Name: הדמיה מפעיל T זיכרון תאים באוזן לאחר אינדוקציה של DTH המאמצת (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-14T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 59 s
Description: למדו אינדוקציה של תגובת רגישות מסוג מאוחר באוזן עכברוש ודימוי תאי T זיכרון באמצעות מיקרוסקופיית שני-פוטון. שיטה זו מאפשרת מחקר דינמיקת תאי חיסון בגוף החי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

אינדוקציה של DTH המאמצת נא עיין במאמר יופיטר: <a href="/index/Details.stp?ID=325">אינדוקציה וניטור של רגישות יתר מושהית-Type המאמצת בחולדות</a> כריסטין ביטון, ג'ורג' ק Chandy המחלקה לפיזיולוגיה וביופיזיקה, אוניברסיטת קליפורניה, אירווין J. ניסויים דמיינו, גיליון 8 הנה, יש לנו בפרוטוקול זה שונה באמצעות אנטיגן (Ovalbumin) מצומדות כדי טקסס האדום ביחס 1:1 עם אנטיגן ללא תווית, כדי לאפשר הדמיה של אנטיגן הצגת תאים phagocytic. רקמות האוזן קציר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכברוש בנקודת זמן הרצוי על ידי הנהלים המפורטים פרוטוקול שאושר שלך חיה. כאן, אנו משתמשים מנת יתר של סם ההרדמה, isoflurane. הדבר נעשה במיכל סגור הממוקם בתוך מכסה המנוע מאוורר היטב. ודא החיה מת על ידי עריפת ראש אחד על ידי פתיחת חלל החזה וחיתוך הלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מספריים גדולים להסיר את האוזן עם חתך בודד, קרוב אל הגוף של החיה ככל האפשר (איור 1). <img src="/files/ftp_upload/old/907_2008_8_13_0/Figure_1.jpg" alt="Figure_1.jpg"> באיור 1. הסרה של האוזן עכברוש </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את האוזן בצינור חרוטי 15 מ"ל המכיל 10 מ"ל של ~ קר כקרח 1x PBS או RPMI-1640. שמור את דגימות רקמה על הקרח עד שתהיה מוכן להכין את הרקמה הדמיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רקמת תמונה בהקדם האפשרי, אנו מוצאים, כי, כי 1-2 שעות על הקרח אין כל השפעה על תנועתיות התא להבחין ברקמות בהשוואה לרקמות לקצור צילמו מיד. </li></ol> רקמות הכנה הדמיה הסרת שכבה I. עוריות ו Dermal * הערה: שכבת הדרמיס עמוק חייב להישמר ללא פגע. אם נעשה בצורה נכונה בכלי דם גדולים יישאר ללא שינוי ונראה את הסחוס של האוזן לא יהיו חשופים. זוהי טכניקה קשה, במיוחד כאשר אין דלקת (בתנאי הבקרה) ו - כדאי להשתמש במיקרוסקופ לנתח. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המקום הן רקמות התקשורת מהצינור חרוטי בתוך צלחת 10 ס"מ תרבות רקמות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בידיים עטויות כפפות להחזיק את האוזן בעדינות עכברוש בקצה האוזן (דיסטלי) עם הצד הגבי של האוזן כלפי מעלה (איור 2). <img src="/files/ftp_upload/old/907_2008_8_13_1/Figure_2.jpg" alt="Figure_2.jpg"> איור 2. פרווה חתוך את האוזן </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם האגודל על החלק העליון של האוזן, רקמה יציב תוך שימוש קצה סגור דומון # 5 במספריים כדי להפריד את הדרמיס של הדרמיס עמוק. לחילופין, אם את הקצה של האוזן יש הסככה של העור / הדרמיס עמוק, זה יכול להיות תפס במלקחיים ומשכה בעדינות להפריד זה מן הרקמה שמתחת (איור 3). <img src="/files/ftp_upload/old/907_2008_8_13_2/Figure_3.jpg" alt="Figure_3.jpg"> איור 3. הסרת הדרמיס העליון </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע בשטח קטן של עור שהופרד הרקמה הבסיסית, חזור על השלבים ההפרדה לחילופין באמצעות מספריים לחתוך בין שכבות הדרמיס מלקחיים כדי להסיר בעדינות לקלף את העור וחילצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חשוף 5 x 5 מ"מ או שטח גדול יותר של רקמת האוזן כי הוא לפחות 3 מ"מ מאתר ההזרקה