Introduction
Lungcancer är den vanligaste orsaken till dödsfall i cancer i hela världen 1. Forskning om förebyggande, tidig upptäckt och behandling av lungcancer pågår i många forskningscentra över hela världen 2,3. Flera djurmodeller för lungcancer har utvecklats, och de har visat sig vara användbara för att studera mekanismerna för lung cancer och cellursprungs fastställa förekomsten av cancerstamceller, och för att undersöka olika nya terapeutiska strategier 4. Tidigare modeller förlitat sig på cancerframkallande-inducerad tumör initiering i känsliga stammar av möss 5. Utvecklingen av knockout och transgena musmodeller där lungcancer uppstår som en följd av specifikt manipulerade genetiska skador har avsevärt förbättrat vår förmåga att kontrollera tumörinduktion och härma flera aspekter av humana lungcancer 4. Men det är en stor utmaning i att använda lungcancer djurmodeller avsaknad av en realtids metod för attnoggrant identifiera och övervaka uppkomsten och utvecklingen av tumörer i mus lungorna och dokumentera eventuella senare förändring i deras storlek, såsom deras fortsatta tillväxt eller minskning som svar på behandlingar. Detta har tvingat forskare att tillgripa flera tid, ansträngning och resurskrävande metoder för att identifiera tumörerna och att utvärdera sina experimentella resultat. Närvaron av inneboende inter-mus variation som svar på tumörinduktion kräver användning av ett stort antal djur i varje experimentgrupp för att minska data variabilitet. Oförmågan att bedöma tumörtillväxt eller svar på behandling i realtid har tvingat forskare att blint avliva möss vid flera tidpunkter i långa experimentella protokoll för att garantera att de kommer att samla in rätt data, vilket resulterar i slöseri med resurser från proverna uppsamlades vid tidpunkterna som antingen är för tidigt eller för sent.
I föreliggande studie, till ett förfarande utnyttja en liten-djur mikro-computed tomografi (mikro-CT) scanner för att upptäcka och följa upp lungtumörer i levande möss införs. Vi använde vår nyligen beskrivits Sftpc-rtTA och Tre-FGF9-IRES-EGFP dubbeltransgena (DT) möss som snabbt utveckla lungadenokarcinom efter induktion med doxycyklin 6,7. Användningen av mikro-CT kan vi (bland annat) utesluter möss med avvikande lung avvikelser före induktion, bekräfta utvecklingen av tumörnoduli i lungan efter induktion, och observera förändringar i tumörnoduli som svar på experimentella behandlingar. Slutpunkt dödshjälp av möss och histologiska bedömningen bekräftade riktigheten i realtid bedömning som gjorts med mikro-CT. Vi tror att denna teknik kommer att bana väg för att utföra bättre planerade experiment med användning av lungcancer djurmodeller och samtidigt spara värdefulla resurser, förkorta observationstiden och öka noggrannheten och förståelsen av resultaten.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Djurförsök har godkänts av Institutional Animal Care och användning kommittén av Keio-universitetet.
Obs: I denna studie använde vi Sftpc-rtTA och Tre-FGF9-IRES-EGFP DT möss där lungadenokarcinom snabbt utvecklas efter induktion genom att mata chow innehåller doxycyklin 6,7. Däremot kan alla förfaranden för bedömning tillämpas på andra modeller lungcancer mus.
1. Experiment Outline:
- Identifiera status i lungorna vid baslinjen:
- Före tumörinduktion, när DT möss är 8 - 12 veckor gammal, utföra den första mikro-datortomografi (se avsnitt 2 och 3 nedan). Detta fungerar som lungskintigrafi baslinjen, bekräftar frånvaron av spontant utvecklade knölar orsakas av en läckande transgen, och dokumentera det inte finns någon befintlig lungpatologi innan tumörinduktion.
- Initiera tumörinduktion:
- Byta DT möss från vanlig chow för doxycyklin chow att inducera Fibroblast Growth Factor (FGF) 9-expression i de alveolära celler och för att starta tumörutveckling. Ge doxycyklin chow (200 ppm) efter behag.
