Name: בתחום ההדמיה באתרו של קורנית עכבר באמצעות 2-פוטון מיקרוסקופית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-01-25T19:52:00.000+00:00
Duration: 15 min
Description: למדו הדמיה של תאי תימוס בזמן אמת באמצעות מיקרוסקופיית 2-פוטון בעכברים נאונטליים. שיטה זו מאפשרת מעקב אחרי נדידת תאים בודדים ומאפיינת מנגנוני בחירה חיובית ושלילית של תאי T.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים מאט פול ג&#39;ימי וו לקבלת סיוע טכני.

המאמצת העברת הזרק בילודים עם 50-100ul של מח העצם באמצעות מזרק אינסולין 2-4 פעמים במהלך 3-7 הימים הראשונים לחייהם, עם יחס תורם ל-מארח הסופי של 01:01. מטרת אתר זריקה מתחת עצם החזה וכלוב הצלעות, אבל מעל המעיים והקיבה. הכנס את המחט רחוק מספיק כדי לחדור את הצפק, להיזהר לא לנקב את הסרעפת. אין זה נדיר עבור חלק במח העצם ללכת לאיבוד במהלך ההזרקה. ניתן להקטין את ההפסד על ידי התרופפות האחיזה שלך על הגור תוך כדי להזריק מנת לאפשר לעור להתרחב, ואז, לאט מוציא את המחט. Dissection של קורנית עושים חתך דרך קו האמצע לחתוך או לקרוע את העור ממנו כדי לחשוף את החזה. חכה עד עצם החזה וחתך דרך הצפק והסרעפת. חותכים את הצדדים של כלוב הצלעות כדי לחשוף את חלל בית החזה. בלוטת התימוס נמצאת בחלק העליון של הלב. לכן, כדי לשמר את המבנה של התימוס, לשמור על הרקמה הסובבת כפי שאתה לנתח את בלוטת התימוס. שוטפים את התימוס עם PBS לשמור אותו מהתייבשות במהלך הניתוח. בעדינות להקניט ממנו רקמה עודפת על פני השטח של הקפסולה הרתי ולחצות את שתי האונות. הכנת רקמות for Imaging השתמש דבק רקמות וטרינרי על הדבק התימוס שום coverslip ריבוע. השתמש pipetteman לשים שבריר microliter של דבק. מורחים את הדבק לאורך משוער והרוחב של התימוס. התימוס יציב נגד coverslip וגרור אותו למקומו. שני הפוטונים הדמיה רקמה היא שקוע DMEM ללא פנול אדום כי הוא perfused עם 95% חמצן ופחמן דו חמצני 5% והתלהב 37 ° C. עירור שני הפוטונים הושג באמצעות Spectra-Physics MaiTai לייזר מכוון 900nm, ו - CFP, ה-GFP, YFP וטקסס אור אדום פליטת הופרד באמצעות 495, 515, 560 מראות dichroic ואסף באמצעות גלאי PMT.

<ol><li>Kyewski, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seeding+of+thymic+microenvironments+defined+by+distinct+thymocyte-stromal+cell+interactions+is+developmentally+controlled%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Seeding of thymic microenvironments defined by distinct thymocyte-stromal cell interactions is developmentally controlled.</a> J Exp Med. 166, 520-538 (1987).</li>
<li>Ladi, E., Yin, X., Chtanova, T., Robey, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thymic+microenvironments+for+T+cell+differentiation+and+selection%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Thymic microenvironments for T cell differentiation and selection.</a> Nat Immunol. 7, 338-343 (2006).</li>
<li>Witt, C. M., Raychaudhuri, S., Schaefer, B., Chakraborty, A. K., Robey, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+Migration+of+Positively+Selected+Thymocytes+Visualized+in+Real+Time%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Directed Migration of Positively Selected Thymocytes Visualized in Real Time.</a> PLoS Biol. 3, (2005).</li>
</ol>

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.

הדמיה דו פוטון התימוס מאפשר לנו לבחון, איברים חיים שלמים אינטראקציות הגירות העומדים בבסיס האירועים מבחר בתוך התימוס.

