Summary
Cellule ensheathing olfattive (OECs) sono cellule della cresta neurale che permettono la crescita dei neuroni olfattivi primari. Questa proprietà specifica può essere utilizzato per il trapianto cellulare. Presentiamo qui un modello di trapianto cellulare basata sull'uso di OECs in un modello di lesione del nervo laringeo.
Abstract
Cellule ensheathing olfattive (OECs) sono cellule della cresta neurale che permettono la crescita e ricrescita dei neuroni olfattivi primari. Infatti, il sistema olfattivo primario è caratterizzato dalla sua capacità di dare origine a nuovi neuroni anche in animali adulti. Questa particolare abilità è in parte dovuta alla presenza di OECs che creano un microambiente favorevole per neurogenesi. Questa struttura di OECs è stato usato per il trapianto cellulare come nei modelli di lesione del midollo spinale. Sebbene il sistema nervoso periferico ha una maggiore capacità di rigenerare dopo lesione del nervo rispetto al sistema nervoso centrale, sezioni complete indurre misrouting durante ricrescita assonale in particolare dopo facciale di transezione del nervo laringeo. In particolare, pieno sezionamento del nervo laringeo ricorrente (RLN) induce aberrante ricrescita assonale conseguente synkinesis delle corde vocali. In questo modello specifico, abbiamo dimostrato che OECs trapianto aumenta efficacemente la ricrescita assonale.
ve_content "> OECs sono costituiti da diverse sottopopolazioni presenti sia nella mucosa olfattiva (OM-OECs) e bulbo olfattivo (OB-OECs). Presentiamo qui un modello di trapianto cellulare basata sull'uso di questi differenti sottopopolazioni di OECs in un modello di lesione RLN. Utilizzando questo paradigma, colture primarie di OB-OECs e OM-OECs sono stati trapiantati in Matrigel dopo la sezione e anastomosi del RLN. due mesi dopo l'intervento, abbiamo valutato animali trapiantati da analisi complementari sulla base di videolaryngoscopy, elettromiografia (EMG) , e studi istologici. Innanzitutto, videolaryngoscopy permesso di valutare le funzioni della laringe, in particolare cocontractions muscolari fenomeni. Poi, EMG analizza dimostrato ricchezza e la sincronizzazione delle attività muscolari. Infine, studi istologici basato su colorazione blu di toluidina permesso la quantificazione del numero e profilo di fibre mieliniche.Tutti insieme, si descrive qui come isolare, cultura, identify e trapianto OECs da OM e OB dopo RLN sezione-anastomosi e come valutare e analizzare l'efficienza di queste cellule trapiantate sulle funzioni ricrescita e laringei assonale.
Introduction
Il sistema olfattivo primario è composto di due parti distinte: la mucosa olfattiva (OM) nel sistema nervoso periferico e il bulbo olfattivo (OB) nel sistema nervoso centrale. Il sistema olfattivo primario è caratterizzato dalla capacità dei neuroni olfattivi primari (PON) auto-di rinnovare tutta la vita in specie di mammiferi. Questa capacità è reso possibile grazie alla presenza di cellule staminali neurali nel OM. La crescita PON e la ricrescita da OM a OB è facilitata dalle cellule gliali specializzate chiamate cellule ensheathing olfattive (OECs). OECs sono cellule della cresta neurale che creano un microambiente favorevole per la neurogenesi del PON da OM a OB 1. In tal modo, OECs può essere trovato in OM e in OB costituendo diverse sottopopolazioni di cellule 2,3. Le diverse proprietà di OECs gli scienziati hanno di piombo per usarli per trapianti cellulari in diversi paradigmi sistema nervoso lesione 4. Infatti, OECs fattori di crescita prodotti, ridurre spaventare gliali, prOmote ricrescita assonale, e può mescolarsi liberamente con astrociti 5,6. Tuttavia, la stragrande maggioranza di questi studi si basano su lesioni del midollo spinale (SCI), pochi di loro hanno usato OECs dopo la lesione del nervo periferico (PNI) 7,8.
