Name: כריתת כבד מורחבת של 78% במודל כירורגי עכבר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-05-24T13:20:00.000+00:00
Duration: 5 min 25 s
Description: למדו כיצד לבצע כריתת כבד מורחבת של 78% במודל כירורגי עכבר לחקר התחדשות הכבד וטיפול גני מכוון. מודל זה מחקה תסמונת small-for-size ומאפשר הערכת אסטרטגיות טיפוליות לשיפור שרידות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מענקי R01 של NIH DK063275 HL086741 ל- CF. PB ו- TA הם מקבלי מלגת NRSA מ- NHLBI T32 מענק הכשרה HL007734.

השיטות המתוארות בפרוטוקול נוהל זה אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC) במרכז הרפואי בית ישראל דיקונס (BIDMC). כל הניסויים הושלמו בהתאם ובהתאם להנחיות IACUC ומתקן המחקר בבעלי חיים BIDMC.
1. עכבר הכנה לפני הניתוח
<ol><li>לגלח את בטן העכבר מאמצע עצם החזה לאזור suprapubic עם קוצץ.</li>
	<li>יש להשרות הרדמה כללית עם איזופלורן 1-4% ב-100% חמצן. לאחר הרדמה, הניחו את העכבר בשכיבה על שדה הניתוח עם כרית חימום מתחת. לפני ביצוע חתך, צבטו היטב את הבוהן כדי לוודא שרפלקס הדוושה נעדר (אם קיים, בעל החיים יגיב). התאימו את רמת ההרדמה לפי הצורך כדי להגיע למצב של הרדמה כללית. הערה: טיטרט איזופלורן לפי הצורך כדי לשמור על הרדמה כללית נאותה.</li>
	<li>מתן 1.2 מ"ג / ק"ג buprenorphine שחרור מורחב (ER) תת עורית עבור שיכוך כאבים לאחר הניתוח. מניחים את העכבר שכיבה עם הגפיים הקדמיות והרגליים האחוריות מורחבות ולאבטח את הגפיים עם קלטת; לאחר מכן, הכינו שדה סטרילי לניתוח. הערה: ודא שהגפיים הקדמיות רפויות כאשר הן מאובטחות כדי שהנשימה לא תיפגע.</li>
	<li>הכן את הבטן עם מלוחים סטריליים חמים ומקלוני בטאדין, לסירוגין בין כל מטוש 3 פעמים. עטפו את הבטן בצורה סטרילית.</li>
</ol>2. כריתת כבד
<ol><li>בצע חתך לפרוטומי אנכי בקו האמצע דרך העור מתהליך xiphoid לאזור suprapubic באמצעות אזמל. לאחר מכן, לחתוך דרך linea alba עם מספריים חדים להיכנס חלל הצפק ולהרחיב חתך זה לאורך חתך העור. הערה: בטוח יותר לחתוך תחילה את linea alba באזור subxiphoid שבו הכבד עמוק לדופן הבטן כדי למנוע פגיעה במעי הבסיסי.</li>
	<li>למשוך את דופן הבטן לרוחב באמצעות retractors מתאים; לאחר מכן, מהדקים את תהליך הקסיפואיד עם hemostat ומושכים את עצם החזה בצורה מעולה כדי לחשוף את הכבד.</li>
	<li>משוך את הכבד בצורה נחותה כדי לחשוף את הרצועה המזויפת ולאחר מכן, חוצה את הרצועה לאורך הכבד באמצעות מספריים חדים. משכו את הכבד לכיוון בית החזה כדי לחשוף את הרצועה ההפטוגסטרית ואת רצועות האונה התוך כבדית ועברו מבנים אלה באמצעות מספריים זעירים חדים. הערה: יש לבצע את הפסילה בעדינות רבה עם אפליקטורים לחים עם קצוות כותנה מכיוון שהכבד, העטוף בכמוסת גליסון, שביר מאוד וקל לחבול ולשרוך.</li>
