוצגים באיור 1. החולדות חולקו באופן אקראי ל-5 קבוצות עבור איסכמיה למשך 15 דקות (קבוצת I15), 30 דקות (קבוצת I30), 45 דקות (קבוצת I45), 60 דקות (I60) וקבוצת Sham, עם 10 חולדות בכל קבוצה. שיעור ההישרדות של כל קבוצה נצפה 14 ימים לאחר הניתוח. כל החולדות שרדו בקבוצת I15, קבוצת I30 וקבוצת זיוף. שמונה שרדו במשך 14 ימים בקבוצת I45, ורק 2 שרדו בקבוצת I60. תוצאות אלו מצביעות על כך שהחולדו...

מאמר זה מספק תיאור מפורט של איך לבנות מודל של בעלי חיים של השלב האנהפטי (איסכמיה בכבד) בחולדות כדי להקל על מחקר בסיסי לתוך פגיעה איסכמיה-reperfusion לאחר השתלת כבד.

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats is a tried and proven animal model used for preoperative, intraoperative, and postoperative studies, ...

פגיעה באיסכמיה-רפרופוזיה של איברים על ידי הדמיית שינויים המודינמיים במודל השתלת כבד עכברוש. פגיעה איסכמיה-reperfusion הוא יישום נפוץ לאחר השתלת כבד. חולים עם מעורבות איברים extrahepatic נוטים להישאר זמן רב יותר בבית החולים, לבלות יותר ויש להם פרוגנוזה גרועה יותר.התפתחות הסיבוך קשורה קשר הדוק לאורך השלב האנהפטי של השתלת כבד. עם זאת, מחקר בסיסי לתוך פגיעה איסכמיה-reperfusion לאחר השתלת כבד הראה כי שיעור ההישרדות לאחר השתלת כבד קשורה הפוכה למידת הפגיעה באיברים extrahaptic. בהתבסס על ההגדרה של השלב האנהפטי, הדמינו את השינוי המודינמי בהשתלת כבד וכתוצאה מכך פגיעה איסכמיה-reperfusion של איברים extrahaptic.של מאמר זה הוא לספק תיאור מפורט של איך לבנות מודל בעלי חיים של השלב anhaptic בחולדות, מחקר בסיסי לתוך פגיעה איסכמיה-reperfusion לאחר השתלת כבד. ד"ר יואן יואן אחראי לכל פעולות חיות הוידאו. שני מלקחיים עיניים, ישר וכיפוף, ועדשה בין עינית, מלקחיים IOL, מספריים עיניים, אחד עד שני רקטורים, צמר גפן, 3-0 תפרים כירורגיים, גזה iodoform, מחטי תפר, מערכות ביולוגיות בעת הצורך, ועדשה בין עינית, מלקחיים IOL משמש להפרדת כלי דם בגלל roundheads.מכונת הרדמה לבעלי חיים, מכונת ביטול השקיה, מכונת הטמעה, כלי פריסה פתולוגי, מכונה קפואה, כלי פריסה של רקמות, תנור ייבוש אוויר, מיקרוסקופ אופטי עצבי, הסורק, אנפלוראן להרדמה כללית, 4% פתרון paraformaldehyde, אתנול כלהידרוס, קסילן, שעווה פרפין יעילות גבוהה, תמיסת צבע המטוקסילין-אאוסין, חומצה הידרוכלורית, אמוניה, שקופית, כיסוי זכוכית, מסטיק ניטרלי וריגנטים גוססים, וחומרים מתכלים. פיפטות, צנטריפוגה, מנתח ביוכימי אוטומטי, אלנין אמינו transferase, ערכת ALT, אספרטט, העברת אמינו, ערכת AST, ערכת קריאטינין. לאחר שקילה, החולדות מורדמים עם isoflurane על ידי מכונת הרדמה של בעלי חיים.לאחר חיטוי הבטן, לבצע חתך חציוני של שלושה סנטימטרים מתחת לתהליך xiphoid באמצעות מלקחיים ומספריים. פתח את חלל הבטן, לחשוף את הכבד באמצעות מפשק ולגייס את הרצועה hepatogastric. השתמש ספוגיות כותנה כדי להפוך את האונה האמצעית של הכבד בעדינות ולהפוך אותו כלפי מעלה כדי לחשוף את הרגל פורטה.זהה את צינור המרה, וריד הפורטל ועורק הכבד. לדחוף את המעי הדק לכיוון חלל הבטן התחתון השמאלי באמצעות החלפות כותנה ולהעביר את הווריד הווריד הווריד הנחות לווריד הכליה הימני, לבודד את וריד הפורטל, עורק הכבד ואת הווריד הווריד הווריד הנחות מעל וריד הכליה הימני עם עדשה תוך עינית, IOL, מלקחיים המסומנים בחוט משי 3-0 כל אחד עם קשר להחליק. חותכים לפתוח את העור של הקיצוניות השמאלית והימנית התחתונה ולחשוף את וריד הירך באמצעות מלקחיים עיניים.