Questo video dimostra l'uso di In vivo Immagini bioluminescenza per studiare le risposte immunitarie dopo l'impianto di tessuto cardiaco Composti (EHT) nei ratti.
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Articolo metodologico
Imaging bioluminescenza per la valutazione delle risposte immunitarie A seguito di impianto di tessuto cardiaco Composti (EHT)
In questo articolo
Sommario
Abstract
Varie tecniche di ingegneria tissutale cardiaco sono stati perseguiti negli ultimi decenni anche le strategie di impalcature utilizzando nativi o bioartificiale materiali patibolo, intrappolamento dei miociti cardiaci in idrogel come la fibrina o collagene e di sovrapposizione dei monostrati miociti 1. Questi concetti mirano al recupero della compromissione della funzione cardiaca (ad esempio dopo infarto miocardico) o come modelli sperimentali (es. tossicologia predittiva e screening sostanza o modelli di malattia). Monitoraggio preciso della sopravvivenza cellulare dopo l'impianto del tessuto cardiaco ingegnerizzati (EHT) è ora diventato possibile usare in vivo bioluminescenza imaging (BLI) Tecniche 2. Qui si descrive la generazione di fibrina a base di EHT da un ceppo di topo transgenico con espressione ubiquitaria luciferasi di lucciola (ROSA / luciferasi-LEW Tg, 3). L'impianto viene eseguito nel omento maggiore di ceppi di topo diversi per valutare le risposte immunitarie dell'organismo ricevente dopo l'impianto EHT. Confronto dei risultati generati dal BLI e la Enzyme Linked Immuno Tecnica Spot (ELISPOT) confermano l'utilizzabilità del BLI per la valutazione delle risposte immunitarie.
Protocollo
1. EHT Generation e la cultura Condizioni
Fabbricazione di prodotti a base di fibrina EHT è stata eseguita come descritto altrove 4. In breve, per generare fibrina basato EHT per scopi impianto, una master mix è stato preparato contenente cellule isolate da neonatale ROSA / luciferasi-LEW cuori di ratto transgenico, fibrinogeno bovina e Matrigel. Agarosio stampi sono stati preparati con distanziali in teflon posto in ben 6 piatti della cultura. Dopo la solidificazione di agarosio, distanziatori sono stati rimossi e rastrelliere messaggio silicone sono stati messi sui piatti della cultura con messaggi raggiungendo negli stampi. Pe....
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Discussione
Prima applicazione clinica della tecnologia EHT per la riparazione cardiaca, questioni fondamentali come l'immunogenicità di entrambi i componenti cellulari e la matrice o la sopravvivenza del trapianto dopo l'impianto devono essere valutati in modelli sperimentali. In-vivo di imaging bioluminescenza rappresenta una tecnica nuova e utile per la sopravvivenza delle cellule di monitoraggio dopo il trapianto . Siamo riusciti a base di fibrina generato EHT contenente luciferasi positivo (luc +) le cellule d.......
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Dichiarazioni
Nessun conflitto di interessi dichiarati.
Ringraziamenti
Sonja Schrepfer, Lenard Conradi e Arne Hansen ha ricevuto un finanziamento dalla Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG, SCHR992/3-1, SCHR992/4-1, CO 858/1-1, HA 3423/3-1). Il lavoro è stato sostenuto anche da finanziamenti dell'Unione europea di Thomas Eschenhagen (EUGeneHeart e Angioscaff).
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Materiali
- LEW-Tg (Gt (ROSA) 26Sor-luc) 11Jmsk ratti (numero ratto NBPR 0299, http://www.anim.med.kyoto-u.ac.jp/NBR/)
- Fibrinogeno bovina (soluzione madre: 200 mg / ml aprotinina, più 5 mcg / ml fibrinogeno in NaCl 0,9%, Sigma F4753)
- Matrigel (BD Bioscience 356235)
- DMEM (Biochrome F0415)
- Siero di cavallo (Gibco 26050)
- Penicillina / streptomicina (Gibco 15140)
- Insulina (Sigma-Aldrich I9278)
- Aprotinina (Sigma Aldrich A1153)
- d-Luciferin (Biosynth L-8220)
- Enzyme-linked immunosorbent spot (ELISpot) piastre di test (Hassa Laborbedarf, S2EM004M99)
Riferimenti
- Eschenhagen, T., Zimmermann, W. H. Engineering myocardial tissue. Circ Res. 97, 1220-1231 (2005).
- van der Bogt, K. E., Schrepfer, S., Yu, J. Comparison of transplantation of adipose tissue- and bone marrow-derived mesenchymal stem cells in the infarcted heart. Tr....
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Ristampe e permessi