	<li>משכו את האונה החציונית בצורה מעולה תוך שמירה על האונה השמאלית במקומה האנטומי המקורי. לעטוף תפר משי 5-0 סביב החלק העליון-מדיאלי של LL. לשקף את LL בצורה עליונה לכיוון בית החזה כדי לחשוף את פני השטח של האונה, לאחד את קצוות התפר בבסיס האונה, ולקשור את התפר בבסיס. יש לוודא כי התפר אינו חוסם את זרימת הדם בווריד הנבוב התחתון (IVC) או בווריד הפורטלי לפני קשירת התפר לקשירת הווריד הפורטלי. הערה: עדיף לקשור תפר זה בזמן שה- LL משתקף בצורה עליונה לכיוון בית החזה, כך שהשילוש הפורטלי חשוף היטב במהלך הקשירה. זה מאפשר כריתה של האונה קרוב לבסיס מבלי לפגוע במבנים סמוכים.</li>
	<li>החזירו את LL רק דיסטלי לעניבת התפר באמצעות מספריים חדים וודאו ששרוול קטן של רקמה (~ 2 מ"מ) מפריד בין התפר לקצה האונה המנותחת. אשר hemostasis.</li>
	<li>שיקפו את האונה החציונית בצורה מעולה לכיוון בית החזה, הניחו תפר משי 5-0 סביב בסיס ה-ML, והחזירו את ה-ML למקומו האנטומי המקורי. קירוב קצוות התפר מעל בסיס האספקט העליון של ML וודא לקשור אותם בבסיס האונה. כורתים את ה-ML הקשור, ומשאירים שרוול קטן של רקמת שאריות סביב עניבת התפר. אשר hemostasis.</li>
	<li>גייסו את הכבד מימין לשמאל כדי לחשוף את האונות העליונות והתחתונות הימניות ולשקף בזהירות את האונות הללו בצורה מדיאלית ונחותה. עטפו תפר 5-0 מעל האספקט העליון-מדיאלי של ה-RUL כדי להבטיח שהתפר מקיף את בסיס ה-RUL ולאחר מכן, החזירו את ה-RUL לכיוון בית החזה. עוטפים את התפר מתחת ל-RUL וקושרים את הקצוות קרוב לבסיסו, ואז כורתים אותו, ומשאירים שרוול קטן של רקמת שאריות סביב עניבת התפר. הערה: קשירה פרוקסימלית מדי בבסיס ה-RUL עלולה לסכן את אספקת הדם ל-RLL, מה שעלול לגרום לאיסכמיה של ה-RLL ולמוות של העכבר תוך 24 שעות לאחר הניתוח. לעומת זאת, קשירה רחוקה מדי מבסיס RUL מפחיתה את כמות כריתת מסת הכבד, ובכך מגדילה את שיעורי ההישרדות לאחר הניתוח מעבר למצופה.</li>
	<li>להחזיר את הכבד הנותר למצב אנטומי מנוחה ולהבטיח hemostasis. במידת הצורך, יש להפעיל לחץ עם גזה על אזורים של דימום קל בשולי הכבד המנותחים.</li>
	<li>סגרו את דופן קו האמצע של הבטן (שכבות הפאשיה והשרירים) באמצעות תפר פוליגלקטין 5-0 בצורה רציפה. סגור את חתך העור עם סיכות או 5-0 תפרי מונופילמנט.</li>
	<li>יש להפסיק את ההרדמה ולעקוב אחר העכבר עד שהוא חוזר להכרה ויכול לבצע אמבולציה תקינה.</li>
</ol>3. טיפול לאחר הניתוח
<ol><li>התבונן בעכבר לאחר הניתוח כדי להבטיח התאוששות מתאימה (כלומר, העכבר ער, ערני ואמבולטורי בתוך הכלוב) ושליטה בכאב. בדוק את העכבר כל 2 שעות עד 6 שעות לאחר ההליך, ולאחר מכן מדי יום. הערה: צפוי שהעכבר ינוע לאט יותר בתוך הכלוב לאחר הניתוח. העכבר אמור להתאושש בכלוב מבודד מעכברים אחרים ולחזור לחברתם של עכברים אחרים רק כאשר הוא מחלים לחלוטין.</li>
	<li>מתן זריקות מלח רגילות מחוממות (0.1-1.0 מ"ל, תת עורית או intraperitoneal) אם העכבר הופך hypovolemic מנוזל בלתי נתפס או איבוד דם מוגזם מניתוח.</li>
</ol>

