La procedura chirurgica per la consegna delle cellule staminali embrionali derivate le cellule endoteliali alle arti posteriori ischemico è dimostrato, con il monitoraggio non invasivo per l'imaging bioluminescenza.
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Articolo metodologico
Cellule embrionali staminali endoteliali derivati dalle cellule per il trattamento di ischemia degli arti posteriori
In questo articolo
Sommario
Abstract
Malattia arteriosa periferica (PAD) è il risultato restringimento delle arterie periferiche che forniscono sangue ossigenato e sostanze nutritive alle gambe e ai piedi, questa patologia provoca sintomi come la claudicatio intermittente (dolore con piedi), dolorose ulcerazioni ischemiche o addirittura pericolose per la gangrena degli arti. Si ritiene generalmente che l'endotelio vascolare, un monostrato di cellule endoteliali che investe la superficie luminale di tutti i vasi sanguigni e linfatici, gioca un ruolo dominante nell'omeostasi vascolare e la rigenerazione vascolare. Di conseguenza, a base di cellule staminali rigenerazione dell'endotelio può essere un approccio promettente per il trattamento PAD.
In questo video, dimostriamo il trapianto di cellule staminali embrionali (ESC)-derivate cellule endoteliali per il trattamento di ischemia unilaterale hindimb come modello di PAD, seguita da monitoraggio non invasivo di homing delle cellule e della sopravvivenza attraverso l'immagine bioluminescenza. I materiali e procedure specifiche per la consegna delle cellule e di imaging verranno descritte. Questo protocollo segue un'altra pubblicazione che descrive l'induzione di ischemia degli arti posteriori da Niiyama et al 1.
Protocollo
1. Differenziazione dei CES murino in cellule endoteliali
- Il protocollo per la differenziazione in cellule endoteliali CES è descritto altrove e non è il focus di questo protocollo 2,3. In breve, le cellule possono differenziarsi, e le cellule che sono positivi per i marcatori endoteliali come CD31 o caderina vascolare endoteliale (VE-caderina) sono poi purificata mediante fluorescenza separazione delle cellule attivate (FACS).
2. La costruzione del gene doppia Reporter fusione e trasduzione lentivirali
- Bioluminescenza può essere utilizzato per monitorare le cellule che vengono modificate per esprime....
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Discussione
CES sono una fonte di cellule promettente per il trattamento di ischemia del tessuto a causa della loro plasticità di differenziazione e la loro capacità di dare origine a linee cellulari che comprende tutti e tre i foglietti embrionali, comprese le cellule endoteliali. Per superare le questioni etiche associate con i CES, cellule staminali pluripotenti indotte (iPSCs) può essere un'alternativa fonte di staminali pluripotenti cella che supera i problemi etici. Oltre a CES, le cellule staminali adulte, come le cellule progenitrici endote.......
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Ringraziamenti
Gli autori ringraziano Andrea Axtell, Satoshi Itoh, MD, Jeff Velotta, MD, Grant Hoyt, Robert C. Robbins, MD, Jin Yu, MD, Tim Doyle, PhD, e lo Small Animal Imaging Stanford Nucleo per l'assistenza tecnica. Gli autori hanno anche ringraziare AM Bickford, Inc. per il supporto di attrezzature veterinarie. Questa ricerca è stata sostenuta da borse di ricerca dal National Institutes of Health (R01 HL-75774, CA098303 R01, R21 HL085743, 1K12 HL087746), il tabacco California sul programma di ricerca sulle malattie della University of California (15IT-0257 e 1514RT-0169) , e l'Istituto di Medicina Rigenerativa della California (RS1-00183).
NH è sostenuto da una borsa di studio dell....
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti | |
|---|---|---|---|---|
| Strumenti chirurgici | Strumento | Fine Science Tools | ||
| Ago per siringa | Strumento | BD Biosciences | Si preferisce una siringa da insulina da 28G | |
| Soluzione salina tampone al fosfato | Reagente | Invitrogen | ||
| D-luciferina | Reagente | Biosynth International, Inc | Preparare la D-luciferina in anticipo in soluzioni stock filtrate da 15 mg/mL in PBS | |
| Sistema di acquisizione di immagini a bioluminescenza IVIS 200 e software di acquisizione | Attrezzatura |  Xenogen Corporation |
Riferimenti
- Niiyama, H., Huang, N. F., Rollins, M., Cooke, J. P. Murine model of hindlimb ischemia. JoVE. , (2008).
- Levenberg, S., Golub, J. S., Amit, M., Itsakovitz-Eldor, J., Langer, R. Endothelial cells derived from human embryonic stem cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 4391-4396 (2002).
- Yamashita,....
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Ristampe e permessi
