Photoswitching intravitale e tracking di Dendra2 marcato le cellule tumorali attraverso la finestra Imaging mammaria è una tecnica che ci permette di immagine il comportamento metastatico delle cellule tumorali in microambienti tumorali scelto su una scala temporale di giorni.
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Articolo metodologico
Dendra2 Photoswitching attraverso la finestra Imaging mammaria
In questo articolo
Sommario
Abstract
Nell'ultimo decennio, la microscopia intravitale dei tumori al seno in topi e ratti a singola cella di risoluzione
Protocollo
1. Generazione di tumori fluorescenti con iniezione di cellule tumorali nel tappetino mammaria grasso:
- Crescere una linea cellulare che esprime Dendra2 proteine (come marcatore citoplasmatica) al 40 - 80% confluenza.
- Lavare i piatti almeno 3 volte con PBS w / o Ca 2 + o Mg 2 +.
- Aggiungere 3 ml di tripsina per 10 piatti cm e incubare a 37 ° C fino a quando la maggior parte delle cellule staccare e poi ha colpito il piatto contro una superficie piana per scuoterlo.
- Risciacquare tutte le cellule fuori il piatto, e utilizzare un raschietto (poliziotto in gomma) per raccogliere matrice come bene. Aggiungere ....
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Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto dal US Department of Defense (BC075554 di BG e BC061403 a DK), US National Institutes of Health (U54GM064346 a JVR; CA100324 di JC, JES e JW; CA77522 di JES, U54CA126511 di JC e BG). Ringraziamo D. Entenberg aiuto per microscopia, M. Rottenkolber aiuto nella fabbricazione della scatola di imaging e J. Pollard (Albert Einstein College of Medicine) per l'anticorpo F4/80.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| PBS senza Ca, Mg | GIBCO, by Life Technologies | 14190-144 | |
| Tripsina | GIBCO, by Life Technologies | 25300 | |
| HBSS | GIBCO, by Life Technologies | 14025 | |
| Mezzo DMEM (cellule MDA-MB-231) | GIBCO, by Life Technologies | 11965 | |
| Isoflurano (Aerrane) | Baxter Internationl Inc. | # NDC 10019-773-40 | |
| Topo SCID | National Cancer Institute | N/A | |
| Piastre di coltura | BD Biosciences | 353003 | Ordine personalizzato |
| Coverslip circolare da 8 mm | Scientific, Inc. | 8CIR-1-FIS |
Riferimenti
- Farina, K. L., Wyckoff, J. B., Rivera, J., Lee, H., Segall, J. E., Condeelis, J. S., Jones, J. G. Cell motility of tumor cells visualized in living intact primary tumors using green fluorescent protein. Cancer Res. 58, 2528-2532 (1998).
- Naumov, G. N., Wilson, S. M., MacDonald, I., Schmidt, E. E., Morris, V. L., Groom, A. C., Hoffman, R. M., Chambers, A. F.
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Ristampe e permessi
