Name: גידול שמקורו במטופל explants כפלטפורמה פרה-אקלינית חיה לחיזוי עמידות לתרופות בחולים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-07T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 42 s
Description: חקור שימוש ב-explants ממקור מטופלים לבדיקת תרופות בסרטן. שיטה זו שומרת על מבנה הגידול התלת-ממדי ומאפשרת חיזוי מדויק של תגובת החולה לטיפול תרופתי וגילוי ביומרקרים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים למנתחים ולפתולוגים בבתי החולים האוניברסיטאיים של לסטר NHS Trust על מתן רקמת גידול שנקטה בניתוח. אנו מודים גם למתקן ההיסטולוגיה בשירותי הליבה ביוטכנולוגיה על עזרה בעיבוד רקמות וחיתוך של בלוקי רקמת FFPE וקייס סטראטמן על תמיכה בשימוש ב- Vectra Polaris. מחקר זה נתמך ומומן על ידי קונסורציום Explant המורכב מארבעה שותפים: אוניברסיטת לסטר, היחידה טוקסיקולוגיה MRC, מחקר סרטן בריטניה מעבדות גילוי טיפולי, ו LifeArc. תמיכה נוספת ניתנה על ידי המרכז לרפואה ניסיונית לסרטן CRUK-NIHR לסטר (C10604/A25151). המימון ל- GM, CD ו- NA סופק על ידי תוכנית הזרז של סרטן השד עכשיו (2017NOVPCC1066), הנתמכת במימון פייזר.

אין מה לחשוף

מאמר זה מתאר את שיטות הדור, הטיפול התרותי והניתוח של מחשבי כף יד ומדגיש את היתרונות של הפלטפורמה כמערכת מודל פרה-קלינית. פולחן Ex vivo של גידול שנפלט טרי, שאינו כרוך בפירוקו, מאפשר שימור של ארכיטקטורת הגידול13,24 ולכן, את האינטראקציות המרחביות של רכיבים תאיים ב- TME, כמו גם הטרוגניות תוך-מוראלית. שיטה זו מדגימה כיצד באמצעות סמן ספציפי לגידול ניתן לזהות אזורים ברקמת הגידול לעומת אזורים של סטרומה ולכן להפריד תגובות סמים בתוך תאים אלה (איור 3</s...