Sebbene il sistema nervoso periferico ha una grande capacità di rigenerarsi dopo una lesione del nervo, sezioni complete indurre aberrante assonale ricrescita. Infatti, dopo transections complete del viso o dei nervi laringei ricorrenti (RLN) assoni pervenute all'indirizzo sbagliato causano cocontractions muscolari chiamati synkinesis. Pertanto è di primaria importanza per proporre un modello di PNI quantificare non solo ricrescita assonale ma anche per valutare l'efficienza delle contrazioni muscolari. Nella letteratura il modello più comune descritto è basato sulla lesione del nervo facciale 9,10. In questo modello, valutazioni funzionali sono basati sul recupero dei movimenti whisker 10. Tuttavia è complicato per dimostrare l'efficacia del movENTI e discriminare i fenomeni cocontractions muscolari. Proponiamo qui un modello basato su una lesione RLN. Questo modello permette di valutare non solo la ricrescita degli assoni e dei movimenti delle corde vocali, ma anche l'efficienza e la funzionalità di questi movimenti dopo trapianti cellulari 11,12. Questo protocollo fornisce una procedura passo passo alla cultura e trapianto OECs da OM e OB in un modello sezione RLN / anastomosi e di valutare animali dopo l'intervento chirurgico.
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Protocol
1. Colture primarie di mucosa olfattiva e olfattiva Bulbi
- Prima di dissezione
- Fai medio, per 50 ml, con l'aggiunta di 44 ml di calcio senza di Dulbecco Modified Eagle / medio di Ham F12 (DMEM/F12), supplementato con 5 ml di siero fetale bovino (FBS) e 1 ml di penicillina / streptomicina.
- Coat 75 centimetri 2 palloni con poli-L-lisina (50 mcg / ml, 1,5 mg / cm 2), 1 ora a temperatura ambiente.
- Risciacquare boccette con PBS 1x.
- Conservare i flaconi rivestiti in frigo per un massimo di 1 settimana.
- Dissezione
- Qualsiasi metodo di eutanasia deve essere preventivamente approvato dal cura degli animali e l'uso comitato dell'istituto e realizzato da personale qualificato.
- Scegli ratti inbred come ratti Fischer.
- Dopo il ratto è stato confermato essere entrato anestesia profonda con sodio pentobarbital o altre forme iniettabili di anestesia come la chetamina / xilazina, lui e r decapitareTogliete la pelle.
- Aprire il cranio dalla anteriore alla parte posteriore.
- Rimuovere la presa in carico OB per evitare le meningi.
- Nella stessa ratto, aprire la cavità nasale sagittale.
- Rimuovere l'OM avendo cura di evitare la mucosa respiratoria. Si noti che l'epitelio OM può essere facilmente identificato dal suo colore giallastro.
- Protocolli ulteriormente dettagliate sulla dissezione di OM si possono trovare in una precedente J. Vis. Esp . pubblicazione 13.
- Cultura
- Posizionare OB in soluzione tamponata di Hank sale (HBSS) contenente 0,1% di tripsina per 45 min a 37 ° C.
- Posizionare OM in HBSS contenente 0,05% di collagenasi A per 45 min a 37 ° C.
- Smettere di digestione enzimatica con l'aggiunta di 2 ml di terreno caldo.
- Lavare le cellule con mezzo e centrifugare a 300 xg per 3 min.
- Campioni triturare di 2ml di terreno usando una pipetta P1000 fino ad ottenere una sospensione cellulare omogenea.
- Piastra le cellule in fiasche pretrattate (5-10 x 10 6 cellule / fiasco) con 25 ml di terreno caldo.
- Incubare e coltura le cellule a 37 ° C con 5% di CO 2.
- Cambiare la metà del mezzo ogni 2 giorni.
- Dopo 6-8 giorni in vitro, controllare la percentuale di p75 cellule positive su campioni di piccole cellule, presume essere OECs nei roditori, mediante citometria di flusso o immunocitochimica. Per queste analisi, altri marcatori possono essere studiati come GFAP e S100β.
- Citometria a flusso
- Raccogliere le celle come descritto in (sezione 2.2) "trapianto cellulare".
- Incubare con p75 anticorpo primario (1:100) durante 15 min a 4 ° C.
- Lavare le cellule con 2 ml di PBS-EDTA e centrifugare a 300 xg per 3 min.
- Incubare le cellule con PE anticorpo secondario anti-topo coniugato in 15min a 4 ° C al buio (1:200).
- Lavare le cellule con 2 ml di PBS-EDTA e centrifugare a 300 xg per 3 min.
- Risospendere le cellule in 500 microlitri di PBS-EDTA.
- Analizzare 10-30 x 10 3 celle con flusso citometro.