לאט להזריק הפרין משקל מולקולרי נמוך 625 IU/kg דרך וריד הירך כדי heparinize את כל הגוף. Ligate וריד הפורטל, עורק הכבד, ו vena קאווה נחות מעל וריד הכליה הימני עם מספר 3-0 תפרים, שנמשך 45 דקות. החלף את המעי הדק בחלל הבטן ולכסות אותו עם גזה.הרדמה בשאיפה מצטמצמת בתקופות אלה. לאחר 45 דקות, לשחרר את וריד הפורטל, עורק הכבד, ואת הווריד הווריד נחות מעל וריד הכליה הימני. לתפור את השריר ואת העור שכבה אחר שכבה ולסיים את ההרדמה בשאיפה.ספק משכך כאבים לאחר הניתוח באמצעות מורפיום תת עורי של 5 מ"ג / קילוגרם כל ארבע שעות שים לב לחולדה עד ער ולשמור על האכלה בטמפרטורה של 25 פלוס או מינוס שתי מעלות צלזיוס ולחות של 50 פלוס או מינוס 10% מנורות חימום בעלי חיים יש צורך. במודל זה של בעלי חיים, החולדות חולקו באופן אקראי לחמש קבוצות על פי איסכמיה במשך 15 דקות, אני 15 קבוצה, 30 דקות, אני 30 קבוצה, 45 דקות, אני 45 קבוצה, 60 דקות, אני 60, וקבוצה מזויפת עם 10 חולדות בכל קבוצה. שיעור ההישרדות של כל קבוצה נצפה 14 ימים לאחר הניתוח.כל החולדות שרדו בקבוצות I 15, I 30 ו sham. שמונה שרדו במשך 14 ימים בקבוצת I 45 ורק שניים שרדו בקבוצת I 60. התוצאות הראו כי החולדות יכולות לסבול את השלב האנהפטי במשך 45 דקות לכל היותר.במהלך הניסוי, מערכות ביולוגיות שימש כדי לתעד את השינויים של קצב הלב ולחץ הדם, צנרור עורק העורק הראשי הפנימי הימני לפני ואחרי השלב האנהפטי. מצאנו כי קצב הלב ולחץ עורקי ממוצע, MAP של חולדות, השתנה באופן דרמטי לאחר קשירה בכלי הדם. לאחר קשירה, איסכמיה בכבד, גודש, בצקת במעיים, דליות קיבה ו splenomegaly ניכרו.80 חולדות חולקו באופן אקראי לשמונה קבוצות כולל איסכמיה במשך 45 דקות, T0, reperfusion במשך שש שעות, T6, 12 שעות, T12, 24 שעות, T24, 48 שעות, T48, 72 שעות, T72, שבעה ימים, T7, ב 14 ימים, T14, בהתאמה. הכליות, הלבלב, המעי הדק, רקמות הלב והריאות נלקחו והוכתמו ב- HE לאחר שחולדות הוקרבו. למעט הלב, ציונים פתולוגיים ניתנו על פי הפניות, בהתאמה.התוצאות הראו כי הזמן של פגיעה מקסימלית של האיברים extrahepatic השתנה. זה היה שש עד 24 שעות לאחר הניתוח ללבלב ו 24 עד 48 שעות לריאות. מערכת העיכול והכליות נפצעו בצורה הקשה ביותר לאחר 45 דקות של איסכמיה.לא הייתה חריגה ברורה של רירית המעי 24 שעות לאחר הניתוח והכליות התאוששו לאחר 48 שעות. באשר ללב, עם חלוף הזמן לאחר reperfusion, narcosis תא שריר הלב המקומי, פיצול תאים ופירוק, חדירת תאים דלקתיים, vasodilation מקומי וגודש נמצאו ברקמה על ידי 24 עד 48 שעות לאחר הניתוח. סרום נאסף ואת רמות ALT, AST, קריאטינין, עמילאז זוהו על ידי מנתח ביוכימי אוטומטי.כל האינדיקטורים הגיעו לשיא של 24 עד 48 שעות, בניגוד לשינויים הפתולוגיים. למרות שהרמות היו נורמליות 48 שעות לאחר הניתוח, הנזק הפתולוגי עדיין נמשך. לסיכום, המודל בחולדות הוא פשוט וקל יותר לשימוש ללא מיקרוכירורגיה ומספק בסיס למחקר בסיסי של פגיעה איסכמיה-reperfusion של איברים extrahepatic לאחר איסכמיה בכבד.

organ-ischemia-reperfusion-injury-simulating-hemodynamic-changes-rat

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

אנו מציגים גרסה לא קל ליצור בטכניקה של שתי השרוול קלאסית השתלת כבד orthotopic בחולדה.

