הרדמה ואינטובציה של גורי עכברים טרום-סוכרתיים לניתוחי לב-חזה

הפרוטוקול שלנו הוא השיטה המתועדת הראשונה להרדמה ואינטובציה אנדוטרכאלית של גורי עכברים לפני גיל ההתבגרות לניתוחי לב-חזה. פיתחנו משטרי הרדמה, ציוד מיוחד ושיטות טיפול ספציפיות המאפשרות אינטובציה אנדוטרכאלית של גורי עכברי C57 Black Six J בני 10 = יום לניתוחי לב-חזה תוך מזעור תמותת בעלי חיים. אנו צופים כי מפעיל מנוסה באינטובציות בוגרות יכול להשיג מיומנות באינטובציה לפני גיל ההתבגרות לאחר תרגול על 10 המלטות של שבעה עד שמונה גורים המדגים את ההליך יהיה ד"ר Jianxin Wu, מדען צוות בכיר מהמעבדה שלנו.

ביום הניסוי, הקימו ציוד מיוחד לאינטובציה של גורים בני 10 ימים כמתואר בכתב היד. לצורך הניתוח יש להשתמש בצינורית המורכבת מצינור פלסטיק באורך 19 מילימטר המחובר למתאם נעילת פיתיון נשי מפלסטיק בקוטר 21 מילימטר. הקשיחו את צינורות הצינורית על ידי הכנסת פיסת חוט נחושת דרך מתאם נעילת הפיתיון.

הצמידו את הגור המרדים לפלטפורמת אינטובציה. לפני אינטובציה של הגור המרדם, לבדוק את עומק ההרדמה על ידי רפלקס צביטה כפות. רפלקס כיווץ הכפות חייב להיות נוכח אך מופחת במידה ניכרת מזה של בעל חיים מודע.

החזיקו את לשונו של הגור עם מלקחיים קטנים והשתמשו בלרינגוסקופ המעוצב מתוך פיסת חוט נחושת ואור סיבים אופטיים גמישים כדי לחשוף את הגלוטיות ואת מיתרי הקול. הטה את הצינורית הנוקשה כך שקצה נעילת הפיתיון יהיה מעט נמוך יותר מהקצה, וברגע שמיתרי הקול נפרדים הכנס את הצינורית וקדם אותה עד שמתאם נעילת הפיתיון נמצא ממש מחוץ לפה. ואז מיד להסיר את החוט.

להעריך את עומק ההרדמה לאחר אינטובציה על ידי היכולת של החיה לנשום באופן ספונטני. העבירו את הגור המושרט למשטח חימום בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. אשר אינטובציה מוצלחת של קנה הנשימה של גור נושם באופן ספונטני על ידי חסימה קצרה של קטטר אינטובציה כדי לבדוק כי זה מונע תנועה בחזה.

חבר את הצינורית האנדוטרכאלית למכונת הנשמה, המספקת 100% חמצן בקצב זרימה של ליטר אחד לדקה. ההליך צריך לקחת פחות מ 15 שניות כדי למזער rebreathing. לאחר גרימת מישור כירורגי של הרדמה לניתוח, לאשר אינטובציה קנה הנשימה על ידי בדיקה כי תדירות התנועה של דופן בית החזה שווה לזה של מכונת ההנשמה.

הניחו את הגור תחת מיקרוסקופ כירורגי עם מטרות 10X ו-16X לניתוח אוטם שריר הלב. לאחר חיטוי העור, בצע חתך עור אופקי בין הצלע השלישית והרביעית בדופן הצידית השמאלית של החזה באמצעות אזמל. בעזרת מלקחיים עדינים, לפתוח את בית החזה על ידי דיסקציה קהה של החלל intercostal ולהשתמש retractor כדי לשמור על החלל פתוח.

לגרום אוטם שריר הלב על ידי קשירת העורק הכלילי השמאלי דיסטלי לתוספתן הפרוזדורים השמאלי עם תפר מונופילמנט 9-0 פוליפרופילן. לאחר 10 דקות של ניתוח אוטם, לסגור את העור עם תפר 7-0. נקו את הדם עם 70% אתנול או מלח וחטאו את החתך עם בטאדין.

אפשרו לבעל החיים להתאושש והבטיחו שהנשימה הספונטנית תתחדש תוך מספר דקות. לאחר מכן החזירו את הגור לתא המחומצן שחומם מראש ועקבו ברציפות במהלך ההתאוששות. כאשר רפלקס הימין מתחדש, מוציאים את הגור.