- Bekräfta utvecklingen av tumörnoduli i mus lungorna:
- Utföra en mikro-datortomografi för att identifiera utvecklingen av tumörnoduli jämfört med före-induktion scan.
- Utvärdera svar på behandlingen:
- För att testa förmågan hos mikro CT för att upptäcka förändringar i tumörnoduli som svar på behandling, administrera FGF-receptorn (FGFR) -hämmare AZD4547, sedan utföra ytterligare mikro-datortomografi efter 5 och 10 veckor.
- Slutpunktsutvärdering:
- Avliva alla behandlings- och kontrollmöss och process vävnader för histologisk utvärdering (se avsnitt 6 nedan).
2. förbereda möss för Micro-CT Image Acquisition:
- Slå på mikro-CT-scannern och datorn.
- click på programvara som heter "R_m CT2", klicka sedan på "värma upp".
- Ta bort provet sängen på vilken musen placeras från mikro-CT kammare. Linda sängen med plastfolie.
- Ställ anestesi induktions rutan genom att tillsätta isofluran till anestesi förångaren upp till den markerade nivån. Ställa in isofluran flödeshastigheten vid 3 L / min.
- Öppna syretank för att starta flödet av syre in i induktionsrutan och ställ in flödeshastighet vid ett L / min.
- Placera musen i anestesi induktion och bekräfta att det är djupt sövd genom frånvaron av spontan rörelse och som svar på en hud nypa (en mild nypa en liten hudveck, som inte orsakar vävnadsskada eller hud paus).
- Applicera en okulär smörjmedel för att förhindra hornhinnan torrhet under narkos.
- Öppna mikro-CT kammare och placera musen med ryggsidan uppåt på provbädden. Håll huvudet av musen och dra kroppen nedåt från de nedre extremiteterna i order att sträcka och räta kroppen symmetriskt.
- Stäng av anestesi flödet till induktions rutan och slå på den mot röret som ansluter till mikro-CT kammare.
- Placera anestesi röret i musen näsa för att administrera kontinuerlig bedövningsmedel.
- För att fixera musen på plats; linda mus och prov sängen med plastfolie.
Obs: Det är viktigt att hålla mus under djup anestesi och lindas till prov sängen eftersom varje liten rörelse eller vridning av kroppen under genomsökningen kommer att resultera i disiga bilder och svårigheter i tolkningen. - Stäng mikro-CT kammaren.
- Justera mikro-CT-system till 90 kV och 160 | iA och skanningstiden till 4,5 min. Ställ in bildområdet till 24 × 19 mm och voxelstorleken till 50 × 50 × 50 pm. Använd synkront läge för hjärtslag.
- Gör en ny mapp i "databas" för att spara nya bilder i mappen.
- Starta skanningen.
- Efter slutförandet av skanningen, flytta musen till en tom bur och observera den tills den återfår medvetandet. Utsätt det inte med andra möss förrän den har återhämtat sig helt från effekterna av narkosen.
3. Pre-induktion Micro-CT Bild Visualisering och analys:
- För att visualisera mikro CT-bilder, ladda ner gratis ImageJ programvaran från följande webbplats: http://imagej.nih.gov/ij/ . Obs: Varje mikro CT datafil är en bunt med omkring 500 TIF-filer (.tif). Andra bildvisning programvara kan också användas.
- Öppna seriemikro CT bildfiler och bläddra igenom alla bilderna av varje mus från halsen till magen eller vice versa.
- Använda skanningar av naiva vildtyp möss, identifiera tätheten av olika områden och normala anatomiska strukturer i bröstet baserad på kunskap om mus anatomi (se figur 1A).
- Håll markören meddatormus och rulla upp, med början från den vitaktiga buken inälvor och membran, genom bröstet och upp till halsen.
- Identifiera de beniga landmärken bröstet bur (bröstben i fronten, kotor i ryggen och ribbor på sidorna).
- Identifiera hjärtat i den främre delen av bröstkorgen och de större blodkärlen i närheten av hjärtat och i mediastinum.