הראשוני של אנטיגן (איור 4). <img src="/files/ftp_upload/old/907_2008_8_13_3/Figure_4.jpg" alt="Figure_4.jpg"> איור 4. רקמות חשוף הדמיה </li></ol> השנייה. אבטחת רקמות לשלב הדמיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים פיסת כיסוי פלסטיק לגודל מעט גדול יותר רקמה מוכנה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מורחים שכבה דקה של 3M Vetbond ™ רקמות בטוח דבק על פני השקופית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפוס את הפינה של הרקמה מוכן (שבו אתה לא צפויות התמונה), להסיר מן התקשורת, להספיג את הצד התחתון של הרקמה על הנייר עדשה או Kym לנגב להסיר התקשורת עודף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגעת בקצה של הרקמה לשקופית דבק מכוסה (מרפא Vetbond מיד על רקמת רטוב). למתוח בעדינות את הרקמות בצורה שטוחה, בקצה השני היה האחרון לגעת השקופית (איור 5) <img src="/files/ftp_upload/old/907_2008_8_13_4/Figure_5.jpg" alt="Figure_5.jpg"> איור 5. הר רקמות כדי לכסות להחליק </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cure ™ Vetbond על ידי היפוך רקמת מדגם / שקופיות טובלים אותו למאגר של מדיה כגון כי רקמות השקופיות הפנים למטה בערך בזווית של 45 מעלות. אחזקות רקמת במהופך בזווית מסייעת במניעת דבק עודף בריפוי על פני רקמת חשוף. דבק על פני השטח של הרקמה תחסום את הלייזר (איור 6). <img src="/files/ftp_upload/old/907_2008_8_13_5/Figure_6.jpg" alt="Figure_6.jpg"> איור 6. Cure vetbond רקמות gluדואר על ידי טבילה בתקשורת הערה: צעדים 2-5 עלול לקחת מעט אימון הורים. נסה להתאמן עם פיסות רקמות או מושלך נוסף לפני שתנסה בפעם הראשונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תמרחי כמות קטנה של שמן סיליקון על גבי החלק התחתון של השקופית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החלק בתא זלוף. ודא כי המדיה זלוף זורם, 37 ° C ו מחומצן לפני הוספת רקמה. לחץ בעדינות על הקצוות של השקופית יצירת חסימה עם גריז סיליקון בין החלק התחתון של החדר זלוף ואת פליטת כיסוי הפלסטיק. </li></ol> ג. שני הפוטונים הדמיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות אור בהיר שדה המשודר, להתמקד העליון של הרקמה. כבו כל האורות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את הלייזר, PMTs כפי שנדרש על ידי המערכת רב פוטון מיקרוסקופ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דור הרמונית השני (SHG) ב מאוד מסודרים חלבונים סיביים (קולגן שרירן) מייצר אות באורך גל חצי לייזר עירור. אנו משתמשים עירור ב 900 ננומטר, המוביל SHG ב 450 ננומטר, אשר ניתן דמיינו באמצעות ערוץ "כחול" של המיקרוסקופ. SHG דור הוא שאינו ליניארי (שני פוטונים) תהליך, ובכך מספק אופטי "חתך" אפקט דומה לזה של עירור שני פוטונים של הקרינה. שיא היעילות של SHG מתרחשת כאשר הסיבים הם בניצב לייזר, בעוד הסיבים הפועלות במקביל לא יהיה דמיינו 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אתר השטח הדמיה טובה עם הרבה תאים, הגדר באזור הרכישה כזה שלך כי הרוב המכריע של התאים במרכז ולהתחיל הדמיה. הערה: תגובות DTH, בתאי T מחלחל תאים אחרים נמצאים לעתים קרובות להיות מרוכזים יחדיו בעוד באזורים אחרים ללא חדירה לתאי 2. לכן, זה עשוי לקחת קצת זמן לחפש את הרקמה כדי למצוא את שטח התמונה הטובה ביותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדיקת כדאיות התא על ידי הערכת מהירות התא הקוטביות במהלך ההדמיה. השתמש כוח לייזר הנמוך ביותר המספק תמונה באיכות מקובל על מנת להבטיח מינימלי צילום נזק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החלפה לקראת רקמה חדשה לפי הצורך. </li></ol>

