Ipotesi: L'ipotesi sperimentale è che nelle fette di punta delle radici che sono state trattate con nocodazolo, una sostanza chimica che interferisce con la polimerizzazione microtubulare, tutte le cellule verranno arrestate nella stessa fase del ciclo cellulare e che nelle fette di punta di cipolla non trattate verranno visualizzate tutte le diverse fasi del ciclo cellulare. L'ipotesi nulla è che non ci saranno differenze nella mitosi tra i due gruppi e che verranno visualizzate diverse fasi del ciclo cellulare.
Per prepararti a questo esperimento utilizzerai una cipolla che è stata messa in acqua per diversi giorni fino a quando non avranno iniziato a germogliare nuove punte di radici bianche. Usa una lama di rasoio per tagliare un pezzo di 1 cm dall'estremità di una delle punte della radice.
Metti la fetta di cipolla in una provetta da microcentrifuga etichettata "N" per la condizione di nocodazolo.
Quindi, taglia un secondo pezzo di punta di radice di cipolla di 1 cm e mettilo in una provetta da microcentrifuga etichettata "C" per la condizione di controllo.
Aggiungi 2 μL di 5 mg/mL di nocodazolo a 1 mL di acqua nella provetta per microcentrifuga etichettata N e 1 mL di acqua solo alla provetta etichettata C.
Lascia incubare le provette contenenti le punte delle radici per 12 ore e pulisci l'area di lavoro con etanolo al 70%.
Quando l'incubazione è completa, imposta un blocco termico a 60 ºC.
Lavare le punte trattate con nocodazolo con acqua e poi aspirare il liquido.
Ripeti questo lavaggio altre due volte, per un totale di tre lavaggi.
Riempi entrambe le provette con 1 mL di un normale acido cloridrico. Incubare le provette in un blocco termico a 60 ºC per 12 - 15 minuti, quindi gettare l'acido in un pallone di scarto.
Ora, aggiungi 1 mL di acqua distillata goccia a goccia nelle provette almeno tre volte per risciacquare i campioni.
Ora aggiungi un microlitro di colorante DAPI a 10 ml di soluzione salina tamponata con fosfato (PBS).
Quindi metti 50 μL di questo colorante DAPI diluito in ogni provetta e lasciali a temperatura ambiente per incubare per 12 minuti.
Dopodiché, eseguire tre lavaggi con acqua distillata come nel passaggio 10.
Etichetta un vetrino per microscopio come 'Controllo' e un altro come 'Nocodazolo'.
Trasferisci le radici colorate sui rispettivi vetrini da microscopio e aggiungi una goccia d'acqua al vetrino di controllo e una goccia di nocodazolo al vetrino di nocodazolo.
Usa la lama del rasoio per rimuovere le parti non macchiate di ogni punta della radice e posiziona un vetrino copritutto su ogni campione.
Premi con cautela su ogni vetrino coprioggetto con la punta del dito guantato, quindi lascia riposare i vetrini per 10 minuti.
Infine, visualizza i vetrini sotto l'obiettivo 40X di un microscopio a fluorescenza e acquisisci immagini delle tue preparazioni di cellule della punta radicolare.
