יישום כריתה זעיר פולשנית של גידולי מוח במכרסמים לאיסוף רקמות בעלות כדאיות גבוהה

זוהי פרדיגמת כריתה של גידולי מוח הנחוצה מאוד במחקר פרה-קליני על טיפולים בגידולי מוח. היא מאפשרת כריתה סטנדרטית בגישה זעיר-פולשנית, ובמקביל, היא גם מוצמדת למערכת אוטומטית לשימור רקמות. פרוטוקול זה מאפשר לבעל החיים לשרוד לאחר הניתוח ובכך מסייע בהבנת השינויים במצב המחלה לאחר טיפול באותה חיה.

זה עוזר ביישומים טיפוליים ברצף ובקיטועי זמן. באמצעות טכניקה זו, אנו יכולים להעריך את הביולוגיה של המחלה ולתכנן ניהול אפשרי לאחר מכן. יש לכך השלכות משמעותיות והזדמנויות בגילוי תרופות ובטיפולים חדשניים.

ניתן להרחיב את המושגים של כריתה סטנדרטית, גישה זעיר-פולשנית ושימור רקמות אוטומטי לסוגים אחרים של גידולים במערכות איברים שונות, כגון גידולי כבד וסרטן ראש וצוואר. הפרוטוקול פשוט והמערכת ידידותית למשתמש. עדיף לקרוא את הפרוטוקול שפורסם, המכיל את כל השלבים הדרושים ופתרון בעיות.

התחל את הניסוי על ידי הערכת העכבר עבור הרגעה על ידי צביטה של הבוהן. החל משחה אופטלמית על העיניים כדי למנוע יובש של הקרנית. לאחר מכן, הנח את העכבר על מסגרת סטריאוטקטית.

הסר את הסיכות מהניתוח הקודם וחטא את העור עם מחזורים מתחלפים של פילינג על בסיס כלורהקסידין או בטאין ואלכוהול. לאחר מכן יש ליצור חתך בקו האמצע באורך סנטימטר לאורך הצלקת הניתוחית הקודמת באמצעות אזמל סטרילי. חברו את פיסת היד של מירס לזרוע הסטריאוטקטית דרך מתאם הבמה.

כדי להגדיר את מכשיר ה-MIRS, הכנס את כבל החשמל שנקבע בלוח האחורי לתוך כלי הקיבול של כבל החשמל. הפעל או כבה את אספקת החשמל למערכת על-ידי מעבר בין אפס לאחד. הכנס קצה אחד של צינור החנקן לתוך ההתאמה הגברית בלוח האחורי של הקונסולה.

סובב את אום החיבור בכיוון השעון כדי להדק אותו. ודא כי לחץ האספקה אינו עולה על 100 PSIG וחבר את הצינור לאספקת החנקן. אטמו את המכסה של יציאת הוואקום כדי למנוע דליפה.

בדוק כי ידית השאיפה בחזית הקונסולה מוגדרת על 100, כי אין דליפה במערכת השאיפה, וכי לחץ אספקת קלט חנקן נכון. הכנס את מחבר דוושת הרגל האפורה לכלי הקיבול האפור שלו עד שהוא ילחץ. באותו אופן, הכנס את מחבר הידית הכחולה לכלי הקיבול הכחול שלו.

הגדילו כל ידית על ידי שאיפת נוזל סטרילי לתוך הפתח דרך הצינורות והידית ולאחר מכן לתוך המכל כדי להבטיח שהחלק הפנימי של הצינור והידנית משומן. בחר את מצב השאיפה בלוח הקדמי של הקונסולה והתחל באמצעות דוושת הרגל. הכנס את צינורית 23-G MIRS לתוך חור הבור לעומק של 2.5 מילימטרים.

התחל את תהליך הכריתה על ידי לחיצה על דוושת כף הרגל המחוברת לצינורית. בצע מחזורים מלאים של כריתה באמצעות ידית הבקרה בידית. לאחר תהליך הכריתה, משכו את צינורית MIRS בעלת 23 המדים והוסיפו חמישה מיליליטרים של 1X PBS כדי לשטוף את הצינורות ולהיפטר מכל שאריות הפסולת.

