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Articolo metodologico

Modello murino di guarigione delle ferite

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DOI:

10.3791/50265

28 maggio 2013

In questo articolo

Sommario

Un modello murino di guarigione della ferita cutanea che può essere utilizzato per valutare composti terapeutici in contesti fisiologici e fisiopatologici.

Abstract

Guarigione delle ferite e la riparazione sono i processi biologici più complessi che si verificano nella vita umana. Dopo l'infortunio, diverse vie biologiche si attivano. La guarigione della ferita, che si verifica in pazienti diabetici, ad esempio, può portare ad esiti sfavorevoli gravi come l'amputazione. Esiste, pertanto, una crescente impulso per sviluppare nuovi agenti che promuovono la riparazione della ferita. La sperimentazione di questi è stato limitato a grandi modelli animali quali maiali, che sono spesso impraticabile. Topi rappresentano il modello preclinico ideale, in quanto sono economici e suscettibili di manipolazione genetica, che consente l'indagine meccanicistica. Tuttavia, la guarigione della ferita in un mouse è fondamentalmente diversa da quella degli esseri umani, come si verifica principalmente attraverso la contrazione. Il nostro modello murino supera questo incorporando una stecca intorno alla ferita. Con splintaggio la ferita, il processo di riparazione è quindi dipendente da riepitelizzazione, la proliferazione cellulare e l'angiogenesi, che rispecchiano da vicino laprocessi biologici di guarigione della ferita umana. Pur richiedendo coerenza e cura, questo modello murino non comporta tecniche chirurgiche complicate e consente la prova robusta di agenti promettenti che possono, per esempio, promuovere o inibire l'angiogenesi infiammazione. Inoltre, ogni mouse funge come proprio controllo come due ferite sono preparati, consentendo l'applicazione sia del composto in esame e il controllo del veicolo sullo stesso animale. In conclusione, abbiamo dimostrato una, facile da apprendere, e robusto modello pratico di guarigione delle ferite, che è paragonabile a quello umano.

Introduzione

La guarigione della ferita è responsabile per una significativa morbidità e mortalità in tutto il mondo, questo è particolarmente vero per chi soffre di diabete mellito di 1,2. Negli esseri umani, la guarigione della ferita è un continuum di processi, in cui vi sia una significativa sovrapposizione 3. Subito sono iniziati seguenti, processi infiammatori ferimento. Cellule infiammatorie rilasciano fattori che favoriscono i processi di proliferazione cellulare, la migrazione e l'angiogenesi. Dopo riepitelizzazione e formazione del nuovo tessuto vi è una fase di rimodellamento che comporta sia apoptosi e riorganizzazione di proteine ​​della mat....

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Protocollo

1. Preparazione di stecche e medicazioni occlusive

  1. Delineare 10 mm su cerchi 0,5 millimetri teli di silicone spessa e uso forbici o una biopsia per creare i dischi di silicone.
  2. Centro un punzone 5 mm biopsia nel mezzo del cerchio 10 mm pressione al fine di generare un foro per formare una "ciambella"-come disco che verrà utilizzato come stecco.
  3. Delineare 10 mm su cerchi una medicazione occlusiva trasparente come opsiti e usare le forbici per creare condimenti circolari.

2. Animali da esperimento

  1. Ottenere Animal approvazione Comitato Etico per tutti gli esperimenti che verranno eseguite.

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Risultati

Una curva chiusura della ferita è determinato calcolando il diametro medio della ferita ed esprimere i risultati in percentuale, cioè 100 - (giorno 0 diametro / diametro X Giorno). In questo esperimento un composto terapeutico (o controllo veicolo) è stato applicato giornalmente sulla ferita. Il composto terapeutico chiusura della ferita notevolmente accelerato (Figura 3). È importante notare che le stecche devono essere mantenuti per tutta la durata dell'esperimento, come la rimozione di s.......

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Discussione

Questo è un modello murino sperimentale di guarigione della ferita cutanea. Una caratteristica significativa di questo modello è l'uso di stecche di silicone per prevenire la contrazione della ferita in modo che possono verificarsi riepitelizzazione e formazione del nuovo tessuto, rendendolo simile al processo che si verifica negli esseri umani. Questo modello è versatile e può essere utilizzato per valutare la guarigione delle ferite in ambienti sia fisiologici e fisiopatologici (diabete mellito). Il model.......

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ringraziamenti

Gli autori desiderano ringraziare il sostegno finanziamento dal National Health and Medical Research Council (NHMRC) dell'Australia (Progetto di Grant ID: 632512). Louise Dunn è stato sostenuto da un NHMRC Early Career Fellowship e Christina Bursill dal National Heart Foundation Fellowship Career Development.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Foglio di silicone press-to-seal di 0,5 mm di spessoreInvitrogenP18178Tagliato in "ciambelle" con diametro esterno di 1 cm esterno, diametro interno di 0,5 cm
Punzone per biopsia 5 mmSteifelBC-B1-0500Per delineare l'area della ferita da asportare
Forbici Vannas 8,5 cm curveWorldPrecision Instruments 501232 Per l'incisione e l'escissione della ferita
Dumonte #7b pinze, 11 cmWorld Precision Instruments501302Per afferrare la pelle durante la creazione di incisioni e l'asportazione della pelle
Pinze Graefe, seghettate 10 cmWorld Precision Instruments14142Per aiutare a fissare la stecca in silicone alla pelle
Porta aghi, ganasce lisce, curve, 12,5 cmWorld Precision Instruments14132
Pinze Malis, lisce, diritte, 12 cmCodman and Shurtleff, Inc (J& Amp; J)80-1500Per suturare gli anelli di silicone sulla pelle
Righello, gradazione 0,5 mmn/a
Calibri 0,25 mm gradazioneDuckworth e Kent9-653Per misurare l'area della ferita
Pellicola adesiva trasparente Opsite FlexiFix. 10 cm x 1 mSmith & Nipote66030570
Rimadyl (Carprofene)Pfizer462986

Riferimenti

  1. Sen, C. K., et al. Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy. Wound Repair. 17, 763-771 (2009).
  2. Sen, C. K. Wound healing essentials: let there be oxygen. Wound Repair Regen. 17, 1-18 (2009).
  3. ....

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Ristampe e permessi

Tag

Ferita steccataEpitelizzazioneAngiogenesiBiopsia punchMedicazione occlusivaLaser DopplerAnalisi immunoistochimicaChiusura della ferita