Qui descriviamo una tecnica per incannulare il dotto linfatico mesenterico nei ratti che consente la quantificazione del trasporto di lipidi e farmaci attraverso il sistema linfatico dopo il parto intestinale. La tecnica può essere adattata per valutare le concentrazioni di linfa mesenterica e/o il trasporto di fluidi, cellule immunitarie, peptidi, proteine e molecole lipofile.
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Articolo metodologico
La linfa mesenterica Duct Cannulated Rat Modello: Applicazione alla valutazione di intestinale linfatico Drug Transport
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il sistema linfatico intestinale gioca un ruolo chiave nel trasporto di liquidi, l'assorbimento dei lipidi e la funzione immunitaria. La linfa scorre direttamente dal piccolo intestino attraverso una serie di vasi linfatici e nodi che convergono al dotto linfatico mesenterica superiore. Incannulazione del condotto mesenterico linfatico consente quindi la raccolta della linfa mesenterica scorre dall'intestino. Mesenterici costituito da una frazione cellulare di cellule immunitarie (99% linfociti), frazione acquosa (liquido, peptidi e proteine quali citochine e ormoni intestinali) e frazione lipoproteina (lipidi, molecole lipofile e apo-proteine). Il condotto linfatico modello cannulazione mesenterica può quindi essere utilizzato per misurare la concentrazione ed il tasso di trasporto di una serie di fattori dall'intestino attraverso il sistema linfatico. Modifiche a questi fattori in risposta alle sfide differenti (ad esempio, le diete, gli antigeni, droga) e nella malattia (ad esempio, malattia infiammatoria intestinale, HIV, diabete) può anche be determinato. Un'area di espansione interesse è il ruolo del trasporto linfatico nell'assorbimento dei farmaci lipofili somministrati per via orale e profarmaci che associano con intestinali vie di assorbimento dei lipidi. Qui si descrive, in dettaglio, un modello di topo cannulata dotto linfatico mesenterica che consente di valutare la velocità e il grado di lipidi e di trasporto della droga attraverso il sistema linfatico per diverse ore dopo la consegna intestinale. Il metodo è facilmente adattabile alla misurazione di altri parametri in linfa. Forniamo una descrizione dettagliata delle difficoltà che si possono incontrare quando si stabilisce questo metodo chirurgico complesso, così come i dati rappresentativi di esperimenti falliti e di successo per fornire istruzioni su come per confermare il successo sperimentale e interpretare i dati ottenuti.
Introduzione
La linfa fluisce dal piccolo intestino attraverso un processo unidirezionale che origina a singoli lacteals che sono contenuti all'interno di ogni piccola villi intestinali 1. Lacteals sono relativamente permeabile ai fluidi, macromolecole e cellule e la formazione della linfa quindi inizia con l'ingresso di questi fattori in lacteals. La linfa iniziale nei lacteals scorre successivamente dall'intestino tramite una rete di microvasi linfatici, raccolta (afferente) vasi linfatici, una serie di linfonodi mesenterici e, infine, i post-nodale (efferenti) vasi linfatici. Nei nodi, linfa passa attraverso una serie di seni midollari dove avviene lo sc....
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Protocollo
Gli studi descritti in questo manoscritto sono stati approvati dal comitato etico animali locale e sono state condotte in conformità con il Consiglio Australia e Nuova Zelanda per la cura degli animali nella ricerca e nell'insegnamento linee guida. Prima di iniziare qualsiasi procedura di animale, assicurarsi che le autorizzazioni appropriate è ottenuta attraverso l'istituto / organizzazione locale. Come per tutti gli interventi chirurgici su animali, assicurarsi che l'intervento viene eseguito da operatori adeguatamente formati, in condizioni asettiche e che anestetici, analgesici e antibiotici vengono somministrati quando necessario per assicurare un ri....
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Risultati
I risultati di un esperimento rappresentativo per quantificare la portata cumulativa e tasso di lipidi e di trasporto del farmaco attraverso il sistema linfatico seguente erogazione intestinale utilizzando il modello linfa cannulazione mesenterica sono mostrati in Figura 4 e Figura 5. In questo esperimento, 200 ug del modello lipofilo alofantrina farmaco è stato somministrato nel duodeno di ratti oltre 2 ore in una formulazione contenente 40 mg di acido oleico (compresi 2-5 uCi 14<.......
