Decellularization perfusione è una tecnica innovativa per la produzione di ponteggi fegato intero che conserva la composizione della matrice extracellulare l'organo e la microarchitettura. Qui, il metodo di preparazione di ponteggi intero organo utilizzando decellularization perfusione e conseguente ripopolamento con epatociti è descritto. Trapianti di fegato funzionale e trapiantabili possono essere generati utilizzando questa tecnica.
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Articolo metodologico
Decellularization e Recellularization di fegati interi
In questo articolo
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Sommario
Abstract
Il fegato è un organo complesso che richiede perfusione costante per la consegna di sostanze nutritive e di ossigeno e la rimozione dei rifiuti per sopravvivere 1. Gli sforzi per ricreare o imitare la microstruttura fegato con motivi up utilizzando l'ingegneria dei tessuti e le tecniche di microfabbricazione non hanno avuto successo finora a causa di questa sfida di design. Inoltre, biomateriali sintetici utilizzati per creare impalcature per le applicazioni di tessuto epatico di ingegneria sono stati limitati nell'indurre la rigenerazione dei tessuti e la riparazione in gran parte a causa della mancanza di motivi specifici delle cellule vincolante che avrebbe indotto le funzioni cellulari corretta 2. Tessuti Decellularized nativo vasi sanguigni della pelle come 3 e 4 invece hanno trovato molte applicazioni in ingegneria dei tessuti, e hanno fornito una soluzione pratica per alcune delle sfide. Il vantaggio di matrice decellularized nativa è che si conserva, in una certa misura, la composizione originale e la microstruttura, migliorando quindi l'attaccamento delle cellule e riorganizzazione 5.
In questo lavoro si descrivono i metodi per eseguire perfusione-decellularization del fegato, come ad esempio che un fegato intatto bioscaffold che mantiene la struttura dei vasi sanguigni principali si ottiene. Inoltre, si descrivono i metodi per recellularize questi bioscaffolds con adulti epatociti primari, la creazione di un trapianto di fegato che è funzionale in vitro, ed ha l'accesso nave nella misura necessaria per il trapianto in vivo.
Protocollo
1. Fegato Decellularization
- Raccolto un fegato di ratto con incannulazione della vena porta e con 18-gauge catetere. Lasciare l'inferiore e vena cava superiore aperto. Mantenere l'organo idratata in tampone fosfato (PBS) in una di 10 cm capsula di Petri.
- Istituire un sistema di perfusione costituito da serbatoio da 8 litri, pompa peristaltica e un gorgogliatore.
- Riempire il sistema di perfusione con tampone fosfato e mantenerlo in funzione per 10 minuti. Riempire PBS in una di 10 cm capsula di Petri e di ridurre la portata di tampone fosfato a 1 ml / min.
- Trasferire accuratamente l'fegato raccolte al tampone fosfato pieno di 1....
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Discussione
Il metodo di perfusione decellularization qui descritto produce una intera impalcatura del fegato che ha la stessa struttura lordo e la microarchitettura vascolare del fegato nativo. Il ponteggio ha una composizione simile a quello della matrice extracellulare del fegato nativo. Il metodo recellularization raggiunge ripopolamento del patibolo con celle ad alta efficienza e le cellule rimangono vitali e funzionali durante il periodo di coltura in vitro testati. Con l'aggiunta di cellule nonparenchymal nel tr.......
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Dichiarazioni
Nessun conflitto di interessi dichiarati.
Ringraziamenti
Gli autori desiderano ringraziare Jack Milwid per la progettazione della camera di perfusione in vitro. Questo lavoro è stato supportato anche da finanziamenti del NIH americano, R01DK59766 e R01DK084053 a MY, R00DK080942 di KU, US NSF cbet-KU e 0.853.569 per il Shriners Hospitals for Children per BEU (non concedere. 8.503). Riconosciamo inoltre il supporto e il Shriners ospedali per bambini.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Dodecilsolfato di sodio | Sigma-Aldrich | L4390 | |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | T8787 | |
| Masterflex L/S Digital Drive | Cole-Parmer | EW-07523-80 | |
| Testata della pompa Masterflex L/S Standard | Cole-Parmer | EW- 07013-81 | |
| Trappola per bolle | Radnoti Glass Technology Inc. | 130149 |
Riferimenti
- Kulig, K. M., Vacanti, J. P. Hepatic tissue engineering. Transpl Immunol. 12, 303-310 (2004).
- Lutolf, M. P., Hubbell, J. A. Synthetic biomaterials as instructive extracellular microenvironments for morphogenesis in tissue engineering. Nature biotechnology. <....
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Ristampe e permessi
Errata corrige
Formal Correction: Erratum: Decellularization and Recellularization of Whole Livers
Posted by JoVE Editors on 3/14/2011. Citeable Link.
A correction was made to Decellularization and Recellularization of Whole Livers. There was an error with an author's name. The author's last name had a typo and was corrected to:
Nima Saeidi
instead of:
Nima Saedi.