הפיתוח של סוכני נגד נגדים יעילים ובטוחים דורש מודלים פרה-אקליניים מתאימים שיכולים גם לספק תובנה על מנגנוני פעולה שיכולים להקל על זיהוי של סמנים ביולוגיים חזויים ופרמקודינמיים. בין-1,2,3,4,5 ו- TME6,7,8,9,10,11,12 ידועים כמשפיעים על תגובות תרופות נגד סרטן, ומודלים קיימים רבים של סרטן פרה-אקליני כגון קווי תאים, אורגנוידים ומודלים של עכבר אינם מסוגלים להכיל באופן מלא את אלה חיוניים תכונות. מודל "אידיאלי" הוא מודל שיכול לשחזר את האינטראקציות המרחביות המורכבות של ממאיר עם תאים לא ממאירים בתוך גידולים, כמו גם לשקף את ההבדלים האזוריים בתוך גידולים. מאמר זה מתמקד PDEs כפלטפורמה מתפתחת שיכולה למלא רבים מדרישות אלה13.
הדוגמה הראשונה לשימוש ב- PDEs אנושי, הידוע גם בשם היסטוקולטורות, מתוארכת לסוף שנות השמונים כאשר הופמן ואח 'יצרו פרוסות של גידולים אנושיים שנכרתו טריים ותרבלו אותם במטריצה קולגן14,15. זה היה כרוך בהקמת מערכת תרבית תלת-ממדית ששימרה את ארכיטקטורת הרקמות, והבטיחה שמירה על רכיבים סטרומיים ואינטראקציות תאים בתוך ה- TME. מבלי לפרק את הגידול המקורי, הופמן ואח '16 מבשרים על גישה חדשה של מחקר תרגום, ומאז, קבוצות רבות מיטבו שיטות הסבר שונות במטרה לשמור על שלמות הרקמה ולייצר נתוני תגובה מדויקים לתרופות17,18,19,20,21,22,23,24 למרות כמה הבדלים בין פרוטוקולים ניכרים., באטלר ואח ' explants תרבותית ספוגי ג'לטין כדי לעזור דיפוזיה של חומרים מזינים ותרופות באמצעות הדגימה20,21,25, ואילו מג'ומדר ואח 'יצר מערכת אקולוגית גידול על ידי culturing explants על גבי מטריצה המורכבת של גידול וחלבונים סטרומיים בנוכחות סרום אוטולוגי נגזר מאותו חולה22, 23.
לאחרונה, הקבוצה שלנו הקימה פרוטוקול לפיו explants נוצרים על ידי פיצול של גידולים לתוך 2 - 3 מ"מ3- חתיכות בגודל כי הם ממוקמים לאחר מכן ללא רכיבים נוספים על ממברנות חדירים בממשק אוויר נוזלי של מערכת תרבות24. יחד, מחקרים רבים אלה הוכיחו כי PDEs מאפשרים את התרבות של שלם, שברים חיים של גידולים אנושיים השומרים על הארכיטקטורה המרחבית וההטרוגניות האזורית של הגידולים המקוריים. בניסויים מקוריים, explants או histocultures היו בדרך כלל נתון הומוגניזציה בעקבות טיפול תרופתי, ולאחר מכן בדיקות קיימא שונות הוחלו על דגימות הומוגניות כגון אסאי תגובת התרופה היסטוקולטורה20,21, MTT (3-(6)-2,5-דיפנילטטרזוליום ברומיד) אסי, ההסתה של הלקטט דהידרוגנאז, או אסאי מבוסס רסזורין26,27,28 . ההתקדמות האחרונה בטכניקות ניתוח נקודות קצה, במיוחד פתולוגיה דיגיטלית, הרחיבו כעת את הרפרטואר של בדיקות נקודת קצה ובדיקות שניתן לבצע על explants29,30. כדי ליישם טכנולוגיות חדשות אלה, במקום הומוגניזציה, explants קבועים פורמלין, מוטבע פרפין (FFPE) ולאחר מכן מנותח באמצעות טכניקות חיסוניות, המאפשר פרופיל מרחבי. דוגמאות לגישה זו תועדו עבור סרטן ריאות תאים לא קטנים (NSCLC), סרטן השד, סרטן המעי הגס, ו explants mesothelioma לפיה כתמים אימונוהיסטוכימיים עבור סמן ההתפשטות, Ki67, ואת הסמן אפופטוטי, פולי-ADP פולימראז (cPARP), שימש לניטור שינויים התפשטות התא ומוות תאים24,31,32,33,34.
אימונופלואורסצנטיות מרובת קסים נוחה במיוחד ליצירת פרופיל מרחבי של תגובות סמים ב explants בנקודת קצה35. לדוגמה, ניתן למדוד את ההקצאה מחדש ואת ההתפלגות המרחבית של סוגים ספציפיים של תאים חיסוניים, כגון מקרופאגים או תאי T, בתוך TME על טיפול תרופתי13,36,37,38, ולחקור אם סוכן טיפולי יכול להעדיף את המעבר מ"גידול קר "ל"גידול חם"39 . בשנים האחרונות, קבוצה זו התמקדה בהפקת PDEs מסוגי גידולים שונים (NSCLC, סרטן כליות, סרטן השד, סרטן המעי הגס, מלנומה) ובדיקה של מגוון של חומרים נגד סרטן כולל כימותרפיה, מעכבי מולקולות קטנות, ומעכבי מחסום חיסוני (ICIs). שיטות ניתוח נקודות קצה עברו אופטימיזציה כדי לכלול אימונופלואורסצנטיות מרובת-קסים כדי לאפשר יצירת פרופיל מרחבי של סמנים ביולוגיים לצורך כדאיות, כמו גם סמנים ביולוגיים עבור מרכיבים שונים של TME.