לאחר מכן, סגור את הפצע עם מהדק והסר את העכבר מהמסגרת הסטריאוטקטית. החזירו את העכבר לכרית החימום כדי להתאושש מההרדמה לפני שתחזירו אותו לכלוב שלו. לאחר הניסוי, נקו את הצינורית במדיה ובאוויר צוננים כדי לדחוף את כל הרקמה שנכרתה בחזרה למכל האיסוף.

הסר את מיכל האיסוף מהמערכת והנח מכסה. לאחר מכן, הכניסו את הקצה הדיסטלי של הצינורית לתוך 3% מי חמצן והחלו את היניקה כדי למלא את קו היניקה בחזרה למכל איסוף היניקה. תן לו לעמוד במשך 60 עד 90 שניות ולפעום לסירוגין אוויר ומדיה כדי לשטוף אותו.

לטבול את דגימת הגידול בצלחת תרבית רקמה המכילה RBC lysis בינוני במשך חמש דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן מניחים מסנן של 70 מיקרון על צינור חרוטי של 50 מיליליטר ומשתמשים בבוכנה של מזרק כדי להעביר את דגימת הגידול דרך המסנן. עם פיפטה העברה, השתמש במדיית RPMI 1640 כדי להעביר את התאים וכל מסת רקמה דרך המסנן.

צנטריפוגה ב 428 פעמים G במשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס. השליכו את הסופר-נטנט והחזירו כל דגימה בחמישה מיליליטר של מדיום RPMI 1640 מוכן. מניחים את הדגימות באינקובטור שייקר למשך 20 דקות ב-200 סל"ד ב-37 מעלות צלזיוס.

לאחר הדגירה, צנטריפוגה של הדגימות ב 428 פעמים G במשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס ולהשליך את supernatant. סנן תאים בודדים דרך מסננת תאים של 70 מיקרון וצנטריפוגה בטמפרטורה של 274 פעמים G במשך שלוש דקות בארבע מעלות צלזיוס. בצע ניתוח כדאיות תאים עם טריפאן כחול והמוציטומטר.

כריתה כירורגית בעכברים באמצעות MIRS גרמה לירידה משמעותית בנטל הגידול כפי שעולה מהפחתת האות הביולומינסנטי הבסיסי הממוצע עבור קבוצות עם עומס גידול גדול וקטן כאחד. בהשוואה לתמונות MRI לפני כריתה של גידולים, ניתן לזהות את חלל הכריתה בסריקות שלאחר הכריתה כאזור היפו-אינטנסיבי גדול ועגול באתר החיסון של הגידול. בקטעים מוכתמים H&E נצפו חלל כריתה מעגלי ברור עם שפת מוצרי דם, דלקת ותאי גידול שיוריים.

נפח הכריתה גדל באופן משמעותי כאשר בוצעו שני סיבובים של פתח החיתוך, מה שאיפשר אופטימיזציה של נפח הכריתה בהתאם לנטל הגידול. השוואת ההישרדות בעכברים עם גידולים שלא טופלו לעומת עכברים שעברו כריתה של גידולים על ידי MIRS הראתה עלייה בהישרדות מ-16 ל-22 ימים בקבוצת הגידול הקטנה. באופן דומה, בקבוצה עם נטל גידול גדול יותר, ההישרדות החציונית עלתה מ -12 ל -19 ימים.

תמונות מיקרוסקופיה קלה של הדגימות שנלקחו ממערכת שימור הרקמות הופיעו כתאים בודדים עם נוכחות של כמה גושי רקמה קטנים ביום אפס. לאחר שבעה ימים, התאים שנקטפו עם מירס הראו היווצרות נוירוספרה בתרביות תרחיף, מה שהצביע על פוטנציאל התחלת הגידול שלהם. חשוב לטהר ולשטוף את מערכת הצינורות מיד לאחר ההליך כדי למנוע סתימת המערכת.

לאחר הליך זה, ניתן להשתמש במחקרי יעילות של טיפולים ומחקרים על סמנים אבחוניים ופרוגנוסטיים על בעלי חיים ששרדו לאחר כריתה כירורגית עם מערכת כריתה זעיר-פולשנית.