Questo protocollo mostra come etichetta retrogrado cellule gangliari della retina, e come fare successivamente un lesione da schiacciamento del nervo ottico al fine di analizzare la sopravvivenza delle cellule gangliari della retina e l'apoptosi. Si tratta di un modello di malattia sperimentale per diversi tipi di neuropatia ottica, compreso il glaucoma.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Una lesione del nervo ottico Modello Crush murini per studiare la sopravvivenza delle cellule gangliari della retina
In questo articolo
Sommario
Abstract
Lesione al nervo ottico può portare alla degenerazione assonale, seguita da una morte graduale delle cellule gangliari della retina (RGCs), che si traduce in perdita di visione irreversibile. Esempi di questo tipo di malattie umane sono traumatiche neuropatia ottica e la degenerazione del nervo ottico nel glaucoma. E 'caratterizzato da cambiamenti tipici della testa del nervo ottico, progressiva degenerazione del nervo ottico, e la perdita delle cellule gangliari della retina, se non controllata, porta alla perdita della vista e cecità.
Schiacciare il nervo ottico (ONC) del modello lesioni mouse è un importante modello sperimentale di malattia traumatica neuropatia ottica, glaucoma, ecc In questo modello, la lesione da schiacciamento del nervo ottico conduce all'apoptosi delle cellule gangliari della retina graduale. Questo modello di malattia può essere usato per studiare i processi generali ed ai meccanismi di morte neuronale e la sopravvivenza, che è essenziale per lo sviluppo di misure terapeutiche. Inoltre, gli approcci farmacologici e molecolari può essere utilizzato in questo modello per individuare e testare i reagenti potenziale terapeutico per il trattamento di diversi tipi di neuropatia ottica.
Qui, mettiamo a disposizione una dimostrazione passo passo di (I) l'etichettatura di base retrograda di cellule gangliari della retina (RGCs) al giorno 1, (II) lesione da schiacciamento del nervo ottico al giorno 4, (III), raccogliere la retina e analizzare la sopravvivenza RGC al giorno 11, e (IV) risultato Rappresentante.
Protocollo
Tutte le attrezzature e reagenti utilizzati sono sterili. Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati approvati dalla cura degli animali e utilizzo Comitato (ACUC) al NEI / NIH (protocollo di studio su animali NEI-570), e sono stati eseguiti secondo le linee guida NIH e regolamenti.
1. Baseline marcatura retrograda di cellule gangliari della retina (RGCs) al giorno 1
Lo scopo di questa procedura è quello di etichettare le cellule gangliari della retina retrogrado, iniettando un colorante tracciante neurale nel collicolo superiore dei topi tre giorni prima della lesione schiacciamento del nervo ottico. Il colo....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
L'ottica schiacciare modello murino lesione del nervo è utile per studiare il processo di morte RGC e sopravvivenza. Questo modello è anche spesso usato per studiare gli effetti di reagenti diversi e geni RGC apoptosi e la sopravvivenza. Un vantaggio di questo modello è che ha un alto grado di riproducibilità con minime varianti.
Tuttavia, particolare attenzione è richiesta in più fasi in questo modello. In primo luogo, al momento della lesione da schiacciamento del nervo ottico, è fonda.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Nessun conflitto di interessi dichiarati.
Ringraziamenti
La nostra ricerca è sostenuta dal programma di ricerca intramurale del NIH, National Eye Institute.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Apparato stereotassico | ASI Instruments | SAS-4100 | |
| Microscopio per dissezione | World Precision Instruments, Inc. | PZMIV-BS | |
| Manico per bisturi | Fine Science Tools | 10003-12 | |
| Lame per bisturi n. 15 | Fine Science Tools | 10015-00 | |
| Microtrapano | Fine Science Tools | 18000-17 | |
| Ago per sutura | Fine Science Tools | 12050-03 | |
| Forbici a molla | Fine Science Tools | 16144-13 | |
| Pinzette Dumont n. 5 | Fine Science Tools | 11252-50 | |
| Siringa Hamilton | Hamilton Co | 88400 | |
| Spugne di garza | Office Depot | 674889 | |
| Fluorocromo | Sigma-Aldrich | 39286 | |
| Alcol | Sigma-Aldrich | 459844 | 70% |
| H2O2 | Sigma-Aldrich | H3410 | 3% |
Riferimenti
- Yoles, E. GM1 reduces injury-induced metabolic deficits and degeneration in the rat optic nerve. Investigative ophthalmology & visual science. 33, 3586-3591 (1992).
- Fisher, J. Vaccination for neuroprotecti....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