<table><tbody><tr><td><חזק>חומצה אצטית</חזקה></td><td>סיגמא</td><td>320099</td><td>מגיב צביעה</td></tr><tr><td><חזק>נוגדנים מדלל/בלוק, 1x</חזק></td><td>Perkin Elmer</td><td>ARD1001EA</td><td>נוגדן מדלל/חוסם חוצץ</td></tr><tr><td><חזק>Barnstead NANOpure יהלום</חזק></td><td>Barnstead</td><td></td><td>Ultra Pure (UP) H2O מכונה</td></tr><tr><td><חזק> חומצת לימון מונוהידרט</חזקה</td><td>>סיגמא-אולדריץ</td><td>' C7129</td><td>ריאגנט עבור חוצץ ציטראט</td></tr><tr><td><חזק>Costar צלחות תרבית תאים מרובות בארות</חזק></td><td>קורנינג משולב</td><td>3516</td><td>6 צלחת מרובת בארות</td></tr><tr><td><חזק>DAPI דילקטט</חזק></td><td>חיים טכנולוגיות</td><td>D3571</td><td></td></tr><tr><td><חזק>100 x 17 מ"מ צלחת, Nunclon Delta</חזק></td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>150350</td><td>צלחת בקוטר 100 מ"מ לתרבית רקמות</td></tr> <tr><td><חזק>DMEM (1x) מדיום נשר שונה של Dubelcco + 4.5 גרם/ליטר D-גלוקוז + 110 מ"ג/מ"ל נתרן פירובט</חזק></td><td>Gibco (Life Technologies)</td><td>10569-010</td><td>מדיום תרבית רקמות (500 מ"ל)</td></tr><tr><td><חזק>תושבת DPX</חזק></td><td>VWR</td><td>360294H</td><td>מדיום הרכבה</td></tr><tr><td><חזק>תושבת DPX</td><td>Merck</td><td>6522</td><td>מגיב הרכבה בינוני</td></tr><tr><td><חזק>אתילנדיאמין-טטראצטי (EDTA)</חזק></td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>3609</td><td>מגיב למאגר TE</td></tr><tr><td><חזק>אאוזין</חזק></td><td>CellPath</td><td>RBC-0100-00A</td><td>מגיב צביעה</td></tr><tr><td><חזק>סרום בקר עוברי</חזק></td><td>Gibco</td><td>10500-064</td><td>לשימוש בתרבית רקמות בינוני</td></tr><tr><td><חזק>37% פורמלדהיד</חזק></td><td>פישר (Acros)</td><td>119690010</td><td>10% פורמלין</td></tr><tr><td><חזק>iGenix, תנור מיקרוגל IG2095</חזק></td><td>iGenix</td><td>IG2095</td><td>מיקרוגל המשמש לאנטיגן retreival</td></tr><tr><td>רוח מתילציה תעשייתית (IMS)</td><td>Genta Medical</td><td>199050</td><td>99% אלכוהול מפוגל תעשייתי (IDA)</td></tr><tr><td>InForm Advanced Image Analysis Software</td><td>Akoya Biosciences</td><td>InForm</td><td></td></tr><tr><td>Leica ASP3000 Tissue Processor</td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td>Automated Vacuum Tissue Processor</td></tr><tr><td>Leica Arcadia H and C</td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td>הטמעת אמבט שעווה</td></tr><tr><td>Leica RM2125RT</td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td>מיקרוטום סיבובי</td></tr><tr><td><חזק>Leica ST4040 מכתים ליניאריים</חזק></td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td>H& E stainer</td></tr><tr><td>Mayer's Haematoxylin</td><td>Sigma</td><td>GHS132-1L</td><td>מגיב צביעה</td></tr><tr><td><חזק>מוסיף תרבית תאים מילי-תאים, 30 מ"מ, PTFE הידרופילי, 0.4 ומיקרו; m</td><td>Merck Milipore</td><td>PICMORG50</td><td>דיסק הכנסת תרבית אורגנוטיפית</td></tr><tr><td><חזק>מערכת זיהוי פולימרים של Novolink</חזק></td><td>Leica Biosystems</td><td>ערכת צביעה DAB</td> <td>RE7150-K</td></tr> <tr><td>OPAL 