- Analisi immunocitochimica
- Piastra le cellule in piastre da 6 pozzetti prerivestite per 48 ore come descritto in "cultura" (sezione 1.1.2 di seguito).
- Lavare le cellule con PBS.
- Fissare le cellule con PFA 4% per 15 min a RT.
- Lavare le cellule con PBS.
- Incubare le cellule con PBS / Triton X100 (0,1%) per 15 minuti a RT.
- Lavare le cellule con PBS.
- Incubare le cellule con anticorpi primari (1:200): p75, S100β e GFAP notte a 4 ° C.
- Lavare le cellule con PBS.
- Incubare le cellule con gli anticorpi secondari (1:500) per 1 ora a temperatura ambiente al buio.
- Lavare le cellule con PBS.
- Incubare le cellule con Hoechst 10 min a RT nel buio.
- Lavare le cellule con PBS.
- Analizzare le cellule utilizzando un microscopio a fluorescenza.
- Cellule GFP etichettatura
- Cinque giorni prima del trapianto, infettare culture OB e OM notte con vettore lentivirale ospitare rafforzata GFP (molteplicità di infezione: 20).
- Prima del check trapianto su piccoli campioni il tasso di cellule GFP positive per citometria a flusso come descritto in precedenza in "cultura" (sezione 1.1).
2. Chirurgia e Trapianti
- Ricorrente anastomosi nervo
- Tutti gli esperimenti con gli animali devono essere approvati preventivamente dalla cura degli animali e l'uso comitato dell'istituzione ed eseguite da personale qualificato.
- Prima dell'intervento autoclave tutti gli strumenti e mantenere la sterilità durante gli interventi chirurgici.
- Anestetizzare ratto mediante iniezione intraperitoneale di ketamina cloridrato (12,5 mg / kg) e clorpromazina cloridrato (0,625 mg / kg). Valutare l'adeguatezza di anestesia pizzico punta prima dell'intervento.
- Posizionare il ratto in decubito dorsale.
- Eseguire una verticale di medie incisione cutanea cervicale due centimetri con un bisturi.
- Eseguire un'incisione verticale dei muscoli sottoioidei seguendo la linea bianca mediale.
- Esporre laringe utilizzando divaricatore autostatico tra i muscoli sottoioidei.
- Esporre il RLN.
- Sotto il controllo microscopico, tagliare il nervo pienamente con microscissors a livello dell'anello tracheale settima.
- Eseguire anastomosi utilizzando un punto di 11,0 sutura sotto controllo microscopico. Questo intervento comporta una specifica denervazione motore della laringe.
- Il trapianto cellulare
- Appena prima del trapianto, rimuovere le cellule dalle stoviglie utilizzando 0,05% tripsina EDTA per 5 min a 37 ° C.
- Smettere di digestione enzimatica con l'aggiunta di 2 ml di terreno caldo.
- Centrifugare a 300 xg per 3 min.
- Fare la preparazione cellulare con 1:02 mix (30 e 60 microlitri in questo esperimento) di DMEM/F12-Matrige l in provetta da 1,5 ml prima di innesto e posizionarlo sul ghiaccio. Per evitare effetti non specifici, utilizzare il fattore di crescita ridotta Matrigel.
- Appena prima del trapianto tenere il tubo in mano per pochi secondi a scaldare la Matrigel-medio impasto.
- Deporre il mix sul sito anastomosi con una pipetta e attendere finché il composto auto-assembla sul nervo feriti.
- Chiudere i muscoli e la pelle con una sutura 4.0.
- Casa ratti individualmente e tenere sotto una lampada riscaldante per 24 ore.
3. Valutazione
- Laringoscopia
- Anestetizzare ratti intraperitOneal iniezione di ketamina cloridrato (12,5 mg / kg) e clorpromazina cloridrato (0,625 mg / kg). Conferma ratti vengono anestetizzati con un pizzico punta prima di procedere con il protocollo.
- Posizionare il ratto in decubito dorsale.
- Inserire un 30 ° videolaryngoscope adeguati per fornire la migliore visione della laringe. Determinare punti di riferimento anatomici di riprodurre la stessa vista per ogni registrazione.
- Registrare i movimenti delle corde vocali utilizzando il videolaryngoscope (5-10 sequenze / animale). Per ciascun animale selezionare tre sequenze successive di adduzione e abduzione massima massima.