<ol><li>Koo, G. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blockade+of+the+voltage-gated+potassium+channel+Kv1.3+inhibits+immune+responses+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Blockade of the voltage-gated potassium channel Kv1.3 inhibits immune responses in vivo.</a> J Immunol. 158, 5120-5128 (1997).</li>
<li>Gaga, M., Frew, A. J., Varney, V. A., Kay, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eosinophil+activation+and+T+lymphocyte+infiltration+in+allergen-induced+late+phase+skin+reactions+and+classical+delayed-type+hypersensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Eosinophil activation and T lymphocyte infiltration in allergen-induced late phase skin reactions and classical delayed-type hypersensitivity.</a> J Immunol. 147, 816-822 (1991).</li>
<li>Flugel, A., Odoardi, F., Nosov, M., Kawakami, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoaggressive+effector+T+cells+in+the+course+of+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+visualized+in+the+light+of+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">Autoaggressive effector T cells in the course of experimental autoimmune encephalomyelitis visualized in the light of two-photon microscopy.</a> J Neuroimmunol. 191, 86-97 (2007).</li>
<li>Kawakami, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+of+effector+cell+trafficking+and+autoantigen+recognition+within+the+unfolding+autoimmune+encephalomyelitis+lesion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Live imaging of effector cell trafficking and autoantigen recognition within the unfolding autoimmune encephalomyelitis lesion.</a> J Exp Med. 201, 1805-1814 (2005).</li>
<li>Miller, M. J., Wei, S. H., Parker, I., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+imaging+of+lymphocyte+motility+and+antigen+response+in+intact+lymph+node%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Two-photon imaging of lymphocyte motility and antigen response in intact lymph node.</a> Science. 296, 1869-1873 (2002).</li>
<li>Matheu, M. P. B., A, C. G. arcia, Chi, V., Rangaraju, S., Safrina, O., Monaghan, K., Uemura, M. I., Li, D., Pal, S., Monuki, E., Flugel, A., Pennington, M. W., Parker, I., Chandy, G. K., Calahan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Situ+Imaging+of+Effector%2FMemory+T+Cells+During+DTH+and+Suppression+by+Kv1.3+Channel+Block%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">In Situ Imaging of Effector/Memory T Cells During DTH and Suppression by Kv1.3 Channel Block.</a> Immunity. , In Press (2008).</li>
</ol>

הדמיה מפעיל t זיכרון תאים באוזן לאחר אינדוקציה של dth המאמצת

Imaging Effector Memory T cells in the Ear After Induction of Adoptive DTH

סוג של רגישות יתר מאוחרת (DTH) היא תגובה חיסונית שבה השחקנים העיקריים הם CCR7 - מפעיל / זיכרון לימפוציטים מסוג T. הנה, אנחנו מדגימים שיטה גרימת הקלטה התקדמות התגובה DTH באוזן חולדה. זה ואחריו הפגנה של הכנת רקמות האוזן עכברוש הדמיה שני הפוטונים של CCR7 - תגובה T זיכרון מפעיל / התא. DTH המאמצת הוא המושרה על ידי הזרקת intraperitoneal של ה-GFP שכותרתו הסגלגל ספציפי CCR7 - קו T זיכרון מפעיל / תא (ביטון, סי ג&#39;יי ניסויים דמיינו, גיליון 8). תאים מותר אז לאזן בחולדה עבור 48 שעות לפני לאתגר על ידי הזרקת אוזן אחת עם מי מלח (באוזן מלאה) והשני עם תערובת 01:01 של מצומדות הסגלגל ואת הביציות כדי טקסס אדום (הסגלגל-TR) כדי לאפשר ויזואליזציה של אנטיגן הצגת תאים תושב. אנו מתארים שיטת הכנה רקמות שימושי הדמיה תנועתיות של תאים בתוך שכבת הדרמיס עמוק במהלך תגובה חיסונית, בשיתוף עם ויזואליזציה של סיבי קולגן על ידי דור הרמונית השני. רקמת האוזן הוא חתך לתוך 5 × 5 ריבועים מ&quot;מ (מעט גדול יותר הוא טוב יותר) ו רכוב על גבי תלושי כיסוי הפלסטיק באמצעות Vetbond ™, אשר מובטחות אז באמצעות גריז סיליקון בחדר הדמיה superfused על ידי החמצן מבעבע בינוני בתרבית רקמה על 37 ° C .