480</td><td>Akoya Biosciences</td><td>FP1500001KT</td><td>פלואורופור עם דימתיל סולפוקסיד (DMSO) מדלל</td></tr><tr><td><חזק>OPAL 520</חזק></td><td>Akoya Biosciences</td><td>FP1487001KT</td><td>פלואורופור עם דימתיל סולפוקסיד (DMSO) מדלל</td></tr><tr><td><חזק>אופל 570</חזק></td><td>Akoya Biosciences</td><td>FP1488001KT</td><td>פלואורופור עם דימתיל סולפוקסיד (DMSO) מדלל</td></tr><tr><td><חזק>אופל 620</חזק></td><td>Akoya Biosciences</td><td>FP1495001KT</td><td>פלואורופור עם דימתיל סולפוקסיד (DMSO) מדלל</td></tr><tr><td><חזק>אופל 650</חזק> </td><td>Akoya Biosciences</td><td>FP1496001KT</td><td>פלואורופור עם דימתיל סולפוקסיד (DMSO) מדלל</td></tr><tr><td><חזק>OPAL 690</חזק></td><td>Akoya Biosciences</td><td>FP1497001KT</td><td>פלואורופור עם דימתיל סולפוקסיד (DMSO) מדלל</td></tr><tr><td><חזק>אופל 780 / מגיב TSA-DIG </חזק></td><td>Akoya Biosciences</td><td>FP1501001KT</td><td>פלואורופור עם דימתיל סולפוקסיד (DMSO) ומגיב TSA-DIG</td></tr><tr><td><חזק>אופל פולימר HRP Ms Plus Rb, 1x</td><td>Perkin Elmer</td><td>ARH1001EA</td><td>HRP</td></tr> <tr><td>פולימר<חזק>פניצילין/סטרפטומיצין תמיסה</חזק></td><td>Fisher Scientific</td><td>11548876</td><td>לשימוש בתרבית רקמות מדיום</td></tr><tr><td>PhenoChart Whole Slide Contextual Viewer</td><td>Akoya</td><td>Biosciences PhenoChart</td><td>Viewer תוכנה לתמונות סרוקות</td></tr><tr><td><חזק>פוספט חוצץ טבליות מלח</חזק>תרמו</td> <td>מדעי אוקסואיד</td><td></td><td>BR0014G PBS</td></tr><tr><td><חזק>1x פלוס הגברה מדלל</חזק></td><td>פרקין אלמר</td><td>FP1498</td><td>פלואורופור מדלל</td></tr><tr><td><חזק>פרולונג יהלום אנטי-דהייה תושבת</חזק></td><td>Invitrogen</td><td>P36961</td><td>הרכבה בינונית</td></tr><tr><td><חזקה>מנשא שקופיות</חזק></td><td>פרקין אלמר</td><td></td><td>כדי להעמיס מגלשות לתוך מלון Slide Carrier לסריקה עם Vectra Polaris</td></tr><tr><td>נתרן כלורי</חזק></td><td>Fisher Scientific</td><td>S/3160/63</td><td>10% פורמלין</td></tr><tr><td><חזק>כדורי נתרן הידרוקסיד</חזק></td><td>Fisher Scientific</td><td>S/4920/53</td><td>מגיב למאגר ציטראט</td></tr><tr><td><חזק>שעווה קשוחה Tenatex - ורוד (500 גרם)</ חזק></td><td>KEMDENT</td><td>1-601</td><td>משטח שעווה דנטלי</td></tr><tr><td><חזק>תרמו מדעי&nbsp; מתלה שקופיות Shandon Sequenza למרכז צביעה חיסונית</חזק></td><td>מחזיק 10098889 מדעי של פישר</td><td></td><td>לשקופיות וקליפס שקופיות</td></tr><tr><td><חזק>Thermo Scientific Shandon פלסטיק כיסוי</חזק>Fisher</td> <td>Scientific</td><td></td><td>11927774 קליפס שקופיות</td></tr><tr><td><חזק>טריס (הידרוקסימתיל)אמינומתאן (טריס)</חזק></td><td>מגיב 252859 סיגמא-אולדריץ</td><td></td>' <td>עבור מאגר TE</td></tr><tr><td><חזק>VectaShield</חזק></td><td>Vecta Laboratories</td><td>H-1000-10</td><td>הרכבה בינונית</td></tr><tr><td><חזקה>Vectra Polaris סורק שקופיות</חזק></td><td>פרקין אלמר</td><td>וקטרה פולריס</td><td>סורק שקופיות</td></tr><tr><td><חזק>קסילן</חזק></td><td>Genta Medical</td><td>XYL050</td><td>חומר הסרת שעווה</td></tr></tbody></table>