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Discussione
Il modello di ratto mesenterica linfa incannulamento consente la quantificazione diretta della concentrazione e la velocità di trasporto di varie cellule e molecole (come lipidi e farmaci) da l'intestino nella linfa e le modifiche a questi che si verificano in risposta a sfidare di varie sostanze (dieta , antigene, farmaci, formulazioni, ecc) 10,27 e la malattia (cancro, virus, colite, insulino-resistenza, etc.) 5-7. I componenti che sono raccolti nella linfa possono essere ul.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Il finanziamento da parte dell'Australian Research Council (ARC) e del National Health and Medical Research Council (NHMRC) è un riconoscimento di gratitudine.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Soluzione salina sterile | Baxter healthcare | AHB 1307 | È possibile utilizzare qualsiasi marca. Esempio qui è Baxter 100 ml sacche di soluzione salina, scatola da 50 |
| 70 % di etanolo in acqua | Qualsiasi | marca può essere utilizzata | |
| Soluzione di clorexidina gluconato (Microshield 4) | Livingstone International | JJ60243L | È possibile utilizzare qualsiasi marca. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =JJ60243L |
| Soluzione di betadina | Livingstone International | BU0510 | È possibile utilizzare qualsiasi marca. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =BU0510 |
| Ilium Ketamil (Ketamina 100 mg/ml) | PROVET VICTORIA | KETA I 1 | http://www.provet.com.au/ |
| Ilio xilazil(xilazina 100 mg/ml) | PROVET VICTORIA | TRO-3828 | http://www.provet.com.au/ |
| ACP 10 Iniezione (Acepromazina 10 mg/ml) | PROVET VICTORIA | VTG-DACP010020 | http://www.provet.com.au/ |
| Pentobarbitone di sodio | PROVET VICTORIA | 24529 | È possibile utilizzare qualsiasi marca. Esempio qui è Lethabarb® 325 mg/ml di pentobarbitone di sodio, Virbac Animal Health. http://www.provet.com.au |
| Eparina (35000U. in 35 mL) | Sigma Pharmaceuticals | 337220 | http://sigmaco.com.au/ |
| Acido etilendiamminotetraacetico (EDTA) sale disodico diidrato | Sigma-Aldrich | E1644 | Qualsiasi marca può essere utilizzata. Un esempio qui è il sale disodico di EDTA di Sigma. |
| Cannula in polietilene (PE) d.o. 0,96 mm x d.i. 0,58 mm | Prolunghe per microprovette | PE8050 | È possibile utilizzare qualsiasi marca. L'esempio è un tubo in PE 0,96 x0,58 mm, 30 m |
| Cannula in polietilene (PE) con diametro esterno 0,8 mm x diametro interno 0,5 mm | Prolunghe per microtubi | PE9658 | È possibile utilizzare qualsiasi marca. L'esempio è un tubo in PE 0,8 x0,5 mm, 30 m |
| Righello | Qualsiasi | marca può essere utilizzata | |
| Marcatori | Qualsiasi | marca può essere utilizzata | |
| Accendisigari | Qualsiasi | marca Qualsiasi marca può essere utilizzata | |
| Adesivo veterinario | Qualsiasi | Qualsiasi marca può essere utilizzata | |
| Aghi calibro 23 | Livingstone International | DN23GX0.75LV | È possibile utilizzare qualsiasi marca. L'esempio è l'ago monouso Livingstone, sterile, 23GX0,75 pollici, 100/BOX. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT= 6& search=DN23GX0.75LV |
| Ferri calibro 25 | Livingstone International | DN25GX1.0LV | Può essere utilizzato qualsiasi marca. Esempio qui è l'ago usa e getta Livingstone, sterile, 25GX1.0inch, 100/BOX. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search= DN25GX1.0LV |
| Siringa da 1 ml | Livingstone International | T3SS01TA | È possibile utilizzare qualsiasi marca. Esempio qui è la siringa Terumo 1 ml Slip Tuberculin 100/Box. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =T3SS01TA |
| siringa da 10 ml | Livingstone International | T3SS10SA | È possibile utilizzare qualsiasi marca. Esempio qui è la siringa Terumo 10 ml Slip 100/Box. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =T3SS10SA |
| Tamponi di garza | Livingstone International | GSC075 | Qualsiasi marca può essere utilizzata e tagliata alla dimensione richiesta. Esempio qui è la garza tampone di cotone riempito 7,5x7,5 cm, 8 strati. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =GSC075 |
| Cotton fioc | Livingstone International | CTAST075DP | Qualsiasi marca può essere utilizzata. Esempio qui è l'applicatore in cotone Livingstone in plastica a doppia punta. 75MM. 100/PK. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =CTAST075DP |
| Termoforo | Ratek | WT1 | Può essere utilizzato qualsiasi marca che mantenga la temperatura a 37°C. Un esempio qui è il vassoio scaldavivande Ratek. |
| Lampada chirurgica | Harvard Apparatus | 72-0215 con 72-0267 | È possibile utilizzare qualsiasi marca. Esempio qui è l'apparecchio Harvard V-Lux 1000 Sorgente di luce fredda con guida di luce a collo d'oca biforcato, nero, diametro della fibra di 4,7 mm (ciascun braccio). http://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/product_11051_10001_50601_ -1_HAI_ProductDetail e http://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/product_11051_10001_35487_ -1_HAI_ProductDetail___ |