השתלת כבד Orthotopic בחולדות

השתלת הכבד orthotopic בחולדות היא מודל ניסיון הכרחי למחקר ביו. כאן אנו מציגים הניתוחים שלנו להשתלת כבד חולדת orthotopic עם שחזור עורק כבד באמצעות 50% שתל חלקי.

ניתוחים למודל חולדה של השתלה כבדה orthotopic חלקית עם שחזור עורקית כבדיה

לב החולדה המבודד הוא מודל מתמשך לפגיעה באיסכמיה. כאן, אנו מתארים את תהליך קצירת הלב הפועם מחולדה באמצעות קנולציה של אבי העורקים באתרה, זלוף לנגנדורף של הלב, סימולציה של פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה וצביעה על אוטם כדי לאשר את היקף העלבון האיסכמי.

אינדוקציה והערכה של איסכמיה reperfusion פגיעה בלבבות עכברוש Langendorff-perfused

מודל מהדק hilar כבד עכברוש ייחודי שפותח עבור הבוחנים את שפעת מולקולות תרופתיות לטיוב פגיע reperfusion-איסכמיה. מודל זה כולל cannulation ישיר של אספקת הפורטל למגזר הכבד איסכמי באמצעות סניף של וריד השער, המאפשר למסירה כבדה ישירה.

שיטה של ​​המגזרים הישירים Intra-כבדית משלוח באמצעות מודל קלאמפ עכברוש הכבד hilar

המטרה של מחקר זה היא לשנות את מודל השתלת כבד אורתוטופית חולדה כדי לייצג טוב יותר השתלת כבד אנושי ולשפר את הישרדות הנמען. השיטה המוצגת מחדש את זרימת העורקים הכבדים על ידי חיבור עורק הכבד המשותף של הכבד התורם לעורק הכבד התקין של הכבד הנמען.

סיבוכים מופחתים לאחר חיבור מחדש עורקי במודל חולדה של השתלת כבד אורתוטופית

כאן, אנו מציגים אופטימיזציות למודל השתלת ריאות של חולדות המשמשות לשיפור התוצאות. אנו מספקים מדריך מידות לאזיקים המבוסס על משקל הגוף, אסטרטגיית מדידה לבירור החלל הבין-קוסטליהרביעי , ושיטות לסגירת פצעים ואיסוף נוזלים ורקמות BAL (שטיפת סימפונות).

מודל השתלת ריאה של חולדה של איסכמיה חמה / פגיעה ברפרפוזיה: אופטימיזציות לשיפור התוצאות

בפרוטוקול זה מתואר מודל של השתלת כבד אורתוטופית חזירית לאחר אחסון קר סטטי של איברים תורמים למשך 20 שעות ללא שימוש במעקף ורידי במהלך השתלה. הגישה משתמשת בטכניקה כירורגית פשוטה עם מזעור השלב האנהפטי וניהול מתוחכם של נפח וזופרסור.

השתלת כבד חזירי ללא מעקף ורידי כמודל תורם קריטריונים מורחבים

פרוטוקול השתלת כבד עזר הטרוטופי של חולדות המתואר כאן מציע כלי מחקר מעשי לחקר מנגנונים של דחיית השתלת כבד. מודל זה מסייע להקל על המכשולים הכירורגיים והלחץ של בעלי חיים של השתלת כבד אורתוטופית בחולדות.

מודל השתלת חולדה בכבד שלם עזר הטרוטופי תוך שימוש בכבד כבד למחקרי דחיית אלוגרפט

מאמר זה מציג הליך סטנדרטי לזילוח מבוקר והפיך של איברים בטניים במודלים של חולדות. המטרה היא לגרום למצבי זילוח אלה עם רמה גבוהה של ודאות מתודולוגית ושליטה תוך שמירה על פשטות טכנית ועמידות בפני שגיאות.

איסכמיה עורקית ויסצרלית הפיכה מבוקרת, גודש ורידי ומלפרטציה משולבת באמצעות לפרוטומיה בקו האמצע בחולדות

העברת רקמה חינם הוא מועסק באופן נרחב בניתוח שחזור כדי לשחזר את הצורה ותפקוד בעקבות כריתה וטראומה אונקולוגי. Preconditioning רקמה זו לפני הניתוח עשויה לשפר את התוצאה. מאמר זה...

באתרו מדף רוחבי Rectus abdominis Myocutaneous: מודל עכברוש של הפגיעה reperfusion איסכמיה Myocutaneous

חקור פגיעת איסכמיה-רפרפוזיה באיברים חוץ-כבדיים במודל השתלת כבד בעכברוש. שיטה זו משלבת הדמיית שינויים המודינמיים ומספקת בסיס למחקר בסיסי בתחום השתלות הכבד.

פגיעה באיבר איסכמיה-רפרופוזיה על ידי הדמיית שינויים המודינמיים במודל השתלת כבד עכברוש

גלה סרטונים נוספים