בתחום ההדמיה באתרו של קורנית עכבר באמצעות 2-פוטון מיקרוסקופית

In situ Imaging of the Mouse Thymus Using 2-Photon Microscopy

מיקרוסקופית שני הפוטונים (TPM) מאפשר לנו תמונה עמוק לתוך התימוס ולתעד את האירועים החשובים לפיתוח thymocyte. כדי לעקוב אחר המעבר של יחידים בתוך קהל של thymocytes, אנחנו מייצרים מפלצות בילוד שם פחות מאחוז אחד של thymocytes נגזרות תורם כי הוא מהונדס עבור חלבון פלואורסצנטי להביע בכל מקום בגוף. כדי להפיק אלה מפלצות hematopoetic חלקית, מקבלי בילוד מוזרקים עם מח עצם בין 3-7 ימים של גיל. לאחר 4-6 שבועות, העכבר הוא הקריב את התימוס הוא גזור בקפידה bissected שמירה על הארכיטקטורה של הרקמה יהיה הדמיה. התימוס הוא מודבק על coverslip כהכנה לשעבר vivo הדמיה על ידי TPM. במהלך הדמיה התימוס נשמר DMEM ללא פנול אדום כי הוא perfused עם 95% חמצן ופחמן דו חמצני 5% והתלהב 37 ° C. שימוש בגישה זו, אנו יכולים לחקור את האירועים הנדרשים עבור הדור של רפרטואר מגוון T התא.

אנו מציגים צעד אחר צעד הוראות עבור הדור של מפלצות הילוד וכן לנתיחה והכנת התימוס עבור vivo לשעבר הדמיה על ידי מיקרוסקופית 2-פוטון.

מיקרוסקופיה דו-פוטונית (TPM) מאפשרת לנו לדמות תמונות בעומק הטימוס ולתעד אירועים החשובים להתפתחות התיימוציטים. כדי לעקוב אחר ה...

דימוי דו-פוטוני שימושי עבור תחום האימונולוגיה מכיוון שהוא מאפשר לנו לעקוב אחר נדידתה של תא בודד בעת מפגשו עם סביבתו. באמצעות מעקב אחר נדידה באתר התימוס, ושימוש במיקרוסקופיה דו-פוטונית, אנו יכולים לאפיין את המנגנון של ברירה חיובית ושלילית.שלום, אני אינה לוטי מהמעבדה של ד"ר אלן רובי באוניברסיטת קליפורניה בברקלי. ואני פול הרצמרק, גם אני מהמעבדה של אלן רובי. היום נראה לכם כיצד אנו מבצעים דימות in situ של רקמת תימוס, ואני אראה לכם כיצד ניתן להשתמש במיקרוסקופ הדו-פוטוני שלנו כדי לדמות את התימוס.אראה לכם את השלבים המקדימים לדימוי דו-פוטוני. אלו כוללים את הפרוצדורות הבאות: בידוד תאי גזע המטופואטיים ממוח העצם, העברה אדופטיבית של תאי מוח עצם לרכבנים, נתיחה וחצייה של התימוס, והכנת הרקמה לדימוי באמצעות מיקרוסקופיה סורקת בלייזר דו-פוטוני. אז בואו נתחיל.לפני שנוכל להכין את התימוס לדמיון, עלינו לבצע תחילה העברה אדופטיבית של תאי מחית עצם לעכבר ניאונטלי. תאי מחית עצם אלה בודדו מהרגליים האחוריות של עכברים טרנסגניים המבטאים GFP באופן אוניברסלי. זוהי מזרק אינסולין עם 50 µL של מחית עצם.אנו מבצעים שתיים עד ארבע הזרקות למארחים בני שלושה עד שבעה ימים, תוך שימוש במח עצם מתורם אחד עבור כל גור שמוזרק. כאן יש לנו גור בן חמישה ימים; צבטו את העור לאחור כדי למנוע מהגור לזוז במהלך ההזרקה ולהחזיק את העור מתוח. כוו

in-situ-imaging-of-the-mouse-thymus-using-2-photon-microscopy

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

שני הפוטונים הדמיה חשף תנועתיות הלימפוציטים אינטראקציות הסלולר בתוך הצומת לימפה בתנאי הבסיס, במהלך תגובה חיסונית 1. הנה, אנחנו מדגימים העברת המאמצת של תאים T, בידוד של בלוטות הלימפה, ועל תנועתיות הדמיה של CD4 + T תאים בתוך הצומת לימפה explanted.

Dissection ו 2-Photon הדמיה של בלוטות לימפה הפריפריה עכברים

אנו מתארים שיטה שוב ושוב לדמיין microglia Murine והפצת...

הגולגולת דק חלון טכניקה כרונית דו פוטון ב-vivo הדמיה של microglia Murine של מודלים של Neuroinflammation

פיתחנו במעבדה רומן כלים ופרוטוקולים לרכישת הדמיה intravital של התימוס. הטכניקה שלנו אמור לעזור בזיהוי של "נישות" בתוך התימוס שבו התפתחות תא T מתרחשת.