גידול שמקורו במטופל explants כפלטפורמה פרה-אקלינית "חיה" לחיזוי עמידות לתרופות בחולים

Patient-Derived Tumor Explants As a "Live" Preclinical Platform for Predicting Drug Resistance in Patients

הבנה של עמידות לתרופות ופיתוח אסטרטגיות חדשניות לחש סרטן עמיד מאוד מסתמכים על זמינותם של מודלים פרה-אקליניים מתאימים שיכולים לחזות במדויק את תגובות המטופלים. אחד החסרונות של מודלים פרה-קליניים קיימים הוא חוסר היכולת לשמר בהקשר את מיקרו-וירוס הגידול האנושי (TME) ולייצג במדויק הטרוגניות תוך-אנושית, ובכך להגביל את התרגום הקליני של נתונים. לעומת זאת, על ידי ייצוג התרבות של שברים חיים של גידולים אנושיים, פלטפורמת explant נגזרת המטופל (PDE) מאפשרת לבחון תגובות סמים בהקשר תלת מימדי (3D) המשקף את התכונות הפתולוגיות והארכיטקטוניות של הגידולים המקוריים מקרוב ככל האפשר. דיווחים קודמים עם PDEs תיעדו את היכולת של הפלטפורמה להבחין בין כימוס רגישים לבין גידולים עמידים chemore, והוכח כי הפרדה זו מנבאת את תגובות המטופל לאותן כימותרפיות. במקביל, PDEs מאפשרים את ההזדמנות לחקור תכונות מולקולריות, גנטיות והיסתולוגיות של גידולים המנבאים תגובות לתרופות, ובכך לזהות סמנים ביולוגיים עבור ריבוד מטופלים, כמו גם גישות התערבותיות חדשניות לחש גידולים עמידים. מאמר זה מדווח על מתודולוגיית PDE בפירוט, מאיסוף דגימות מטופלים ועד לניתוח נקודות קצה. הוא מספק תיאור מפורט של שיטות נגזרות ותרבות, המדגיש תנאים מותאמים לגידולים מסוימים, במידת הצורך. לניתוח נקודות קצה, יש דגש על אימונופלואורסצנטיות מרובת מולטיפלקסים והדמיה רב-ספקטרלית ליצירת פרופיל מרחבי של סמנים ביולוגיים מרכזיים בתוך אזורים גידוליים ושטרומליים כאחד. על ידי שילוב שיטות אלה, ניתן לייצר נתוני תגובה כמותית ואיכותית לתרופות שיכולים להיות קשורים לפרמטרים קליניאופתולוגיים שונים ובכך עשויים לשמש לזיהוי סמן ביולוגי.

הדמיה רב-ספקטרלית של קטעים היסתולוגיים מוכתמים MIF מאפשרת זיהוי ופנוטיפינג של אוכלוסיות תאים בודדים וזיהוי של רכיבים סרטניים וסטרומליים ב- TME המהולל (איור 2). הדמיה רב-ספקטרלית שימושית במיוחד לניתוח רקמות עם אוטופלואורסצנטיות פנימית גבוהה, כגון רקמות עם תכולת קולגן גבוהה, שכן היא מאפשרת לאות autofluorescence להיות דה-סובב מאותות אחרים ולא נכלל בניתוח הבא. לאחר מכן, רקמת סיליקו וסגמנטציה של תאים מאפשרת כימות של תגובת התרופה עם שפע של יציאות כולל, אך לא רק, מספרי תאים גולמיים (למשל, אחוז חיוב...

מאמר זה מתאר שיטות לדור, טיפול תרופתי וניתוח של explants נגזרים על ידי המטופל להערכת תגובות לתרופות גידול במערכת מודל חי, רלוונטי למטופל, פרה-קלינית.

An understanding of drug resistance and the development of novel strategies to sensitize highly resistant cancers rely on the availability of suitable ...