כאן אנו להדגים שיטה גרימת הקלטה ההתקדמות של הצתה מאוחרת (DTH) סוג רגישות יתר באוזן חולדה. זה ואחריו הפגנה של הכנת רקמות האוזן עכברוש הדמיה שני הפוטונים של התגובה מפעיל T / תא זיכרון.

הדמיה מפעיל T זיכרון תאים באוזן לאחר אינדוקציה של DTH המאמצת

רגישות מאחרית (DTH) היא תגובה חיסונית שבה השחקנים המרכזיים הם לימפוציטים T של זיכרון/אפקטור בעלי ביטוי של CCR7. כאן, אנו מדגימים...

שלום, אני מלאני מת'יו. אני סטודנטית לתואר מתקדם במעבדה של מייקה הולינס באוניברסיטת קליפורניה ארווין, במחלקה לפיזיולוגיה וביופיזיקה. והיום, יחד עם ד"ר כריסטין ביטון, נראה לכם כיצד אנו מדמיינים את אוכלוסיית תאי ה-T של הזיכרון או את האפקטורים המגיבים באוזנו של חולדה.ד"ר כריסטין ביטון תגרום תחילה לרגישות יתר מאוחרת DTH באוזן של חולדה. לאחר מכן נעבור לדימוי in situ של אוזן החולדה באמצעות מיקרוסקופיה פוטונית דו-פוטונית. לפני יומיים הזרקתי תאי T ספציפיים לאלבומין המסומנים ב-GFP לחולדה מסוג Lewis.והיום אני עומד לאתגר את אותה חולדה באוזן. לכן, לאוזן ימין אני מזריק albumin. ולאוזן שמאל אני מזריק פשוט מעט PBS.מינון האלבומין שאני מזריקה הוא 20 micrograms ב-20 microliter. האלבומין שבו אני משתמשת הוא תערובת ביחס של אחד לאחד של אלבומין מסומן ב-Texas Red ואלבומין לא מסומן. זוהי הזבובית שעל גבה אראה לכם כיצד אני מזריקה.השתמשתי ביד שמאל, שכן אני ימני. ביד שמאל הסרתי את הכפפה כדי שאוכל להניח אצבע אחת מתחת לאוזן ואת השנייה מעליה כדי למתוח את העור, כך שאוכל לראות בדיוק היכן אני נמצא עם המחט ולהיכנס בין שתי שכבות העור באזור האוזן, שהוא דק מאוד. לשם כך אני משתמש במחטים בכיול 27 gauge כדי להשתמש במשהו דק במיוחד עבור החדירה.אם אהפוך את זה, ניתן לראות בבירור לאן הלך ה-Texas red ולאן הלך ה-PBS. אנו נמצאים כע

imaging-effector-memory-t-cells-ear-after-induction-adoptive

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

סוג של רגישות יתר מאוחרת (DTH) היא תגובה דלקתית בתיווך CCR7-מפעיל לימפוציטים מסוג T זיכרון. כאן אנו מדגימים כיצד לגרום DTH פעיל חולדות לואיס לפקח על התגובה הדלקתית.

אינדוקציה וניטור של רגישות יתר פעילים סוג מושהית (DTH) בחולדות

סוג של רגישות יתר מאוחרת (DTH) היא תגובה דלקתית בתיווך CCR7-מפעיל זיכרון T (TEM) לימפוציטים. כאן אנו מדגימים כיצד להפעיל את אנטיגן ספציפי לערמונית תאים TEM, לגרום DTH המאמצת בחולדות לואיס לפקח על התגובה הדלקתית.

אינדוקציה וניטור של רגישות יתר מושהית-Type המאמצת בחולדות

הדור של לימפוציטים T מ המושרה גזע pluripotent (שב"ס) תאים נותן גישה חלופית של שימוש בתאי גזע עובריים על חיסוני מבוססי תאים T. השיטה מלמדת כי על ידי ניצול...