| Microscopio | operatorio Zeiss | 495005-0014-000 | È possibile utilizzare qualsiasi marca. Ne è un esempio lo Stereomicroscopio Zeiss Stemi 2000-C con Stand S Double Spot e KL 300 LED. https://www.micro-shop.zeiss.com/?l=en&p=us&f=e&i=10143 |
| Sutura di seta | Livingstone International | DTSK163019F4 | È possibile utilizzare qualsiasi marca. L'esempio qui è Sutura in seta a taglio inverso a 3/8 cerchi 3/0 filo 19mm. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =DTSK163019F4 |
| Lame per bisturi | Fine Science Tools (FST) | 10020-00 | È possibile utilizzare qualsiasi marca. L'esempio qui è la lama per bisturi FST #20. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=191 |
| Manico per bisturi | Fine Science Tools (FST) | 10004-13 | È possibile utilizzare qualsiasi marca. Esempio qui è FST Scalpel Handle #4. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=298&CategoryId=51 |
| 1 x Forbici chirurgiche piccole | Fine Science Tools (FST) | 14060-09 | È possibile utilizzare qualsiasi marca. Esempio qui sono le forbici fini FST, 9 cm con tagliente da 21 mm, affilate, dritte. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=40&CategoryId=17 |
| 2 pinze con punta curva seghettata | Fine Science Tools (FST) | 11001-13 | È possibile utilizzare qualsiasi marca. Esempio qui è una pinza FST da 13 cm con punta curva da 2,8x1,4 mm. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=405&CategoryId=32 |
| 1 x Forbici per iridectomia | Fine Science Tools (FST) | 15000-08 | È possibile utilizzare qualsiasi marca. Esempio qui sono le forbici a molla FST Vannas - tagliente da 2,5 mm, dritte. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=17&CategoryId=16 |
| 1 x Pinze con punta diritta serata | Fine Science Tools (FST) | 11650-10 | È possibile utilizzare qualsiasi marca. L'esempio è FST Graefe 10 cm dritto con punta seghettata 1 x 0,99 mm. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=390&CategoryId=32 |
| 1 x Pinze con punta fine liscia, affilata, diritta | Fine Science Tools (FST) | 11251-10 | È possibile utilizzare qualsiasi marca. L'esempio qui è la pinza FST Dumont #5 dritta da 11 cm con punta da 0,08 x 0,04 mm. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=335&CategoryId=29 |
| 1 x Pinze con pinze curve lisce e fini | Strumenti per la scienza fine (FST) | 11063-07 | È possibile utilizzare qualsiasi marca. Esempio qui è la pinza delicata FST da 9 cm con punta liscia da 0,4 x 0,3 mm. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=360 |
| 2 x Emostatici Strumenti per la | scienza fine (FST) | 13010-12 | È possibile utilizzare qualsiasi marca. Non tutti gli operatori utilizzano gli emostatici. L'esempio sono gli emostatici per microzanzare FST da 12 cm con 20 mm di lunghezza x 1,3 mm di larghezza, punta dritta seghettata. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=377&CategoryId=33 |
| 1 x Porta aghi da sutura | Fine Science Tools (FST) | 12001-13 | È possibile utilizzare qualsiasi marca. Esempio qui è il porta-aghi Hasley FST da 13 cm con punta da 16 mm di lunghezza x 1,9 mm di larghezza. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=254&CategoryId=70 |
| 1 x Morsetto per arteria | Fine Science Tools (FST) | 18050-28 | È possibile utilizzare qualsiasi marca. Esempio qui è FST Bulldog Serrefines dritto, 28 mm di lunghezza, dimensioni della ganascia 9x1,6 mm con pressa a pinza media. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=270&CategoryId=82 |
| Acido oleico | Sigma Aldrich | O1008 | Quando richiesto, può essere utilizzata qualsiasi marca. L'esempio qui è l'acido oleico puro al 99%. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/o1008?lang=en®ion=AU |
| acido 14C-oleico | Perkin | NEC317050UC | È possibile utilizzare qualsiasi marca. L'esempio qui è l'acido oleico, [1-14C]-, 50µ Ci (1.85MBq). http://www.perkinelmer.com/Catalog/Product/ID/NEC317050UC |
| Taurocolato di sodio | Sigma Aldrich | T4009 | Qualsiasi marca può essere utilizzata. L'esempio qui è l'acido taurocolico sale di sodio idrato ≥ 95% (TLC) . http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t4009?lang=en®ion=AU |
| Halofantrine | Glaxo Smith Kline L'alofantrina | è stata gentilmente fornita come regalo da Glaxo Smith Kline | |
| Fosfato di sodio monobasico | Sigma Aldrich | 71507 | Qualsiasi marca può essere utilizzata. Un esempio è il fosfato di sodio monobasico monoidrato, BioXtra, per la biologia molecolare, >99,5%. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/71643?lang=en®ion=AU |
| Sodio fosfato bibasico | Sigma Aldrich | 71643 | Qualsiasi marca può essere utilizzata. Un esempio qui è il fosfato di sodio bibasico diidrato, BioUltra, per la biologia molecolare, >99%. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/71507?lang=en®ion=AU |
Riferimenti
- Barrowman, J. A., Tso, P. Gastrointestinal lymphatics. Comprehensive Physiology. , 1733-1777 (2010).
- Karaman, S., Detmar, M. Mechanisms of lymphatic metastasis. J Clin Invest. 124 (3), 922-928 (2014).
- Mossel, E. C., Ramig, R. F.
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