שפשפו בעדינות את הגור עם מצעי כלוב ביתיים. שמרו על חום גופו של הגור ובדקו שהנשימה סדירה ושהגור מסוגל לתנועה ספונטנית. החזירו את הסכר לכלוב.

לאחר מכן החזירו את כל הגורים לאחר שהתאוששו לחלוטין מההרדמה. מאכלסים את הסכר והגורים למשך הלילה בכלוב המונח חציו על משטח חימום בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. ביום השלישי שלאחר הניתוח, יש לאבטח את הגור המרדים בתנוחת שכיבה על כרית חימום על ידי הקשה על הזנב.

מניחים חוט על החותכות ומדביקים את הגור לתנוחה ושומרים על הראש מוארך לחרוט אף. לחטא את העור עם 70% אתנול. באמצעות מספריים עדינים, לבצע חתך של סנטימטר אחד בעור מעל עורק הצוואר המשותף הימני לאורך קנה הנשימה ולתמרן את כלי הדם החשוף באמצעות צינור פוליאתילן יחיד לומן המחובר למחט 26 מד למתן 0.2 מיליליטר של מלח הפריני למשך דקה אחת לאחר גרימת דום לב כמתואר בכתב היד, לנתח את הווריד הג'וגולרי הימני דרך החתך הקודם ולעבור אותו.

יש לחדור ללב עם 0.2 מיליליטר של PBS ולאחר מכן עם 0.1 מיליליטר של 0.2% כחול אלקסיאני כדי להכתים את שריר הלב המרוחק שאינו אוטם. בדוק זלוף מוצלח, עדות על ידי שטיפת דם, PBS ולאחר מכן כחול Alcian דרך הווריד jugular. בסיום, פתחו את בית החזה וכרו את הלב על ידי ניתוח רקמת החיבור וכלי הדם שמסביב כדי לשחרר את הלב.

שטפו את הלב ב-PBS, ולאחר מכן הסירו את האטריה וצלמו את הלב עם מצלמה המותקנת על מיקרוסקופ כירורגי באמצעות סובייקטיבי פי 10. בניסויים המקדימים, משטר ההרדמה הותאם לגורים בני 10 ימים. מנה של 50 מיליגרם לק"ג קטמין, שישה מיליגרם לק"ג קסילזין ו-0.18 מיליגרם לק"ג אטרופין הביאה לעומק מספיק של הרדמה כדי לאפשר אינטובציה אנדוטרכאלית של גורים נושמים באופן ספונטני במשקל 5.5 עד 7.30 גרם.

מכיוון שהגורים הקלים יותר לא יכלו לסבול את המינון הגבוה יותר של הרדמה, הפחתת המינון ל-30 מיליגרם לק"ג קטמין, ארבעה מיליגרם לק"ג קסילזין ו-0.12 מיליגרם לק"ג אטרופין אפשרה אינטובציה של הגורים במשקל 4.50 עד 5.49 גרם. לשם השוואה, הפחתה נוספת של מינון הקטמין ל-20 מיליגרם לק"ג אפשרה אינטובציה של גורים במשקל של 3.15 עד 4.49 גרם. הטבלה מציגה גם את מספר ואחוז הגורים המושרשים שהמשיכו לניתוח.

הגורים עם משקל גוף נמוך יותר היו קשים יותר לאינטובציה מאשר גורים כבדים יותר ודרשו יותר ניסיונות שהביאו לאחוזי הישרדות נמוכים יותר של הגורים מאשר קבוצת המשקל הגבוהה ביותר. יתר על כן, מספר גדול יותר של גורים מונשמים מקבוצת המשקל הגבוהה ביותר המשיכו לניתוח אוטם שריר הלב מאשר הקבוצה במשקל נמוך ובינוני. ההישרדות יומיים לאחר ניתוח אוטם שריר הלב הייתה עקבית בין קבוצות המשקל השונות בשיעור של 86%-92% עומק ההרדמה הוא קריטי לאינטובציה ולהישרדות.

אם ההרדמה קלה מדי, אינטובציה קשה. אם הם עמוקים מדי, הגורים יפסיקו לנשום באופן ספונטני במהלך האינטובציה או לאחריה. פרוטוקול אינטובציית ההרדמה שלנו יאפשר להקים מודלים הדורשים ניתוחי חזה לבביים בעכברים לפני גיל ההתבגרות, ויאפשר, למשל, מחקרים על הריאות, הוושט והלב בתקופה זו.