Grazie alla loro squisita affinità e specificità, gli anticorpi sono diventati vettori estremamente promettenti per la somministrazione di radioisotopi alle cellule tumorali per l'imaging PET. Tuttavia, la necessità di marcare anticorpi con radionuclidi con lunghe emivite fisiche spesso si traduce in elevati tassi di dose di radiazioni di fondo ai tessuti non bersaglio. Al fine di aggirare questo problema, abbiamo impiegato una strategia di imaging PET premirata basata sulla reazione di cicloaddizione di Diels-Alder a domanda inversa di elettroni. La metodologia disaccoppia l'anticorpo dalla radioattività e quindi sfrutta le caratteristiche positive degli anticorpi, evitando al contempo i loro svantaggi farmacocinetici. Il sistema è composto da quattro fasi: (1) l'iniezione di un coniugato mAb-trans-ciclooctene (TCO); (2) un periodo di localizzazione durante il quale l'anticorpo si accumula nel tumore e si libera dal sangue; 3) l'iniezione della tetrazina radiomarcata; e (4) la click ligation in vivo dei componenti seguita dalla clearance del radioligando in eccesso. Nell'esempio presentato nel lavoro in esame, un radioligando di tetrazina marcato con 64Cu-NOTA e un anticorpo umanizzato coniugato trans-ciclooctene (huA33) sono stati utilizzati con successo per delineare i tumori del cancro del colon-retto SW1222 con un elevato contrasto tumore-fondo. Inoltre, la metodologia di pretargeting produce immagini di alta qualità a solo una frazione della dose di radiazioni al tessuto non bersaglio creata da radioimmunoconiugati marcati direttamente con 64Cu o 89Zr. In definitiva, la modularità di questo protocollo è uno dei suoi maggiori vantaggi, poiché la porzione trans-ciclooctene può essere aggiunta a qualsiasi anticorpo non internalizzante e la tetrazina può essere attaccata a un'ampia varietà di radioisotopi.