מודל כריתת כבד מורחב של עכבר למחקרי התחדשות כבד

<ol><li>Martins, P. N., Theruvath, T. P., Neuhaus, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+of+partial+hepatectomies%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Int%22%5BJournal%5D)">Rodent models of partial hepatectomies.</a> Liver Int. 28 (1), 3-11 (2008).</li>
<li>Higgins, G., Anderson, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+pathology+of+the+liver+I.+Restoration+of+the+liver+of+the+white+rat+following+partial+surgical+removal%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Pathol%22%5BJournal%5D)">Experimental pathology of the liver I. Restoration of the liver of the white rat following partial surgical removal.</a> Arch Pathol. 12, 186-202 (1931).</li>
<li>Koniaris, L. G., McKillop, I. H., Schwartz, S. I., Zimmers, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Surg%22%5BJournal%5D)">Liver regeneration.</a> J Am Coll Surg. 197 (4), 634-659 (2003).</li>
<li>Fausto, N., Campbell, J. S., Riehle, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Liver regeneration.</a> Hepatology. 43 (2), S45-S53 (2006).</li>
<li>Inderbitzin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+resonance+imaging+provides+accurate+and+precise+volume+determination+of+the+regenerating+mouse+liver%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gastrointest+Surg%22%5BJournal%5D)">Magnetic resonance imaging provides accurate and precise volume determination of the regenerating mouse liver.</a> J Gastrointest Surg. 8 (7), 806-811 (2004).</li>
<li>Clavien, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+is+critical+for+liver+surgery+and+partial+liver+transplantation%3A+size+or+quality%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">What is critical for liver surgery and partial liver transplantation: size or quality.</a> Hepatology. 52 (2), 715-729 (2010).</li>
<li>Dahm, F., Georgiev, P., Clavien, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small-for-size+syndrome+after+partial+liver+transplantation%3A+definition%2C+mechanisms+of+disease+and+clinical+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Small-for-size syndrome after partial liver transplantation: definition, mechanisms of disease and clinical implications.</a> Am J Transplant. 5 (11), 2605-2610 (2005).</li>
<li>Hori, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+and+reproducible+hepatectomy+in+the+mouse+using+the+clip+technique%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Simple and reproducible hepatectomy in the mouse using the clip technique.</a> World J Gastroenterol. 18 (22), 2767-2774 (2012).</li>
<li>Kamali, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extended+liver+resection+in+mice%3A+state+of+the+art+and+pitfalls-a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Med+Res%22%5BJournal%5D)">Extended liver resection in mice: state of the art and pitfalls-a systematic review.</a> Eur J Med Res. 26 (1), 6(2021).</li>
<li>Mitchell, C., Willenbring, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reproducible+and+well-tolerated+method+for+2%2F3+partial+hepatectomy+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">A reproducible and well-tolerated method for 2/3 partial hepatectomy in mice.</a> Nat Protoc. 3 (7), 1167-1170 (2008).</li>
<li>Borowiak, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Met+provides+essential+signals+for+liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Met provides essential signals for liver regeneration.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (29), 10608-10613 (2004).</li>
<li>Boyce, S., Harrison, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+detailed+methodology+of+partial+hepatectomy+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim+%28NY%29%22%5BJournal%5D)">A detailed methodology of partial hepatectomy in the mouse.</a> Lab Anim (NY). 37 (11), 529-532 (2008).</li>
<li>Greene, A. K., Puder, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+hepatectomy+in+the+mouse%3A+technique+and+perioperative+management%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Surg%22%5BJournal%5D)">Partial hepatectomy in the mouse: technique and perioperative management.</a> J Invest Surg. 16 (2), 99-102 (2003).</li>
<li>Mitchell, C., Willenbring, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Erratum%3A+A+reproducible+and+well-tolerated+method+for+2%2F3+partial+hepatectomy+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Erratum: A reproducible and well-tolerated method for 2/3 partial hepatectomy in mice.</a> Nat Protoc. 9 (6), 1532(2014).</li>
<li>Studer, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Significant+lethality+following+liver+resection+in+A20+heterozygous+knockout+mice+uncovers+a+key+role+for+A20+in+liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Significant lethality following liver resection in A20 heterozygous knockout mice uncovers a key role for A20 in liver regeneration.</a> Cell Death Differ. 22 (12), 2068-2077 (2015).</li>
<li>Longo, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A20+protects+mice+from+lethal+radical+hepatectomy+by+promoting+hepatocyte+proliferation+via+a+p21waf1-dependent+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">A20 protects mice from lethal radical hepatectomy by promoting hepatocyte proliferation via a p21waf1-dependent mechanism.</a> Hepatology. 42 (1), 156-164 (2005).</li>
<li>Michalopoulos, G. K., DeFrances, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Liver regeneration.</a> Science. 276 (5309), 60-66 (1997).</li>
<li>Diehl, A. M., Rai, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+regeneration.+3.+Regulation+of+signal+transduction+during+liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Liver regeneration. 3. Regulation of signal transduction during liver regeneration.</a> FASEB J. 10 (2), 215-227 (1996).</li>