- Beakta luftstrupe lumen (som en liten mörk cirkel i nivå med halsen och övre bröstet), som förgrenar till höger och vänster huvud bronkerna fortsätter sedan att filial i mindre och mindre luftrören. Observera att varje luftrör är nära förknippad med två eller tre blodkärl (Figur 1A).
- Börja undersöka de skanningar av un-inducerad DT möss och identifiera förekomsten av eventuella avvikelser.
- Uteslut möss med onormala före induktion lung skuggor (t.ex. knutor, emphysematous bullae, etc.) från ytterligare experiment. (Figur 1C-E, G, H
4. tumörinduktion:
- För att inducera tumörutveckling i experimentell möss som uppvisade normala lung skannar, byter sin mat från vanliga chow för doxycyklin innehållande chow (200 ppm).
5. Uppföljningsskanningar:
- Efter 10 veckor, utföra en andra mikro-CT-svep av alla möss för att bekräfta utvecklingen av tumörnoduli i sina lungor (se figur 2).
- Delas möss in i två grupper. Administrera FGFR blockerare AZD4547 (125 | j, g / kg / dag via en magsond i 6 dagar / vecka under 10 veckor) och en grupp och en placebo till den andra kontrollgruppen för ytterligare 10 veckor.
- Följ upp förändringar i nodulära skuggor genom att utföra en tredje skanning 4 - 5 veckor senare.
- Vid slutet av 10 veckors behandling, utför en fjärde scan.
- Avliva alla möss med CO 2 inhalation eller med intraperitoneal injektion av 0,1 mg / 200 | il av pentobarbital.
- Tillidentifiera de dynamiska förändringar i tumörnoduli efter induktion och som svar på behandling, identifiera liknande positioner inom serie skanna bilder av samma mus på två eller flera olika tidpunkter sedan kontrollera utseendet / försvinnandet av onormala skuggor (Figur 3 ).
- För att underlätta identifieringen av samma plan i samma mus vid olika tidpunkter, försök att associera planet av intresse med anatomiska landmärke strukturer inom mus bröstet.
- Använder landmärken såsom trakea, dess bifurkation, höger och vänster huvud bronkerna, aorta, diafragma, och stora blodkärl.
Obs: Bröst ben, inklusive ryggkotor, revben och bröstben är mindre användbara som landmärken på grund av vanliga små lutningar i mus kropp inriktning på prov sängen, vilket ökar risken för feltolkning av skanningsläget positionering. På samma sätt är bilden serienummer inom den skannade filen opålitliga för identifying samma position över tiden på grund av förändringen i mus kroppslängd från en tid-punkt till en annan. Fel eller oriktigheter i att identifiera samma plan vid olika tidpunkter kan resultera i falskt positiva / negativa tolkning av resultaten.
- Använder landmärken såsom trakea, dess bifurkation, höger och vänster huvud bronkerna, aorta, diafragma, och stora blodkärl.
6. mus dödshjälp och Lung Samling:
- Euthanize möss med CO2 inhalation eller med intraperitoneal injektion av 0,1 mg / 200 | il av pentobarbital.
- Exponera den abdominala viscera genom att skära längsgående genom bukväggen. Bleed musen för att minska volymen av blodet i lungorna genom att dissekera den abdominala aortan.
- Slits membranet med fina sax; detta kommer att resultera i förlust av det negativa trycket från brösthålan, vilket således kollapsar lungorna. Exponera lungorna och hjärtat genom att skära och ta bort delar av ribborna hos den främre bröstväggen. Rengöra den främre delen av halsen genom att skära huden och mjukdelar för att exponera Tracheen.
- Skär bort hjärtat och tymus. Infoga pincett bakom luftstrupen för att separera den från matstrupen.
- Cannulate luftstrupen med en G24 kanyl sedan säkra den på plats genom att dra åt en tråd runt den införda delen.
- Blåsa upp och fixera lungan med användning av iskall 4% paraformaldehyd (PFA) via trakealkanyl med användning av en 25 cm kolonn. Lossa kanylen och dra åt tråden för att förhindra PFA läckage sedan skära den övre luftstrupen från sin infästning i struphuvudet.