התמיינות מכוונת של המושרה בתאי גזע pluripotent כלפי לימפוציטים-T

אנו מתארים assay אבחון יקר שעלולים לשמש כדי להחליט הנסיגה של דיכוי חיסוני לאחר השתלה ללא סיכון מוגבר לדחיית שתל. Assay משתמש בעקרונות של רגישות יתר מושהה סוג ומספק הערכה מדויקת של שתי התגובות רכובים על ידי מקבלי חיסון מפעיל ורגולציה הספציפיות תורמות.

Assay רגישות יתר מושהה סוג חוצה vivo להסדרת אנטיגן ספציפי

הסרטון מדגים שיטה אימונולוגית לניטור in vivo adjuvant-induced cytotoxic T lymphocyte או CTL production. עכבר מוזרק מראש עם לימפוציטים CD8+ T מהונדסים גנטית, מוכתמים בצבע מתרבים. הזרקה תת עורית של אובלבומין עם אדג'ובנטים מייצרת לימפוציטים ציטוטוקסיים CD8+ T המזוהים לאחר הקציר באמצעות אימונוסטיין וציטומטריית זרימה.

טכניקה אימונולוגית לניטור יצירת לימפוציטים ציטוטוקסיים מסוג T בתיווך אדג'ובנטי

המנגנונים ששולטים תנועתיות ביניים של תאי T מסוג CD4 מפעיל באתרים של דלקת הם יחסית לא ידועים. אנו מציגים גישה לא פולשנית לדמיין ולטפל בתאים במבחנה -primed CD4 T בדרמיס האוזן הדלקתית, המאפשר חקר את ההתנהגות הדינמית של תאים אלה באתרו.

הדמית תא CD4 T גירת ביניים בדרמיס המוסת

דוח זה מתאר שיטה להניע עין כרונית ניסויית אוטואימונית יבשה בחולדות לואיס באמצעות חיסון עם תחליב של תמצית בלוטת חולדות עכברוש, ovalbumin, adjuvant מלאה של פרוינד, ואחריו הזרקה של תמצית בלוטת דרכי ו ovalbumin לתוך subconjunctiva תת-עורית ו בלוטות דרכי שישה שבועות לאחר מכן.

כרוני אוטואימונית יבש עין עכברוש דגם עם הגדלת זיכרון תאי זיכרון T ב Eyeball רקמות

כאן, אנו מציגים את פרוטוקול על ההכנה ועל המינהל stereotaxic של לימפוציטים אנושיים allogeneic בעכברים immunodeficient נושאת גידולים במוח העיקרי אנושי orthotopic. מחקר זה מספק הוכחה-של-קונספט הכדאיות והן את היעילות antitumor של המועבר intrabrain immunotherapies הסלולר.

העברת סטיאוטטי המאמצת של תאים חיסוניים ציטוטוקסיות במודלים מאתר של האדם Orthotopic גליובלסטומה Xenografts

רגישות יתר למגע (CHS) היא מודל ניסיוני של מורין של דרמטיטיס מגע אלרגי (ACD). CHS מבוסס על רגישות עם hapten תגובתי על ידי צביעת העור המגולח של החזה והבטן, עם אתגר עור אוזן לאחר מכן עם hapten מדולל, הגורם לתגובת נפיחות כי הוא מוערך בדרכים שונות.

צור רגישות יתר כמודל מורין של דרמטיטיס מגע אלרגי

המחקר מדגים את תפקידו של העור בוויסות התגובות החיסוניות בעכברים באמצעות חיסון אפיעורי (EC). חיסון EC עם אנטיגן חלבון יכול לדכא תגובות חיסוניות ברגישות יתר למגע או להפוך דיכוי המושרה על ידי העור בשילוב עם דפוסים מולקולריים הקשורים לפתוגן. חיסון EC מראה הבטחה כגישה יעילה ונטולת מחטים לאימונותרפיה.

מודל עכברי של אימונומודולציה המושרה אפיעורית

למדו אינדוקציה של תגובת רגישות מסוג מאוחר באוזן עכברוש ודימוי תאי T זיכרון באמצעות מיקרוסקופיית שני-פוטון. שיטה זו מאפשרת מחקר דינמיקת תאי חיסון בגוף החי.

הדמיה מפעיל T זיכרון תאים באוזן לאחר אינדוקציה של DTH המאמצת

גלה סרטונים נוספים