<li>Diehl, L., Morse, M. A comparison of selected organ weights and clinical pathology parameters in male and female CD-1 and CByB6F1 hybrid mice 12-14 weeks in age. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.criver.com/sites/default/files/resources/doc_a/AComparisonofSelectedOrganWeightsandClinicalPathologyParametersinMaleandFemaleCD-1andCByB6F1HybridMice12-14WeeksinAge.pdf">https://www.criver.com/sites/default/files/resources/doc_a/AComparisonofSelectedOrganWeightsandClinicalPathologyParametersinMaleandFemaleCD-1andCByB6F1HybridMice12-14WeeksinAge.pdf</a> (2023).</li>
<li>CD-1® IGS mouse. Charles River Laboratories. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.criver.com/products-services/find-model/cd-1r-igs-mouse?region=3611">https://www.criver.com/products-services/find-model/cd-1r-igs-mouse?region=3611</a> (2023).</li>
<li>C57BL/6J mouse organ weight. The Jackson Laboratory. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.jax.org/de/-/media/jaxweb/files/jax-mice-and-services/b6j-data-summary.xlsx">https://www.jax.org/de/-/media/jaxweb/files/jax-mice-and-services/b6j-data-summary.xlsx</a> (2023).</li>
<li>Inderbitzin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerative+capacity+of+individual+liver+lobes+in+the+microsurgical+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Regenerative capacity of individual liver lobes in the microsurgical mouse model.</a> Microsurgery. 26 (6), 465-469 (2006).</li>
<li>Zhou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((L-carnitine+promotes+liver+regeneration+after+hepatectomy+by+enhancing+lipid+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">L-carnitine promotes liver regeneration after hepatectomy by enhancing lipid metabolism.</a> J Transl Med. 21 (1), 487(2023).</li>
<li>Linecker, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Omega-3+fatty+acids+protect+fatty+and+lean+mouse+livers+after+major+hepatectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg%22%5BJournal%5D)">Omega-3 fatty acids protect fatty and lean mouse livers after major hepatectomy.</a> Ann Surg. 266 (2), 324-332 (2017).</li>
<li>Haber, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+levels+of+glucose-6-phosphatase+gene+and+protein+expression+reflect+an+adaptive+response+in+proliferating+liver+and+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">High levels of glucose-6-phosphatase gene and protein expression reflect an adaptive response in proliferating liver and diabetes.</a> J Clin Invest. 95 (2), 832-841 (1995).</li>
<li>Rickenbacher, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arguments+against+toxic+effects+of+chemotherapy+on+liver+injury+and+regeneration+in+an+experimental+model+of+partial+hepatectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Int%22%5BJournal%5D)">Arguments against toxic effects of chemotherapy on liver injury and regeneration in an experimental model of partial hepatectomy.</a> Liver Int. 31 (3), 313-321 (2011).</li>
<li>Aravinthan, A. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+preexisting+and+post-transplant+diabetes+mellitus+on+outcomes+following+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">The impact of preexisting and post-transplant diabetes mellitus on outcomes following liver transplantation.</a> Transplantation. 103 (12), 2523-2530 (2019).</li>
<li>Gonzalez, H. D., Liu, Z. W., Cashman, S., Fusai, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+for+size+syndrome+following+living+donor+and+split+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastrointest+Surg%22%5BJournal%5D)">Small for size syndrome following living donor and split liver transplantation.</a> World J Gastrointest Surg. 2 (12), 389-394 (2010).</li>
<li>Mahmud, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+prediction+models+for+post-operative+mortality+in+patients+with+cirrhosis%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Risk prediction models for post-operative mortality in patients with cirrhosis.</a> Hepatology. 73 (1), 204-218 (2021).</li>
<li>Kooby, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+steatosis+on+perioperative+outcome+following+hepatic+resection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gastrointest+Surg%22%5BJournal%5D)">Impact of steatosis on perioperative outcome following hepatic resection.</a> J Gastrointest Surg. 7 (8), 1034-1044 (2003).</li>
<li>Ma, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mesenchymal-epithelial+transition+factor-agonistic+antibody+accelerates+cirrhotic+liver+regeneration+and+improves+mouse+survival+following+partial+hepatectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Transpl%22%5BJournal%5D)">A mesenchymal-epithelial transition factor-agonistic antibody accelerates cirrhotic liver regeneration and improves mouse survival following partial hepatectomy.</a> Liver Transpl. 28 (5), 782-793 (2022).</li>
<li>Hori, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+and+sure+methodology+for+massive+hepatectomy+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Simple and sure methodology for massive hepatectomy in the mouse.</a> Ann Gastroenterol. 24 (4), 307-318 (2011).</li>
<li>Ramsey, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A20+protects+mice+from+lethal+liver+ischemia%2Freperfusion+injury+by+increasing+peroxisome+proliferator-activated+receptor-alpha+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Transpl%22%5BJournal%5D)">A20 protects mice from lethal liver ischemia/reperfusion injury by increasing peroxisome proliferator-activated receptor-alpha expression.</a> Liver Transpl. 15 (11), 1613-1621 (2009).</li>
<li>Arvelo, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A20+protects+mice+from+D-galactosamine%2Flipopolysaccharide+acute+toxic+lethal+hepatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">A20 protects mice from D-galactosamine/lipopolysaccharide acute toxic lethal hepatitis.</a> Hepatology. 35 (3), 535-543 (2002).</li>
</ol>