- Dra luftstrupen från suturtråd och dissekera den från sitt fäste, och fortsätter nedåt för att ta bort den med lungan en -block. Infoga det i en 15 ml rör innehållande 5 ml 4% PFA. Låt lungorna i PFA O / N för att säkerställa fullständig vävnadspenetrering och fixering, sedan bearbeta vävnaden i en vanlig paraffin block 8.
- Skär paraffinblock i 6 um tjocka skivor på en mikrotom och fläcken med hematoxylin och eosin med hjälp av standardtekniker. 7. Histologisk Utvärdering:
- Slå på diascanner instrumentet och datorn.
- Klicka på programmet "NDP scan".
- Välj scanningsläge "Batch av bilder" och "halvautomatisk läge" för att skanna en serie av bilder.
Obs! Robotarm som plockar upp bilderna under sekventiell skanning är mycket känslig för eventuella ojämnheter på kanterna av objektglas. - Palpera kanter alla glas innan du lägger dem i maskinen. Om det finns några utskjutande delar täckglaset eller torkade monteringsmedium, rengöra det med en fräs eller en skalpell.
- Ladda bilderna i ett bildspel kassett. Öppna provluckan och skjut kassetten i läge "ett";. Stäng dörren.
- På datorprogram, ge korta beskrivande namn för alla bilder i sin motsvarande position i kassetten klicka sedan på "OK" -knappen.
- Välj profilläge: "Bright".
- Klicka på "Start Batch" för att starta den preliminära skanning.
Obs! När maskinen har skannat alla bilder, kommer mjukvaran automatiskt upptäcka områden med vävnader på alla bilder och föreslå det som ett område av intresse. - Om det behövs, omdefiniera regionen av intresse genom att hålla ner vänster musknapp och dra regionen gränsen.
Obs: Definiera drivet stora delar av bilderna som områden av intresse kommer att resultera i en mycket längre tid för skanning. - När nöjd med regionerna intressen på alla bilderna, klicka på "Scan" för att börja skanna alla bilder.
Obs! Skannade filer kan observeras digitalt i låg och hög upplösning, och bilder kan exporteras som JPEGfiler.
Notera: Även om användningen av en "slide scanner" för digital histologisk utvärdering beskrivs här, är också möjligt att använda vanliga mikroskop och visuell histologisk utvärdering för bedömning.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Identifiering av möss med lung avvikelser utfördes vid baslinjen. Före tumörinduktion, när DT mössen var 8 - 12 veckor gamla, lungorna hos alla möss skannas med mikro-CT. Överraskande, ungefär 50% av möss visade avvikelser som tvingade oss att anse dem olämpliga att ingå i den efterföljande studien. Dessa avvikelser var knöl liknande skuggor, stor enstaka eller flera små emphysematous bullae och / eller lobära atelektas (Figur 1A, C, DE, GH). Då var FGF9 transgen och tumörinduktion activated.Only möss som visade normala lung skannar (utan avvikelser) har bytt från vanlig chow för doxycyklin chow att inducera FGF9 uttryck i alveolära celler och efterföljande tumörutveckling. För att bekräfta utvecklingen av tumörnoduli i muslunga efter tio veckor från initieringen av tumörinduktion, följa upp mikro-CT-scanning utfördes. Dessa avslöjade dtveckling av multipla noduler av variabla storlekar i alla möss (figur 2, jämför A till B och D till E). Mikro-datortomografi utfördes för att utvärdera behandlingssvar. Dessa visade att möss som administrerades FGFR inhibitor AZD4547 den i 10 veckor faktiskt uppvisade försvinnande eller reduktion av storleken av noduler som var synliga i förbehandlingsskanningar (figur 3, jämför pre-, post-induktion och efterbehandlingar, AC , EG och IK). Å andra sidan, kontrollmöss som inte fick FGFR-hämmare och fick placebo visade istället ingen förändring, ökning av knölar storlek och utseende av nya knölar (Figur 3, MO); vilket bekräftar att minskningen i storlek observerades i behandlingsgruppen är en verklig effekt av den terapeutiska interventionen.