המסלקים שמקורם במטופלים הם שיטה לטווח קצר המספקת נתוני תגובה מיידיים לתרופות שיכולים לחזות במדויק את תוצאות המטופל. פלטפורמות PD מאפשרות לבחון תגובות תרופתיות בהקשר תלת-ממדי המשקף את המאפיינים הפתולוגיים והארכיטקטוניים של הגידולים האזוריים מקרוב ככל האפשר. Explants יש פוטנציאל להציע תובנות חדשניות על חילוף החומרים ומנגנון הפעולה של תרופה כדי להקל על זיהוי של סמנים ביולוגיים פרמקודינמיים חדשים.לפני תחילת הניסוי, נקו את כל הציוד הכירורגי עם פתרון 70% משקאות חריפים מתילאט תעשייתיים. מלאו צלחת תרבות של 10 ס"מ עם 25 מיליליטר של מדיום טרי על הקרח. באמצעות פינצטה, להעביר את הדגימה על משטח שעווה דנטלי ולהשתמש בשני להבי שתל העור לחתוך את הרקמה לרסיסים של כשני עד שלושה מילימטרים מעוקבים.מעבירים את explants לתוך צלחת 10 ס"מ ומניחים שש עד תשע חתיכות של הרקמה לתוך צינור מיליליטר אחד המכיל 10% פתרון פורמלין לא חוצץ עבור דגירה 24 שעות בטמפרטורת החדר. מלאו את המספר הרצוי של בארות של צלחת שש באר עם 1.5 מיליליטר של מדיום טרי לכל טוב. ומניחים תרבות אורגנוטיפית להכניס צלחת לתוך כל באר, כך שהוא צף על גבי המדיום.מניחים שישה עד תשעה explants על כל דיסק הכנס ולאחסן עבור דגירה 16 שעות בחממה 5% פחמן דו חמצני כדי לאפשר התאוששות. למחרת, להוסיף מדיום טרי וסם לכל באר של צלחת חדשה. כלול באר לבקרת הרכב.כאשר כל הטיפולים התרואתיים הוכנו, השתמש פינצטה להעביר תוספת אחת לכל באר של צלחת באר שש החדשה עבור דגירה 24 עד 48 שעות בחממה דו תחמוצת הפחמן. לאחר הטיפול התרואתי, העבר את הדיסקים לשש צלחות באר חדשות המכילות 10% פורמלין. ולהוסיף כמה טיפות של 10% פורמלין לחלק העליון של כל explant כדי להבטיח כיסוי מלא עם הקיבעון במשך 24 שעות של דגירה בטמפרטורת החדר.למחרת, להשרות מספר מתאים של ספוגים היסתולוגיים קטנים ב 70% פתרון מתילאט תעשייתי. ומניחים את הספוגים בתוך קלטות היסתולוגיה. כאשר כל הספוגים הונחו, להעביר את כל explants מאותו מצב טיפול תרופתי על ספוג יחיד עם התרופה מטופלת בצד של כל explant יצירת קשר עם הדיסק המוחדר.מניחים עוד ספוג ספוג מראש על גבי כל explant ולסגור את הקלטת כדי לאבטח את explants בקלטת. לאחר מכן תטביעו את הקלטות בפתרון מתיל תעשייתי של 70% לפני שתמשיכו בעיבוד ההסטולוגי. לאחר הסריקה, בצע ניתוח אימון וטען את הסריקות המכילות את הבולים להכשרה לתוכנת הניתוח המתאימה.בתצוגת מצב יחיד, נווט בין התמונות ובחר את הסריקות כדי לנתח את הסריקה עם פלואורסצנטיות מהותית. עם סריקת פלואורסצנטיות מהותית בתצוגה אחת, לחץ על בורר הפלואורסצנטיות האוטומטית כדי לצייר מקטע על אזור של רקמה לא נגועה. לחץ על ערוך סמנים וצבעים והזן את שמות הסמנים בתיבה המשויכת לכל פלואורופור.לחץ על להכין תמונות כדי לאפשר לתוכנה להפחית את עוצמת הפלואורסצנטיות המהותית מכל התמונות שהועלו. לחץ על שלב רקמת המקטע מעל המסך כדי לפתוח את חלון האימון של פילוח הרקמות. בחלונית קטגוריות הרקמות, הזן את השם של כל קטגוריית רקמה לפלח.לחץ על צייר, כדי לצייר אזורים סביב קבוצות של תאים בקטגוריית הרקמה של עניין. לאחר מכן עבור לקטגוריית הרקמה הבאה וצייר אזורים חדשים. כאשר כל אזורי האימון הוגדרו, השתמש במקטע רקמת הרכבת, והמתן לדיוק האימונים כדי להתיישב.אולי לערך קרוב ל 100%לחץ על פלח כל לפלח את הרקמות. לאחר אימות איכות פילוח הרקמות, לחץ על פילוח תאים ובחר את התאים הסלולריים לפלח. כדי להגדיר את הרכיב הגרעיני, השתמש במחוון העוצמה הטיפוסי כדי להתאים את הסף המשמש לזיהוי הפיקסלים הגרעיניים.משוב חי מסופק על-ידי חלון התצוגה המקדימה. כדי לפצל את אשכולות הפיקסלים הגרעיניים, בלוח הפיצול של הרכיבים הגרעיניים, בחר את הלחצן המתאר בצורה הטובה ביותר את איכות הכתמים של הגרעינים והשתמש בסרגל המחוון כדי להתאים את רגישות הפיצול. לאחר מכן לחץ על פלח שוק הכל כדי לפלח את כל התמונות.כאשר כל התמונות כבר פלחו, בלוח phenotypes, להוסיף את רשימת פנוטיפים להיות מזוהה ולהזין את השם של פנוטיפים לתוך תיבת הטקסט המתאימה. לחץ על ערוך פנוטיפים כדי לבחור תא מסוים ולבחור את הפנוטיפ המתאים בתפריט הנפתח. לאחר השלמת הבחירה להכשרה, לחץ על מסווג הרכבת כדי להעריך את התוצאה של כל פנוטיפ.המשך עם פנוטיפ הכל, שמור את הפרוייקט ולחץ על ייצוא. בחר בכרטיסיה ניתוח אצווה וטען את הפרוייקט באלגוריתם האצווה או בתיבת הפרוייקט. כדי לייצא את התמונות והטבלאות, בחר את כל התיבות באפשרויות הייצוא, לחץ על הוסף שקופיות וטען את כל התמונות המכילות את הבולים עבור האצוות שהוכנו בעבר.לאחר מכן לחץ על הפעל אל ניתוח אצוות ההתחלה של חותמת אחת וייצוא הנתונים המתאימים כאשר הם נרכשו. הדמיה רב-ספקטרלית של רקמת הסבר NSCLC מוכתמת בסמנים של כדאיות התא, מאפשרת זיהוי ופנוטיפינג של אוכלוסיות תאים בודדים, כמו גם זיהוי של רכיבים גידוליים וסטרומליים בתוך הסביבה מיקרו הגידול explant. פילוח רקמות ותאים של סמן הכדאיות התא מכתים תמונות מרובות ספקטרליות כפי שהודגם, ניתן להשתמש כדי לכמת מוות תאים והתפשטות ב explants נגזר המטופל שטופלו בתרופות מעניינות.לדוגמה, בניתוח זה, בדגימות רקמה מגידולים שטופלו ב- Nivolumab, זוהו מספר גבוה יותר של תאים גוססים בהשוואה לדגימות הגידול שטופלו בקרה. בנוסף, כפי שמודגם, היכולת לחלץ מידע מרחבי מנתוחים מוכתמים, מאפשרת חישוב של מרחקים בין-עירוניים. Explants יכול לשמש גם ליצירת פרופיל מרחבי נרחב או ציטומטריה המונית, המאפשרת למאות סמנים ביולוגיים להיות בפרופיל בו זמנית ברזולוציית חברת הבת תוך שמירה על המבנה 3D של המדגם.PDs יכול לחזות את היעילות של אימונותרפיה. לדוגמה, ניתן להבחין בין מקרים רגישים או עמידים למעכבי מחסום חיסוני ולחקור את המנגנונים העומדים בבסיס הבחנה זו.