אין ניגודי עניינים לחשוף.

כדי לבצע בהצלחה כריתת כבד מורחבת של 78% הגורמת לקטלניות של 50% בעכברים, חיוני שכל אונת כבד תועבר כריתה מדויקת. רמה זו של מיומנות ודיוק יכולה להיות מושגת רק אם ההליך מבוצע שוב ושוב. עקומת האימון משתנה בין המפעילים אך בדרך כלל דורשת 3-6 חודשי תרגול. כריתת כבד שמסירה פחות מ-78% מה-TLM תגרום לשיעורי הישרדות גבוהים יותר, בעוד שכריתת כבד שמסירה יותר מ-78% מה-TLM תגרום לקטלניות גדולה יותר. כל כריתת אונה היא מאתגרת, אם כי לא באותה מידה.
האונה השמאלית היא הקלה ביותר לכריתה אמינה. בסיס LL צר, וכאשר משתק...

מודלים של כריתת כבד כירורגית של עכברים וחולדות, שתוארו לראשונה בשנת 1931, הם המודלים הניסיוניים הנפוצים ביותר המשמשים לחקר הבסיס המולקולרי של התחדשות הכבד. הם יכולים גם להיות שימושיים במחקר מדעי תרגומי כדי לבדוק ולפתח אסטרטגיות לשיפור התוצאות לאחר כריתת כבד מורחבת או השתלת שתלי כבד תת-אופטימליים 1,2,3,4. כריתת כבד חלקית (PH) בעכברים כרוכה בהסרה של כ -2/3 (66%) ממסת הכבד הכוללת (TLM), אשר כאשר מבוצעת בבעלי חיים בריאים יש תוצאות יוצאות דופן5. ההליך קצר במשכו, ניתן לשחזור בקלות עקב שונות קטנה באנטומיה של כבד העכבר, וההישרדות לאחר הניתוח מתקרבת בדרך כלל ל -100%1.
כריתת כבד חלקית של 2/3 המקיפה את כריתת האונה השמאלית (LL) והאונה החציונית (ML) מאפשרת לאונות השיוריות להתחדש יחסית ללא הפרעה על ידי דלקת לוברית או הגבלה של זרימת הכבד והחוצה. במקום זאת, זרימה ורידית פורטלית מוגברת ולאחר מכן לחץ גזירה על תאי אנדותל סינוסואידים בכבד בעקבות PH גורמים להגברת ויסות מתמשך של ביטוי תחמוצת החנקן האנדותל סינתאז (eNOS) ולאחר מכן שחרור תחמוצת החנקן (NO), אשר תורמים להכנה של הפטוציטים לשגשוג והתחדשות הכבד3. תוצאות הנחקרות בדרך כלל לאחר 2/3 PH במודלים של מחלות כגון מחלת כבד שומני לא אלכוהולי או ברקע גנטי ספציפי כוללות סיכון לאי ספיקת כבד חריפה, מדדים איכותיים וכמותיים של יכולת התחדשות הכבד, ותגובות ביולוגיות אחרות ללחץ או לפציעה טראומטית 1,3.
עם זאת, מודל עכברי המחקה תסמונת תפקודית או אנטומית קטנה לגודל, כפי שהיא מתרחשת לאחר כריתת כבד ממושכת לסרטן או השתלת כבד שולי (סטאטוזיס או זמן איסכמי ממושך) או חלקי (מפוצל או מכבד תורם חי), נותר מבוסס היטב. כדי לענות על צורך זה, נדרשים מודלים של כריתות כבד נרחבות יותר המשתרעות מעבר לשמירה על מסת כבד מינימלית (ותפקודית) כדי למדל תסמונת כבד בגודל קטן ואת התמותה המוגברת הקשורה לתסמונתזו 6,7.
האנטומיה של כבד העכבר מציגה שונות מינימלית. כבד העכבר מורכב מחמש אונות, שכל אחת מהן מהווה את האחוז הבא ממסת הכבד הכוללת: אונה שמאלית (LL; 34.4 ± 1.9%), אונה חציונית (ML; 26.2 ± 1.9%), אונה ימנית עליונה (נקראת גם עליונה ימנית) (RUL; 16.6 ± 1.4%), אונה ימנית תחתונה (נקראת גם תחתונה ימנית) (RLL; 14.7 ± 1.4%), ואונה קאודטית (CL, 8.1 ± 1.0%)1, 5. כל אונה מסופקת על ידי שלישיית פורטל, הכוללת ענף של עורק הכבד, ענף של וריד הפורטל, וצינור מרה5. מבחינה היסטורית, תוארו מספר טכניקות לביצוע PH של 2/3 על ידי כריתת LL ו- ML. אלה כוללים: 1) הטכניקה הקלאסית המורכבת מליגטורה אחת בבסיס כל אחת מהאונות המנותחות; 2) טכניקת קליפ המוסטטי, באמצעות קליפסים מטיטניום המיושמים בבסיס האונות המנותחות; 3) טכניקה משמרת פרנכימה מונחית כלי, תוך שימוש בתפרים חודרים פרוקסימליים למהדק; ו-4) טכניקה מיקרוכירורגית מוכוונת כלי דם, לפיה הווריד הפורטלי ועורק הכבד קשורים לפני כריתת אונה1. בעוד שלכל טכניקה יש חוזקות וחולשות יחסיות, אף אחת מהן אינה מניבה קטלניות גבוהה יותר 1,8,9.
במחקר זה אנו מציגים שיטה חדשנית ל-78% PH מורחב בעכברים. במודל הזה, שלוש מתוך חמש אונות כבד, כולל LL, ML ו-RUL, מוסרות בנפרד באמצעות טכניקת ליגטורה (איור 1). הליך זה גורם לכריתה של כ -78% (77.2 ± 5.2%) ממסת הכבד הכוללת. הבחירה שלנו להסיר את LL ו- ML בנפרד, ולא "en bloc" כמו בטכניקת PH קלאסית, ממזערת סיבוכים הקשורים לכריתה en bloc של שתי אונות אלה, כגון היצרות וריד נבוב על-הכבד וסיכון מוגבר לנמק של האונות הנותרות כאשר הליגטורה היחידה מוחלת קרוב מדי לווריד קאווה1, 10,11,12,13,14. זה חיוני לפני המעבר לשלב הסופי של הליך זה כדי להסיר את RUL. כריתת כבד נרחבת זו בעכברים בני 8-12 שבועות, מסוג פרא C57BL/6 גורמת לקטלניות של 50% תוך שבוע מהניתוח עקב התחדשות כבד כושלת הגורמת לאי ספיקת כבד15,16. מודל עכברי זה של קטלניות מוגברת לאחר כריתת כבד ממושכת של 78% משחזר כראוי את הפתופיזיולוגיה של תסמונת קטנה לגודל ומאפשר פיתוח ובדיקה של אסטרטגיות חדשניות לשיפור התוצאות.