(Figur 1B, F, I). Möss efter 10 - 12 veckors induktion med doxycyklin: Flera adenokarcinom knutor med varierande storlekar och positioner observerades i alla djur (Figur 2C, F). Möss efter 10 - 12 veckors doxycyklin induktion följt av 10 - 12 veckor en FGFR blockerare: Noduli var mycket färre och mindre (figur 3D, H, L) jämfört med de som observerats efter induktion. Möss efter 10 - 12 veckors doxycyklin induktion följt av 10 - 12 veckors placebo: Flera stora knölar är synlig (Figur 3P) liknar dessa ses vid den efter induktion tidpunkt.
Figur 1. Micro-CT Identifierar Pre-induktion Lung missbildningar. Samtliga möss undersöktes med mikro-CT före inledandet av doxycyklin induktion. När lung avvikelser upptäcktes mössen avlivades för histologisk bekräftelse. Representativa mikro datortomografi bilder för (A) en normal lunga, (C) lungor med en atelectatic område, (DE) lungor med emphysematous bullae och (GH) lungor med en onormal nodulär skugga. Histologisk utvärdering bekräftade riktigheten i mikro CT fynd: (B) normala lung histologi, (F) flera emphysematous områden; och jag) flera tumörnoduler. Skala bar: 200 nm.53904fig1large.jpg "target =" _ blank "> Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2. Micro-CT Identifierar utveckling av tumörnoduli efter induktion. Möss som visade en ren före induktion scan matades doxycyklin chow för 10 veckor sedan åter utvärderas med mikro-CT, varefter de avlivades för histologisk utvärdering. Representativa mikro datortomografi bilder från två olika möss visar utseendet av flera nodulära skuggor 10 veckor efter starten av doxycyklin chow. (A, D) före induktion ren lunga, (B, E) med samma ställning skanna bilder som visar utvecklingen av flera knutor (röda pilar). Små gula pilar pekar på de anatomiska landmärken som används för att identifiera samma position vid olika tidpunkter. (C, F) knutor sett i mikro-datortomografi var confirmed i lungan histologiska sektioner. Skala bar:. 200 pm Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3. Mikro CT Identifierar förändringar i tumörnoduli som svar på behandling. Möss som visade rena före induktion skannar matades doxycyklin chow i 10 veckor, och sedan en efter induktion mikro-CT utfördes. Därefter var de administrerade hämmaren AZD4547 FGFR i 10 veckor och omprövas med mikro-CT (efterbehandling). Kontrollmöss administrerades placebo i stället för FGFR-hämmaren att klargöra den faktiska effekten av det terapeutiska ingrepp. Slutligen fick mössen avlivades för histologisk utvärdering.
Representativa mikro datortomografi bilder från fyra olika möss. (A, E, I, M) (B, F, J, N) Skannar från samma möss efter de inducerades med doxycyklin chow under 10 veckor. alla visade flera knutor (röda pilar, omsluter röd oval ett område som hade varit helt skuggas av knölar). (C, G, K) Skannar från samma möss efter ytterligare 10 veckors behandling med FGFR-hämmare visar fullständigt försvinnande eller markant minskning i storleken av noduler. (O) skanna från en kontrollmus att representera kontrollgruppen som administrerades ett placebo i stället för FGFR-inhibitor som visar ökning av tumörnoduler 'storlek och antal. Små gula pilar pekar på de anatomiska landmärken som används för att identifiera samma position vid olika tidpunkter. (D, H, L) Histologiska snitt bekräftade markant reduktion av knöl storlek och antal (jämför figur 2 C och F). (P) visar preseiou flera tumörnoduler när placebo gavs. Skala bar:. 200 pm Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Mikro CT-baserad metod som beskrivs här för realtidsidentifiering av lung avvikelser och övervakning av utvecklingen av tumörnoduli och behandlingssvar i lungcancer djurmodeller gör det möjligt för forskare som bedriver lungcancerrelaterade experiment för att planera mer noggranna och effektiva experiment och samtidigt spara tid och resurser. Vi har tidigare använt MRI för samma ändamål 6. Tydligheten i skanningen och tröskeln för detektion av lung noduli med MRI var sämre än med mikro datortomografi som beskrivs i denna studie 6.