- Analizzare la funzione laringea utilizzando il software di analisi delle immagini. Determinare il movimento angolare assoluta misurando la differenza tra movimento di abduzione massima e adduzione massima delle corde vocali. Determinare punteggio dinamico misurando l'ampiezza del movimento. Determinare il punteggio funzionale, misurando la synkinesis e movimenti paradossali.
- Elettromiografia (EMG)
- Esporre laringe e della trachea con l'apertura della pelle e dei muscoli, come descritto in precedenza nella (sezione 2.1) "anastomosi nervo ricorrente".
- Esporre la cartilagine crico-tiroidea.
- Aprire la cartilagine cricotiroidea per esporre il cricoarytenoid posteriore (PCA) del muscolo utilizzando microscissors.
- Introdurre un elettrodo ad ago monopolare (38 x 0,45 millimetri) nel muscolo PCA.
- Registrare l'attività muscolare elettrica del muscolo PCA utilizzando un sistema di acquisizione durante la ventilazione spontanea.
- Analizzare l'attività muscolare in termini di ricchezza e la sincronizzazione con il respiro. Per analizzare EMG, assegnare un punteggio qualitativo 0-3 usando la seguente scala: 0: tracciato senza rima, senza aumento durante l'inspirazione, 1: rima tracciando con inspiratori in aumento, ma povero tracing (Neurogen), 2: rima tracciando con l'attività più ricchi, 3: rima rintracciamento, molto ricco, che costituisce un iReticolo nterferenze, simile ad una massima attività intenzionale.
- Esporre il nervo vago per misurare la durata latenza e potenzialità. Il nervo vago è scelta come sede della stimolazione perché RLN può essere danneggiato durante la stimolazione grazie alle sue piccole dimensioni.
- Stimolare il nervo vago con un elettrodo.
- Registrare i segnali elettrici nel muscolo PCA. Misurare la latenza e la durata del potenziale. Se possibile utilizzare un modulo di acquisizione per registrare l'attività muscolare, la latenza e la durata potenziale come il sistema Powerlab.
- Istologia
- Euthanize l'animale con overdose di pentobarbital.
- Rimuovere il moncone distale del RLN sotto controllo microscopico. La parte distale del RLN è definita come la parte tra anastomosi e della laringe. Si noti che è possibile trovare il sito di anastomosi diverse settimane dopo l'intervento chirurgico perché il 11.0 sutura è una sutura non assorbibile.
- Posizionare la porzione distale del RLN in 2% glutaraldeide 0,1 M fosfato(PH = 7,3) per 2 ore a 4 ° C.
- Orientare con attenzione i campioni per realizzare sezioni coronali.
- Lavare campioni in tampone fosfato.
- Tagliare in segmenti più piccoli (3-4 mm di lunghezza) e postfix per 60 minuti a temperatura ambiente in 1% cacodilato tamponata OsO 4 e disidratate con etanolo.
- Campioni orientare in stampi in silicone e incorporato in resine consistenti in POLYBED 812, DDSA e MNA, a cui è stato aggiunto il 2% di acceleratore BDMA.
- Fai sezioni trasversali semi-sottile (1μm di spessore) con un ultramicrotomia sistema Pyramitome.
- Colorazione con blu di toluidina 0,1% in 1% tetraborato di sodio per 75 sec a 70 ° C.
- Analizzare campioni RLN con un sistema di analisi di conteggio. Contare il numero di fibre e misurare profili di fibre nervose mielinizzate determinando il contorno esterno e interno della guaina mielinica.
- Trapianto
- Preparazione delle cellule per il trapianto e trapianto di cellule come precedentemente descrittoin "Il trapianto cellulare" (paragrafo 2.2).
- Analisi
- Euthanize l'animale con overdose di pentobarbital. Si noti che la fissazione degli animali può essere eseguita utilizzando iniezione intracardiaca di PFA 4%.
- Rimuovere circa 2 cm di RLN. Utilizzare prossimale e parti distali del RLN.
- Fissare campione RLN in azoto liquido.
- Conservare i campioni a -80 ° C.
- I campioni tagliati longitudinalmente con criostato (spessore 10-20 micron).
- Analizzare i campioni al microscopio a fluorescenza per rilevare le cellule GFP positive. Si noti che l'anticorpo anti-GFP può essere usato per aumentare emissione di fluorescenza ed effettuare costainings.