patient-derived-tumor-explants-as-live-preclinical-platform-for

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

כאן, הקמנו שיטה לבדיקת יעילות התרופה עם דגימות כירורגית של גידולים במוח, המכונה "שיטת explant הגידול". באמצעות שיטה זו, אנו יכולים להעריך את יעילות התרופה בלי לשבור את microenvironment של גידולים מוצקים. כדי לאמת את האמינות של שיטה זו, אנו מתארים נתונים עם נציג הדגימה glioma שלנו שטופלו הסוכן קו ראשון הנוכחי כימותרפיות, temozolomide.

שיטה לפיתוח נגד סרטן רומן והתרופות באמצעות Explants גידול של דגימות כירורגי

קווים הוקמו סרטן התאים וxenografts היו עמוד התווך של מחקר הסרטן בעשורים האחרונים. עם זאת, הראיות האחרונות עולה כי תגובה לטיפול מושפעת במידה רבה על ידי מייקרו-סביבת התאים הסרטניים. לכן, פיתחנו ניתוח vivo לשעבר של דגימות גידול ראשוניות למטרות פיתוח תרופות.

Ex Vivo טיפול תגובה של גידולים ראשוניים ו / או הקשורים גרורות לפרה קלינית וקליני של Therapeutics

ניצול גידולים שמקורם המטופל במודל פרה-קליני תת עורית הוא דרך מצוינת ללמוד את היעילות של טיפולים חדשניים, גילוי סמן ביולוגי חזוי, ושבילי סמים עמידים. מודל זה, בתהליך פיתוח התרופות, יש חשיבות רבה לקביעת גורלו של טיפולים חדשניים נגד סרטן רבים לפני למחקר קליני.

