פגיעה באיבר איסכמיה-רפרופוזיה על ידי הדמיית שינויים המודינמיים במודל השתלת כבד עכברוש

פגיעה באיסכמיה-רפרופוזיה של איברים על ידי הדמיית שינויים המודינמיים במודל השתלת כבד עכברוש. פגיעה איסכמיה-reperfusion הוא יישום נפוץ לאחר השתלת כבד. חולים עם מעורבות איברים extrahepatic נוטים להישאר זמן רב יותר בבית החולים, לבלות יותר ויש להם פרוגנוזה גרועה יותר.

התפתחות הסיבוך קשורה קשר הדוק לאורך השלב האנהפטי של השתלת כבד. עם זאת, מחקר בסיסי לתוך פגיעה איסכמיה-reperfusion לאחר השתלת כבד הראה כי שיעור ההישרדות לאחר השתלת כבד קשורה הפוכה למידת הפגיעה באיברים extrahaptic. בהתבסס על ההגדרה של השלב האנהפטי, הדמינו את השינוי המודינמי בהשתלת כבד וכתוצאה מכך פגיעה איסכמיה-reperfusion של איברים extrahaptic.

של מאמר זה הוא לספק תיאור מפורט של איך לבנות מודל בעלי חיים של השלב anhaptic בחולדות, מחקר בסיסי לתוך פגיעה איסכמיה-reperfusion לאחר השתלת כבד. ד"ר יואן יואן אחראי לכל פעולות חיות הוידאו. שני מלקחיים עיניים, ישר וכיפוף, ועדשה בין עינית, מלקחיים IOL, מספריים עיניים, אחד עד שני רקטורים, צמר גפן, 3-0 תפרים כירורגיים, גזה iodoform, מחטי תפר, מערכות ביולוגיות בעת הצורך, ועדשה בין עינית, מלקחיים IOL משמש להפרדת כלי דם בגלל roundheads.

מכונת הרדמה לבעלי חיים, מכונת ביטול השקיה, מכונת הטמעה, כלי פריסה פתולוגי, מכונה קפואה, כלי פריסה של רקמות, תנור ייבוש אוויר, מיקרוסקופ אופטי עצבי, הסורק, אנפלוראן להרדמה כללית, 4% פתרון paraformaldehyde, אתנול כלהידרוס, קסילן, שעווה פרפין יעילות גבוהה, תמיסת צבע המטוקסילין-אאוסין, חומצה הידרוכלורית, אמוניה, שקופית, כיסוי זכוכית, מסטיק ניטרלי וריגנטים גוססים, וחומרים מתכלים. פיפטות, צנטריפוגה, מנתח ביוכימי אוטומטי, אלנין אמינו transferase, ערכת ALT, אספרטט, העברת אמינו, ערכת AST, ערכת קריאטינין. לאחר שקילה, החולדות מורדמים עם isoflurane על ידי מכונת הרדמה של בעלי חיים.

לאחר חיטוי הבטן, לבצע חתך חציוני של שלושה סנטימטרים מתחת לתהליך xiphoid באמצעות מלקחיים ומספריים. פתח את חלל הבטן, לחשוף את הכבד באמצעות מפשק ולגייס את הרצועה hepatogastric. השתמש ספוגיות כותנה כדי להפוך את האונה האמצעית של הכבד בעדינות ולהפוך אותו כלפי מעלה כדי לחשוף את הרגל פורטה.

זהה את צינור המרה, וריד הפורטל ועורק הכבד. לדחוף את המעי הדק לכיוון חלל הבטן התחתון השמאלי באמצעות החלפות כותנה ולהעביר את הווריד הווריד הווריד הנחות לווריד הכליה הימני, לבודד את וריד הפורטל, עורק הכבד ואת הווריד הווריד הווריד הנחות מעל וריד הכליה הימני עם עדשה תוך עינית, IOL, מלקחיים המסומנים בחוט משי 3-0 כל אחד עם קשר להחליק. חותכים לפתוח את העור של הקיצוניות השמאלית והימנית התחתונה ולחשוף את וריד הירך באמצעות מלקחיים עיניים.