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Representative Results
Illustrazioni di controllo e reinnervated (sezione / anastomizzata) gli animali sono stati scelti come i risultati possono variare a seconda delle trapianti cellulari effettuati (OM, OB o OM + OB).
Coltura cellulare
Le cellule aderiscono rapidamente alla superficie plastica e divenne segregata in andane parallele di cellule che sono allungate o rastremata, triangolare, multipolare, o forma-mandrino (Figure 1A e 1B). Dopo 8 giorni in vitro analisi di citometria a flusso mostra la percentuale di cellule positive p75, 71% in OB primaria e il 13% in colture primarie OM (figure 1C e 1D).
Il trapianto cellulare e chirurgia
Le cellule vengono trapiantate in un mix Matrigel medio-on anastomizzate RLN. Anastomosi del RLN è fatta da un punto di sutura 11.0 (Figura 2).
Valutazioni
Videolaryngoscopia Due mesi dopo il trapianto, le funzioni della laringe sono stati analizzati da videolaryngoscopy e elettromiografia. Per realizzare punti di repere anatomici videolaryngoscopy sono stati scelti per misurare la differenza tra abduzione e adduzione (Figura 3).
Elettromiografia
Per completare queste analisi studi elettromiografici sono stati eseguiti utilizzando monopolare elettrodo ad ago impiantato nei muscoli PCA. Tracce tipiche per (sezione / anastomizzata) animali normali e reinnervated sono presentati nella Figura 4.
Analisi istologiche
Per questi animali, le analisi istologiche del RLN sono stati eseguiti da toluidina colorazione blu. Profili fibre tipiche per (sezione / anastomosi) animali normali e reinnervated sono presentati nelle Figure 5A e 5B. Per completare queste analisi istologiche, è stato effettuato il monitoraggio delle cellule GFP positive. Figura 5C illustra t egli presenza di cellule GFP positive nel nervo sciatico dopo trapianto intra-nervoso. Nervo sciatico è stato usato come controllo come la dimensione RLN non consente trapianto intra-nervoso.
Figura 1. Proprietà morfologiche ed espressione P75 in colture primarie di OB (A e C) e OM (B e D) in vitro. (A e B) OECs in OB e OM colture primarie espressi morfologie allungate, triangolari, o di forma mandrino . (C e D) superficie cellulare espressione di p75 in colture primarie OB e OM è stata determinata mediante citometria di flusso. I numeri indicano la popolazione totale e la percentuale di cellule presenti nelle regioni gated indicate. Per favore / 50590fig1highres.jpg "> clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura. cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Figura 2. Immagine di una anastomosi del RLN eseguita con 11.0 sutura. (A) Frazionatura RLN prima dell'intervento chirurgico. (B) anastomosi tra prossimale e il moncone distale del RLN. cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.
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Figura 3. Vista tipici endoscopici del piano ratto glottide. Durante le valutazioni, punti di riferimento sono determinati in modo da avere lo stesso campo di vista per ogni registrazione. Dal punto di vista presentato sia il rapimento massima (A) e di adduzione massima (B) sono misurati. Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Figura 4. Esempi di tracce EMG ottenuti durante la respirazione nel muscolo PCA. (A) Gli animali del gruppo di controllo hanno presentato una ricca attività muscolare elettrica, con un incremento durante l'inspirazione. (
Figura 5. Studi istologici nervosi. (A e B) Esempio di sezioni coronali del RLN dal gruppo di controllo. Questa analisi ha mostrato che il gruppo di controllo ha presentato un maggior numero di fibre mieliniche. (A) Ingrandimento 3.960 X e (B) ingrandimento 11.900 X. (C) GFP marcato OB-OECs rimasto al sito della lesione nel nervo sciatico di ratto schiacciato. Ingrandimento 100X.
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Discussion
Le tecniche qui presentate fanno OECs un modello utile per studiare trapianti cellulari in modelli di lesione dei nervi periferici. Il protocollo di coltura cellulare è relativamente semplice e può essere facilmente effettuata. D'altro canto, le procedure chirurgiche, in particolare la sezione / anastomosi del RLN, richiedono esperienza e devono essere eseguite da personale qualificato.