הדמיה Intravital של קורנית עכבר באמצעות 2-פוטון מיקרוסקופית

הדמיית זמן-lapse בבעל חיים חי מספקת מידע רב ערך על ארגון מחדש מבני במוח השלם. כאן, אנו מציגים תכשיר גולגולת דק המאפשר הדמיה טרנס-גולגולתית של מבנים סינפטיים בעלי תווית פלואורסצנטית בקליפת העכבר החי על ידי מיקרוסקופ דו-פוטוני.

שני פוטונים<em&gt; In vivo</em&gt; הדמיה של קוצים הדנדריטים בCortex העכבר באמצעות דלילה, גולגולת הכנה

המטרה של הפרוטוקול היא להציג האורך intravital מעקב בזמן אמת אחר thymocytes על-ידי סריקת מיקרוסקופ ב שתלים הרתי בתא הקדמי של העין עכבר לייזר. את השקיפות של הקרנית, אמוניה השתל מאפשר הקלטה ברציפות קדמון תא גיוס ויציאה T-cell בוגרת.

בזמן אמת In Vivo המעקב של Thymocytes בתא הקדמי של העין על ידי סריקת מיקרוסקופ לייזר

במחקר זה, אנו מציגים פרוטוקול לבצע שני הפוטונים intravital הדמיה ותא ניתוח אינטראקציות בין רירית והכו אותי מאתר לאחר ההדבקה בנגיף שפעת. פרוטוקול זה יהיה רלוונטי עבור החוקרים ללמוד את הדינמיקה תא החיסון במהלך זיהומים בדרכי הנשימה.

אינטראקציה תא הדמיה ב רירית והכו אותי במהלך זיהום בנגיף שפעת באמצעות מיקרוסקופ שני הפוטונים Intravital

שינויים מורפולוגיים מתרחשים בתאי החיסון החיסונית התגובה בעקבות ההפעלה ולקדם שינויים בגיוס הסלולר. ניצול 2-פוטון הדמיה בשילוב עם חלבון מהונדס בצורה גנטית לפיברוסט-1 (FSP1)-יצור; tdTomato פלומפולט-stop-floxed (tb/tb) קו העכבר הירוק fluorescently מתויג ליפופוליל-fitc, אנחנו יכולים להדגים ספיגה ספציפית מאוד של ליפופוליד בפיברוהכדורים ושינויים מורפולוגיים ב vivo.

ב Vivo שני צבעים 2-פוטון הדמיה של תאי כתב שתייגת גנטית בעור

הפרוטוקול הנוכחי מתאר הליך רדיולוגיה התערבותי שנקבע להזרקה תוך-תימית בעכברים כדי למנוע את הסיכון לניתוח פתוח ולשפר את הדיוק של זריקות מלעוריות עיוורות.

טכניקה זעיר פולשנית, מדויקת ויעילה להזרקה תוך-תימית בעכברים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להדמיה תוך-חיונית של הריאה השמאלית של העכבר המושתל באמצעות מיקרוסקופ של שני פוטונים. זה מהווה כלי רב ערך לחקר דינמיקה תאית ואינטראקציות בזמן אמת לאחר השתלת ריאות מורין.

מיקרוסקופ תוך-ויטלי דו-פוטוני של ריאת העכבר המושתל

פרוטוקול זה מכיל תיאור מקיף של גישה שלב אחר שלב למודל עכבר חלון גולגולתי כרוני ותסחיף מיקרווסקולרי מותאם להדמיה מיקרוסקופית דו-פוטונית בתוך ה-vivo באמצעות מיקרוספירות פוליסטירן פלואורסצנטיות.

מודל עכבר של תסחיף מיקרווסקולרי למיקרוסקופיה דו-פוטונית בחיים באמצעות מיקרוספירות פוליסטירן פלואורסצנטיות

מחקר זה מציג גישת הדמיה דו-פוטונית ב-in vivo להמחשת המבנים של טרמינלי אקסון בעלי סף נמוך (LTMR) בעור כף הרגל הקדמית של עכברים. באמצעות דימות חוזר ברזולוציה גבוהה של אקסונים בודדים, שיטה זו מספקת פלטפורמה חדשה לחקר מבנה ותפקוד המעגל החישי העור במהלך ההתפתחות ובמבוגרים.

הדמיה תוך-חיונית של שני פוטונים של מורפולוגיית אקסון חושי במגע בעור עכבר

למדו הדמיה של תאי תימוס בזמן אמת באמצעות מיקרוסקופיית 2-פוטון בעכברים נאונטליים. שיטה זו מאפשרת מעקב אחרי נדידת תאים בודדים ומאפיינת מנגנוני בחירה חיובית ושלילית של תאי T.

בתחום ההדמיה באתרו של קורנית עכבר באמצעות 2-פוטון מיקרוסקופית

גלה סרטונים נוספים