Tidigare studier som använt liknande lungadenokarcinom musmodeller (med olika genetiska bakgrunder och tumörinduktionsmetoder) hade uppenbarligen flera nackdelar som kunde ha undvikits eller förbättrade hade de använt mikro CT skanning 9,10. De hade ingen möjlighet att identifiera eventuella pre-induktionslung avvikelser eller knutor och därmed riskera att confoundingsina resultat genom införandet av olämpliga djur. De hade också något sätt att bekräfta utvecklingen av tumörer efter induktion eller efter förökningscancerceller i vildtyp möss (för att inducera sekundära tumörer), så de var tvungna att vänta 4-8 månader sedan blint avliva möss för histologiska identifiering av tumörer. När dessa modeller har använts för att utvärdera den terapeutiska potentialen av ett läkemedel, forskare tvungen att tilldela flera grupper som avlivas i en kronologisk ordning för att detektera effekten av behandlingar på tumörnoduli med histologi och att kunna identifiera tidpunkten för maximal effekt 11.
En begränsning hos vår metod är emellertid utseendet hos disiga skuggor som skymmer detekteringen av noduler i lungorna när några främmande substanser injiceras intratrakealt 7 (data ej visade). Några möss verkade för att utveckla en långvarig inflammatorisk reaktion på den injicerade substansen och skuggan av denna Reactipå och medföljande interstitiell ödem maskerade de befintliga knölar. I sådana fall, kan MRI prövas som ett alternativ.
Nyligen har andra avbildningsmetoder införts för att utvärdera olika sjukdomar i små djur; som mareld avbildning 12 och positronemissionstomografi (PET) scan 13. Såvitt vi vet har dessa bildsystem inte använts ännu inte utvärderat lungtumörer i möss modeller så jämförelse av detekteringseffektiviteten och bildskärpa med små djur MRI och mikro-CT-bilder är ännu inte möjlig. Tillgängligheten och kostnaden för dessa maskiner är en begränsande faktor för deras omfattande användning.
Vi upptäckte lung avvikelser i cirka 50% av möss vid pre-induktions screening och följaktligen dessa möss uteslöts från ytterligare experiment. Denna höga förekomsten av abnormaliteter skulle kunna vara ett resultat av en "läckande" FGF9 transgenen i en del djur som resulterar i utvecklingen av tumör knutaär ännu innan de inducerade 14. Faktum är att ungefär hälften av de uteslutna djur när den undersöks histologiskt visade närvaro av flera små knölar. Dessa kan också orsakas av en avvikande verkan av den insatta transgenen på grann gener i musgenomet 14. Utvecklingen av denna typ av avvikelser är ingalunda specifika för Sftpc-rtTA och Tre-FGF9-IRES-EGFP dubbeltransgena möss och därmed andra modeller lungcancer kanske lider av liknande situationer. Denna höga förekomsten av avvikelse höjdpunkter jämnt mer vikten av pre-integration screening av möss med användning av mikro-CT. Naiva vildtyp möss visade aldrig några onormala skuggor på mikro-CT (Figur 1A).