<table><tbody><tr><td>2 x 2 גזה</td><td>Covidien</td><td>2146</td><td>ניתוח: דיסקציה</td></tr><tr><td>5-O תפר מונופילמנט ניילון</td><td>נווה מדבר</td><td>50-118-0631</td><td>ניתוח: סגירת עור</td></tr><tr><td>5-O תפר משי</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>18020-50</td><td>ניתוח: קשירת אונת כבד</td></tr><tr><td>5-O תפר ויקריל</td><td>אתיקון</td><td></td><td>NC9335902 ניתוח: סגירת דופן הבטן</td></tr><tr><td>מלקחיים</td> <td>אדסוןניתוח Braintree</td><td>Scientific FC028</td><td>: דיסקציה</td></tr><tr><td>ספוגיות אלכוהול (2)</td><td>BD</td><td>326895</td><td>חיטוי</td></tr><tr><td>בופרנורפין ניסוח שחרור מושהה&nbsp;</td><td>Zoopharm</td><td>N/A</td><td>גוזם אלחוטי לשיכוך כאבים</td></tr><tr><td></td><td>Braintree Scientific</td><td>CLP-9868-14</td><td>גילוח</td></tr><tr><td>מלקחיים מעוקלים</td><td>Braintree Scientific</td><td>FC0038</td><td>ניתוח: דיסקציה</td></tr><tr><td>Hemostat</td><td>Braintree Scientific</td><td>FC79-1</td><td>ניתוח: דיסקציה</td></tr><tr><td>Isoflurane חומר הרדמה משאף &nbsp;</td><td>Patterson Veterinary</td><td>RXISO-250</td> מקבע מגנט <td>להרדמה כללית</td></tr><tr><td>(2 חריצים) (2)</td><td>Braintree Scientific</td><td>ACD-001</td><td>ניתוח: להחזקת מחזירים קטנים</td></tr><tr><td>מקבע מגנט (4 חריצים)&nbsp;</td><td>Braintree Scientific</td><td>ACD-002</td><td>כירורגיה: להחזיק מחזירים קטנים</td></tr><tr><td>Microscissors</td><td>Braintree Scientific</td><td>SC-MI 151</td><td>ניתוח: דיסקציה</td></tr><tr><td>מגש ניתוח</td><td>Braintree Scientific</td><td>ACD-0014</td><td>ניתוח: להקמת שדה כירורגי&nbsp;</td></tr><tr><td>פובידון יוד 10% ספוגית (2)</td><td>אזמל חיטוי Medline</td><td>MDS093901ZZ</td><td></td></tr><tr><td>(15 להבים)</td><td>אספן מוצרים כירורגיים</td><td>371615</td><td>ניתוח: דיסקציה</td></tr><tr><td>מספריים חדים (מעוקלים)</td><td>Braintree Scientific</td><td>SC-T-406</td><td>ניתוח: דיסקציה</td></tr><tr><td>מספריים חדים (ישרים)</td><td>Braintree Scientific</td><td>SC-T-405</td><td>ניתוח: דיסקציה</td></tr><tr><td>קטנה אפליקטורים עם קצה כותנה</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>23-400-118</td><td>ניתוח: דיסקציה</td></tr><tr><td>מלקחיים של רקמות (ישר x2)</td><td>Braintree Scientific</td><td>FC1001</td><td>ניתוח: כרית</td></tr><tr><td>חימום דיסקציה (18 אינץ' x 26 אינץ')</td> <td>Stryker</td><td>TP 700</td><td></td></tr><tr><td>משאבת כרית חימום</td><td>מחממת Stryker</td><td>TP 700</td><td></td></tr><tr><td>מפסק ידית תיל מחמם (2)&nbsp;</td><td>ניתוח</td><td>Braintree Scientific ACD-005</td>: <td>כדי להקל על חשיפה של חלל הצפק</td></tr><tr><td>מערכת הרדמה לבעלי חיים קטנים Xenotec Isoflurane</td><td>Braintree Scientific</td><td>EZ-108SA</td><td>הרדמה כללית: מכיל מכשיר אידוי וקונסולה איזופלורן, תא אינדוקציה, ווסת / צינור, מסכת פנים (M)</td></tr></tbody></table>