לאט להזריק הפרין משקל מולקולרי נמוך 625 IU/kg דרך וריד הירך כדי heparinize את כל הגוף. Ligate וריד הפורטל, עורק הכבד, ו vena קאווה נחות מעל וריד הכליה הימני עם מספר 3-0 תפרים, שנמשך 45 דקות. החלף את המעי הדק בחלל הבטן ולכסות אותו עם גזה.

הרדמה בשאיפה מצטמצמת בתקופות אלה. לאחר 45 דקות, לשחרר את וריד הפורטל, עורק הכבד, ואת הווריד הווריד נחות מעל וריד הכליה הימני. לתפור את השריר ואת העור שכבה אחר שכבה ולסיים את ההרדמה בשאיפה.

ספק משכך כאבים לאחר הניתוח באמצעות מורפיום תת עורי של 5 מ"ג / קילוגרם כל ארבע שעות שים לב לחולדה עד ער ולשמור על האכלה בטמפרטורה של 25 פלוס או מינוס שתי מעלות צלזיוס ולחות של 50 פלוס או מינוס 10% מנורות חימום בעלי חיים יש צורך. במודל זה של בעלי חיים, החולדות חולקו באופן אקראי לחמש קבוצות על פי איסכמיה במשך 15 דקות, אני 15 קבוצה, 30 דקות, אני 30 קבוצה, 45 דקות, אני 45 קבוצה, 60 דקות, אני 60, וקבוצה מזויפת עם 10 חולדות בכל קבוצה. שיעור ההישרדות של כל קבוצה נצפה 14 ימים לאחר הניתוח.

כל החולדות שרדו בקבוצות I 15, I 30 ו sham. שמונה שרדו במשך 14 ימים בקבוצת I 45 ורק שניים שרדו בקבוצת I 60. התוצאות הראו כי החולדות יכולות לסבול את השלב האנהפטי במשך 45 דקות לכל היותר.

במהלך הניסוי, מערכות ביולוגיות שימש כדי לתעד את השינויים של קצב הלב ולחץ הדם, צנרור עורק העורק הראשי הפנימי הימני לפני ואחרי השלב האנהפטי. מצאנו כי קצב הלב ולחץ עורקי ממוצע, MAP של חולדות, השתנה באופן דרמטי לאחר קשירה בכלי הדם. לאחר קשירה, איסכמיה בכבד, גודש, בצקת במעיים, דליות קיבה ו splenomegaly ניכרו.

80 חולדות חולקו באופן אקראי לשמונה קבוצות כולל איסכמיה במשך 45 דקות, T0, reperfusion במשך שש שעות, T6, 12 שעות, T12, 24 שעות, T24, 48 שעות, T48, 72 שעות, T72, שבעה ימים, T7, ב 14 ימים, T14, בהתאמה. הכליות, הלבלב, המעי הדק, רקמות הלב והריאות נלקחו והוכתמו ב- HE לאחר שחולדות הוקרבו. למעט הלב, ציונים פתולוגיים ניתנו על פי הפניות, בהתאמה.

התוצאות הראו כי הזמן של פגיעה מקסימלית של האיברים extrahepatic השתנה. זה היה שש עד 24 שעות לאחר הניתוח ללבלב ו 24 עד 48 שעות לריאות. מערכת העיכול והכליות נפצעו בצורה הקשה ביותר לאחר 45 דקות של איסכמיה.

לא הייתה חריגה ברורה של רירית המעי 24 שעות לאחר הניתוח והכליות התאוששו לאחר 48 שעות. באשר ללב, עם חלוף הזמן לאחר reperfusion, narcosis תא שריר הלב המקומי, פיצול תאים ופירוק, חדירת תאים דלקתיים, vasodilation מקומי וגודש נמצאו ברקמה על ידי 24 עד 48 שעות לאחר הניתוח. סרום נאסף ואת רמות ALT, AST, קריאטינין, עמילאז זוהו על ידי מנתח ביוכימי אוטומטי.

כל האינדיקטורים הגיעו לשיא של 24 עד 48 שעות, בניגוד לשינויים הפתולוגיים. למרות שהרמות היו נורמליות 48 שעות לאחר הניתוח, הנזק הפתולוגי עדיין נמשך. לסיכום, המודל בחולדות הוא פשוט וקל יותר לשימוש ללא מיקרוכירורגיה ומספק בסיס למחקר בסיסי של פגיעה איסכמיה-reperfusion של איברים extrahepatic לאחר איסכמיה בכבד.