Sammanfattningsvis har vi beskrivit en metod som utnyttjar ett litet djur mikro-CT maskin för noggrann detektering och övervakning av utvecklingen av tumörnoduli i lungorna hos en adenokarcinom musmodell. Avanvända den för att övervaka förändringar i knölar över tid, kan mer exakta uppgifter samlas in, och en kostnads- och tidseffektiv tidsförloppet kan anpassas.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Detta arbete stöddes av en Grant-i-Stöd från JSPS KAKENHI för AEH (licensnummer 25.461.196) och TB (Grant nummer 23.390.218 och 15H04833) och National Institutes of Health bidrag HL111190 (DMO). Författarna vill tacka för Miyuki Yamamoto för sina insatser i att hjälpa till med djur genotypning och framställning av histologiska sektioner. Vi är tacksamma för forskningssamverkan Resources, School of Medicine, Keio University för teknisk support och reagens.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| micro-X-ray–computed tomography | Rigaku | R_mCT2 | |
| NanoZoomer RS Digital Pathology System | Hamamatsu | RS C10730 | |
| NDP.view2 Viewing software | Hamamatsu | U12388-01 | http://www.hamamatsu.com/jp/en/U12388-01.html |
| Isoflurane Vaporizer - Funnel-Fill | VETEQUIP | 911103 | |
| Induction chamber, 2 L W9.5 × D23 × H9.5 | VETEQUIP | 941444 | |
| Isoflurane | Mylan | ES2303-01 | |
| AZD 4547 | LC Labratories | A-1088 | |
| Pentobarbital | Kyoritsu | SOM02-YA1312 | |
| G24 cannula | Terumo | SP-FS2419 | |
| Paraformaldehyde | Wako | 163-20145 | |
| Microtome | Leica | RM2265 | |
| Doxycycline | SLC Japan/PMI Nutrition International | 5TP7 | |
| ImageJ software | National Institute of health | http://imagej.nih.gov/ij/ | |
| Puralube vet ointment (Occular lubricant) | Dechra | NDC 17033-211-38 |
References
- Ferlay, J., et al. Cancer incidence and mortality worldwide: sources, methods and major patterns in GLOBOCAN 2012. Int. J. Cancer. 136, 359-386 (2015).
- Mak, I. W., Evaniew, N., Ghert, M. Lost in translation: animal models and clinical trials in cancer treatment. Am. J. Transl. Res. 15, 114-118 (2014).
- Chen, Z., Fillmore, C. M., Hammerman, P. S., Kim, C. F., Wong, K. K. Non-small-cell lung cancers: a heterogeneous set of diseases. Nat. Rev. Cancer. 14, 535-546 (2014).
- Kwon, M. C., Berns, A. Mouse models for lung cancer. Mol. Oncol. 7, 165-177 (2013).
- Malkinson, A. M. The genetic basis of susceptibility to lung tumors in mice. Toxicology. 54, 241-271 (1989).
- Yin, Y., Betsuyaku, T., Garbow, J. R., Miao, J., Govindan, R., Ornitz, D. M. Rapid induction of lung adenocarcinoma by fibroblast growth factor 9 signaling through FGF receptor 3. Cancer Res. 73, 5730-5741 (2013).
- Arai, D., et al. Characterization of the cell of origin and propagation potential of the fibroblast growth factor 9-induced mouse model of lung adenocarcinoma. J. Pathol. 235, 593-605 (2015).
- Paraffin processing of tissue. , Available from: http://protocolsonline.com/histology/sample-preparation/paraffin-processing-of-tissue/ (2012).
- Curtis, S. J., et al. Primary tumor genotype is an important determinant in identification of lung cancer propagating cells. Cell Stem Cell. 7, 127-133 (2010).
- Lau, A. N., et al. Tumor-propagating cells and Yap/Taz activity contribute to lung tumor progression and metastasis. EMBO J. 33, 468-481 (2014).
- Santos, A. M., Jung, J., Aziz, N., Kissil, J. L., Puré, E. Targeting fibroblast activation protein inhibits tumor stromagenesis and growth in mice. J Clin Invest. 119, 3613-3625 (2009).
- Zinn, K. R., et al. Noninvasive Bioluminescence Imaging in Small Animals. ILAR J. 49, 103-115 (2008).
- Yao, R., Lecomte, R., Crawford, E. S. Small-Animal PET: What Is It, and Why Do We Need It. J Nucl Med Technol. 40, 157-165 (2012).
- Haruyama, N., Cho, A., Kulkarni, A. B. Overview: Engineering transgenic constructs and mice. Curr Protoc Cell Biol. , Chapter 19, Unit 19.10 (2009).