כריתת כבד מורחבת של 78% במודל כירורגי עכבר

Extended 78&#37; Hepatectomy in a Mouse Surgical Model

כריתת כבד חלקית של 2/3 בעכברים משמשת במחקר לחקר יכולת ההתחדשות של הכבד ולחקור את התוצאות של כריתת כבד במספר מודלים של מחלות. בכריתת כבד חלקית קלאסית של 2/3 בעכברים, שתיים מתוך חמש אונות הכבד, כלומר האונות השמאלית והחציונית המייצגות כ-66% ממסת הכבד, מנותחות בגוש , עם הישרדות צפויה לאחר הניתוח של 100%. כריתת כבד חלקית אגרסיבית יותר היא מאתגרת יותר מבחינה טכנית ולכן כמעט ולא נעשה בה שימוש בעכברים. הקבוצה שלנו פיתחה מודל עכברי של טכניקת כריתת כבד מורחבת שבה שלוש מתוך חמש אונות הכבד, כולל האונות העליונות השמאלית, החציונית והימנית, נכרתות בנפרד כדי להסיר כ -78% ממסת הכבד הכוללת. כריתה ממושכת זו, בעכברים בריאים אחרת, מותירה שאריות כבד שלא תמיד יכולות לקיים התחדשות מספקת ובזמן. כישלון בהתחדשות גורם בסופו של דבר לקטלניות של 50% לאחר הניתוח תוך שבוע אחד עקב אי ספיקת כבד פולמיננטית. הליך זה של כריתת כבד מורחבת של 78% בעכברים מייצג מודל כירורגי ייחודי לחקר תסמונת קטנה בגודל והערכת אסטרטגיות טיפוליות לשיפור התחדשות הכבד והתוצאות במסגרת השתלת כבד או כריתת כבד מורחבת לסרטן.

כריתת כבד מורחבת מוצלחת של 78% צפויה לגרום לתמותה של 50% תוך שבוע אחד בעכברים בוגרים בריאים בגילאי 8-12 שבועות16. כאשר מבוצע כראוי, איבוד דם מינימלי צפוי. דימום שיורי שנמשך יכול להיות נשלט על ידי לחץ ידני. מוות לפני הניתוח בתוך 24 שעות של ניתוח נגרם לעתים קרובות על ידי טעויות טכניות. כשלים טכניים כוללים פגיעה בשוגג בכלי דם גדולים הגורמים לדימום תוך ניתוחי בלתי נסבל; דימום משמעותי לאחר הניתוח לעתים קרובות עקב דימום שיורי משולי הכבד שנותחו; פגיעה במבנה הסובב כגון קשירה בשוגג של השילוש הפורטלי הסמוך,...

מודל העכבר של כריתת כבד חלקית 2/3 (66%) מתואר היטב בספרות, אך לעתים רחוקות נעשה שימוש בכריתת כבד ממושכת יותר המחקה תסמונת קטנה לגודל לאחר השתלת כבד. אנו מתארים הליך מורחב של 78% כריתת כבד במודל עכבר שמביא לכ-50% קטלניות לאחר הניתוח בעכברים בריאים.

Partial 2/3 hepatectomy in mice is used in research to study the liver's regenerative capacity and explore outcomes of liver resection in a number of ...

היקף המחקר שלנו הוא להעריך אסטרטגיות טיפוליות לשיפור התחדשות ותיקון הכבד שיכולות לסייע בשיפור התוצאות של חולים במסגרת השתלת כבד באמצעות השתלת כבד שולית, כמו גם כריתת כבד מורחבת לסרטן הנמצאים בסיכון גבוה יותר לאי תפקוד ראשוני ואי ספיקת כבד חריפה. הצוות שלנו משתמש בפלטפורמות גנומיות, פרוטאומיות ומטבוליות כדי לחקור התחדשות כבד ולזהות מטרות טיפוליות חדשות לשיפור התוצאות. המיקוד של המעבדות שלנו הוא לפתח פלטפורמות מתקדמות לטיפול גנטי כדי לספק את הגן A20 להגנה על הכבד והתחדשות הכבד.חשפנו תפקיד חזק להגנה על הכבד עבור A20, המכונה גם TNFAIP3, באמצעות הפונקציות האנטי-דלקתיות, האנטי-אפופטוטיות והשגשוגיות המשולבות שלו בהפטוציטים. טיפולים גנטיים ממוקדים בכבד A20 המוגנים מפני קטלניות במודלים עכבריים של דלקת כבד רעילה, האריכו 78% וכריתת כבד רדיקלית קטלנית 90% וגם איסכמיה ממושכת של הכבד. מחקרים טרום תרגומיים מבטיחים אחרונים בבעלי חיים גדולים מקדימים תרגום קליני של טיפול זה.פרוטוקול זה מציע מודל כירורגי ייחודי המיועד לחקר תסמונת גודל קטן, כמו גם הערכת אסטרטגיות טיפוליות לשיפור התוצאות של כריתת כבד נרחבת לסרטן, והגדלת שיעורי ההצלחה של השתלות כבד בקריטריונים שוליים ומורחבים. כאשר 78% כריתת כבד מבוצעת כראוי, הליך זה גורם להישרדות של כ -50% לאחר הניתוח לעומת כמעט 100% הישרדות הקשורה לכריתת כבד חלקית קלא

extended-78-hepatectomy-in-a-mouse-surgical-model

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

הפרעה בזרימת המרה גורמת לפגיעה דלקתית חמורה בכבד כולסטטי עם רצף אופייני תלוי זמן של שינויים מורפולוגיים. כאן אנו מציגים פרוטוקול לקשירה כירורגית של צינור המרה המשותף בעכברים המאפשר לגרום לתגובה פיברוטית חזקה לאחר 21 עד 28 יום.

מרה Duct קשירת בעכברים: אינדוקציה של דלקת כבד פגיעה ופיברוזיס ידי חסימתית cholestasis

שכיחות גבוהה של הישנות גידול לאחר כריתה של גרורות בכבד נותרה בעיה לא פתורה. מודל העכבר המאויר עשוי להיות שימושי כדי לחקור את הסיבות להישנות כזו. הוא משלב לראשונה מודל כריתת כבד עם הזרקת תאי גידול תוך כבדיים.