פיתוח ותחזוקה של גידול נגזר החולה פרה xenograft דגם לחקירת Novel טיפולים נגד סרטן

כדי לאפשר זיהוי רגישה מאוד של סרטן המעי הגס האנושי disseminating (CRC) תאים להמדינות רקמות, במסמך זה נראה עבור התמרה חושית יעילה של חלקיקים lentiviral חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) לתוך תאים תא צורב PDX-derived CRC פרוטוקול לפני הזרקת שלהם לתוך עכברים הנמען, עם תצפית מיקרוסקופית סטריאו-זריחה.

רגישות גבוהה זיהוי של Micrometastases שנוצרו על-ידי Organoids Lentivirus transduced GFP תרבותי מגידול נגזר המטופל הגס

המטופל נגזר מבע (pdx) דגמים נוספים ביותר בסדר מלנומה מולקולרית תכונות ביולוגיות, הם ניבוי יותר של תגובת הטיפול לעומת רקמה פלסטית מסורתית התרבות מבוסס assays. כאן אנו מתארים את פרוטוקול ההפעלה הסטנדרטית שלנו להקמת דגמי PDX חדשים ואפיון/ניסויים של דגמי PDX קיימים.

מלנומה מטופלת-נגזר מודל Xenograft

כאן אנו מציגים פרוטוקול כדי לבדוק את היעילות של טיפולים ייעודיים שנבחרו על בסיס האיפור גנומית של הגידול. הפרוטוקול מתאר זיהוי ואימות של הסדרים מבניים של ה-DNA, חרט גידולים של חולים לתוך עכברים והתגובות בדיקה לתרופות המתאימות.

בדיקת טיפולים ייעודיים בסרטן באמצעות ניתוח שינוי DNA מבנית והמטופל נגזר Xenografts

אנו מציגים פרוטוקול למדידת תגובת סמים בזמן אמת בפרוסות רקמת הגידול organotypic. האסטרטגיה הניסיונית המתוארים כאן מספקת פלטפורמה לביצוע מסכי סמים בינוניים בעלי תפוקה גבוהה על פרוסות רקמה הנגזרות מגידולים קליניים או של העכבר בתנאים vivo לשעבר.

מדידת תגובת התרופה בזמן אמת בפרוסות רקמה אורגנוטימית לגידול

מודלים של קסנוגרפט (PDX) שמקורם בחולה ומודלים של עכברים מהונדסים גנטית הניתנים להשתלה מחדשים בנאמנות מחלות אנושיות והם מודלים מועדפים לחקר בסיסי ותרגום של סרטן השד. כאן, שיטה מתוארת להשתלה אורתוטופית שברי גידול השד לתוך כרית השומן הממארי כדי ללמוד ביולוגיה של הגידול ולהעריך את תגובת התרופה.

השתלה אורתוטופית של גידולי שד כמודלים פרה-אקליניים לסרטן השד

שיטה מתוארת כדי ליצור אורגנואידים באמצעות קסנוגרפטים שמקורם בחולה (PDX) עבור הקרנת במבחנה, וכתוצאה מכך זוגות תואמים של מודלים in vivo / in vitro. גידולי PDX נקצרו/ עובדו לחתיכות קטנות באופן מכני או אנזימטי, ואחריו השיטה של החכמים לגדל אורגנואידים גידולים שהיו מעבר, cryopreserved ומאופיין נגד PDX המקורי.

יצירת זוגות מודלים תואמים של PDX ו-PDX לחקר פרמקולוגיה של סרטן

מערכת בדיקת תפוקה גבוהה במבחנה פותחה להערכת תרופות נגד סרטן באמצעות אורגנוידים של גידול שמקורם במטופל (PDOs), בדומה לרקמות סרטן אך אינן מתאימות למערכות במבחנה עם 96-well ו-384-well.

תפוקה גבוהה במבחנה במבחנה באמצעות organoids גידול נגזר המטופל

פרוטוקול זה מתאר הערכה מתוקננת של רגישויות לתרופות למעכבי איתות ממוקדים במודלים אורגנויד שמקורם בחולה NSCLC.

רגישות ליצירת פרופילים לטיפולים ממוקדים באורגנוידים שמקורם ב-EGFR-Mutant NSCLC

חקור שימוש ב-explants ממקור מטופלים לבדיקת תרופות בסרטן. שיטה זו שומרת על מבנה הגידול התלת-ממדי ומאפשרת חיזוי מדויק של תגובת החולה לטיפול תרופתי וגילוי ביומרקרים.

גידול שמקורו במטופל explants כפלטפורמה פרה-אקלינית "חיה" לחיזוי עמידות לתרופות בחולים

גלה סרטונים נוספים