Le procedure descritte in questo protocollo evidenziano fattori importanti per concentrarsi su al fine di ottenere i migliori risultati possibili. In primo luogo, durante la dissociazione di OM, si consiglia un'accurata dissezione avere solo epitelio olfattivo e non respiratorio. In secondo luogo, per l'anastomosi del RLN, si consiglia di eseguire un solo punto con un 11,0 sutura. In terzo luogo, durante le valutazioni è molto importante avere la stessa profondità dell'anestesia tra tutti gli animali. In particolare, anestesia profonda riduce l'ampiezza dei movimenti delle corde vocali durante videolaryngoscopy. Si consiglia di removing il laringoscopio il più presto possibile per evitare l'asfissia degli animali. Durante la registrazione EMG, a causa delle dimensioni dei muscoli PCA si consiglia di riporre accuratamente l'elettrodo monopolare ago. Infine, per gli studi istologici è importante orientare attentamente i campioni RLN avere sezioni coronali. È inoltre molto importante rimuovere e analizzare la parte distale del RLN in cui si verifica Wallerian degenerazione.
I protocolli qui descritti possono essere facilmente modificati per generare colture purificate di OECs da OB e OM. Per la purificazione di OECs da OB si consiglia la tecnica descritta da Nash 14 e per la purificazione di OECs da OM si consiglia il metodo descritto da Bianco 15. Questi due metodi di purificazione specifici hanno consentito di realizzare altamente purificata culture OECs (90%) e sono stati precedentemente ben descritto da loro autori 14,15. Un'altra possibile modifica è la procedura di trapianto where le cellule possono essere iniettate direttamente in un nervo periferico come descritto in precedenza per il nervo sciatico 7. In questo caso le cellule possono essere iniettate senza Matrigel. È importante notare che a causa delle dimensioni del RLN non è possibile iniettare cellule direttamente in questo nervo. Infine un altro possibile modifica è ottimizzazione del protocollo EMG. Infatti, registrazioni muscolari attività dei muscoli PCA e diaframma possono essere eseguite insieme, eliminando la necessità di sincronizzazione tra laringe e muscoli respiratori.
I protocolli attuali possono essere applicati in altri paradigmi lesioni nervose. Abbiamo già trapiantato OECs in diversi modelli di PNI come il nervo sciatico e vago, queste terapie possono essere facilmente utilizzati in altre PNI paradigmi 8,11,12,16. Più interessante trapianto cellulare di OECs può essere esteso a malattie del sistema nervoso centrale, in particolare SCI. Il metodo qui descritto per la misurazione della laringefunzione dopo la sezione RLN / anastomosi può essere utilizzato anche per altri protocolli trapianti cellulari. Infatti, i modelli della laringe possono essere molto potente per valutare i fenomeni di ricrescita e synkinesis assonale.
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Disclosures
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Acknowledgments
Gli autori vorrebbero riconoscere ADIR (Aide à Domicile aux Insuffisants Respiratoires) e Fondation de l'Avenir per il loro sostegno finanziario e al dottor Fanie Barnabé-Heider per la modifica del manoscritto.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DMEM/F12 | Invitrogen | E3521T | |
| FBS | Invitrogen | E3387M | |
| Penicilin/streptomycin | Invitrogen | 1152-8876 | |
| HBSS | Invitrogen | M3467Y | |
| Trypsin-EDTA | Invitrogen | M3513P | |
| Cacodylate | Merck | 1.03256.0100 | |
| DDSA | Biovalley | 00563-450 | |
| MNA | Biovalley | 00886-450 | |
| BDMA | Biovalley | 00141-100 | |
| Polybed 812 | Biovalley | 08791-500 | |
| PE anti-mouse | BD Bioscience | 550589 | |
| Matrigel GFR | BD Bioscience | 356231 | |
| Collagenase A | Roche | 10103586001 | |
| Mouse anti P75 | Chemicon | MAB 365 | |
| 11.0 Wire | Ethicon | FG 2881 | |
| Toluidine Blue | Ral Diagnostics | 361590-0025 | |
| Centrifuge | Sigma | Sigma 2-16PK | |
| Incubator | Thermo Scientific | ||
| Laminar flow hood | Faster | BH-EN 2003 S | |
| Flow cytometer | BD Bioscience | FACSCalibur | |
| Microscope | Zeiss | ||
| Videolaryngoscope | Karl Storz Endoskope | Telecam SL NLSC 20212120 | |
| Acquisition system | AD Instruments | Powerlab system | |
| Pyramitome Ultramicrotomy System | Leica | Ultracut S | |
| Image analysis system | Explora Nova | Mercator |
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