השפעת הכריתה כבדה על צמיחת גידול intrahepatic

תארנו פרוטוקול לביצוע חלקי hepatectomy (PHx), השתלת תא באמצעות הטחול ב במנוד ראש. SCID (הנהון. CB17-Prkdcscid/J) עכברים. ב פרוטוקול זה, חתך לחשוף ולאחר נכרות האונה השמאלית של הכבד, ואחריו עוד חתך השתלת intrasplenic של תאים.

השתלת intrasplenic של Hepatocytes לאחר Hepatectomy חלקית ב במנוד ראש. SCID עכברים

כאן, אנו מציגים שיטה חדשה עבור כריתה חלקית של האונה השמאלית הכבד בעכברים neonatal (יום 0). פרוטוקול חדש זה מתאים ללמוד פציעת כבד חריפה ותגובה פציעה בהגדרת neonatal.

Hepatectomy Lobular חלקית: מודל ניתוח עבור התחדשות הכבד מורפולוגיות

כאן, אנו מתארים את ההתפתחות של מודל מורטין רלוונטי קלינית של סרטן הכבד לכידה של תכונות החיסונית אופייני של סרטן hepatocellular (HCC).

מודל העכבר המושרה של הפאציט הנגרמת על ידי מדגם של סרטן הפטאותאי העולה בקביעת דלקת הכבד פיברוזיס

ספיקת כבד חריפה מודל בעלי חיים שפותחה במחקר הנוכחי מציג חלופה אפשרית למחקר של טיפולים פוטנציאליים. המודל הנוכחי מעסיק את ההשפעה המשולבת של פציעה פיזית ומושרה בתרופות בכבד ומספק חלון זמן מתאים כדי ללמוד את הפוטנציאל של טיפולים חדשניים.

הדור של מודל עכברוש של אי ספיקת כבד חריפה על ידי שילוב 70% כריתת הריאה חלקית ופרצטמול

הפרוטוקול הנוכחי מייעל את שיטות זילוח / דה-צלולריזציה באתרו של הכבד ושיטות מיקרוסקופיה של שני פוטונים כדי ליצור פלטפורמה אמינה להמחשת הדינמיקה של עיצוב מחדש של מטריצה חוץ-תאית (ECM) במהלך סטאטוהפטיטיס לא אלכוהולית (NASH).

הדמיה תלת מימדית של המטריצה החוץ תאית של הכבד במודל עכבר של דלקת כבד לא אלכוהולית

כאן, אנו מציגים פרוטוקול ליצירת קסנושתרים אורתוטופיים של קרצינומה הפטוצלולרית עם ובלי קשירת עורק הכבד ומבצעים הדמיית טומוגרפיה לא פולשנית של פליטת פוזיטרונים (PET) של היפוקסיה גידולית באמצעות [18 F]Fluoromisonidazole ([18 F]FMISO) ו- [18 F]Fluorodeoxyglucose ([18F]FDG).

הדמיית PET/MR לא פולשנית במודל עכבר אורתוטופי של קרצינומה הפטוצלולרית

הפטוציטים עמוסי שומנים טבועים בהתחדשות הכבד, אך בדרך כלל הולכים לאיבוד עם צנטריפוגה הדרגתית של צפיפות. כאן, אנו מציגים פרוטוקול בידוד תאים אופטימלי השומר על הפטוציטים סטאטוטיים, ומניב אוכלוסיות מייצגות של הפטוציטים מתחדשים לאחר כריתת כבד חלקית בעכברים.

בידוד של הפטוציטים מתחדשים לאחר כריתת כבד חלקית בעכברים

בפרוטוקול זה נדון ביישום מודל של השתלת כבד אורתוטופית מוצלחת (OLT) בעכברים. בנוסף, נדונים גם אדג'ובנטים לניתוח נוסף של פטנטיות אלוגרפט לאחר OLT מוצלח בעכבר, במיוחד באמצעות סריקות טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת (microCT).

השתלת כבד אורתוטופית מוצלחת בעכברים באמצעות טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת אנגיוגרפיה

קישור מחיצת כבד וקשירת ורידים פורטלית לכריתת כבד בשלבים (ALPPS) הוכח כגורם להתחדשות כבד יוצאת דופן לאחר מספר שבועות לאחר ניתוח בשלב הראשון. מודלים של בעלי חיים שעברו ALPPS פותחו כדי לחקור יכולת התחדשות פוטנציאלית של הכבד ולהשיג תוצאות קליניות חיוביות.

מודל עכברי של מחיצת הכבד המשויכת וקשירת ורידים פורטלית להליך כריתת כבד בשלבים בעזרת מיקרוסקופ

למדו כיצד לבצע כריתת כבד מורחבת של 78% במודל כירורגי עכבר לחקר התחדשות הכבד וטיפול גני מכוון. מודל זה מחקה תסמונת small-for-size ומאפשר הערכת אסטרטגיות טיפוליות לשיפור שרידות.

כריתת כבד מורחבת של 78% במודל כירורגי עכבר

גלה סרטונים נוספים