Abstract
Denna studie var utformad för att utvärdera den skyddande effekten av Bacillus subtilis stam mot komplikationer relaterade till värmestress. Trettiotvå Sprague-Dawley-råttor användes i denna studie. Djur behandlades oralt två gånger dagligen i två dagar med B. subtilis BSB3 stam eller PBS. Nästa dag efter den sista behandlingen, fick varje grupp uppdelad och två experimentella grupper (en som behandlats med PBS och en behandlad med B. subtilis) placerades vid 45 ° C under 25 min. Två kontrollgrupper stannade i 25 min vid rumstemperatur. Alla råttor avlivades och olika parametrar analyserades i alla grupper. Negativa effekter av värmestress registreras av minskningen av villi höjd och total slemhinna tjocklek i tarmepitelet; translokation av bakterier från lumen; ökad blåsbildning av erytrocyter och förhöjning av de lipopolysackarider (LPS) i blodet. Den skyddande effekten av behandlingen utvärderas genom prevention av dessa biverkningar. Protokollet inrättades för oral behandling av råttor med bakterier för att förebygga värmestress komplikationer, men detta protokoll kan modifieras och användas för andra administreringssätt och för analys av olika föreningar.
Protocol
Alla experimentella procedurer godkändes av IACUC av Auburn University, Auburn, Alabama.
1. Beredning av odlingsmedier, fat och bakteriekultur
- Ympa 10 ml näringsbuljong i en kolv med en enda koloni av Bacillus subtilis BSB3 kultur, odlades över natt på ett näringsämne agarplatta.
- Göra 500 ml sporulering mediet 19 (per liter: Bacto Nutrient Broth, 8 g; 10% (vikt / volym) KCl, 10 ml; 1,2% (vikt / volym) MgSO 4 x 7 H2O, 10 ml; agar, 15 g) och autoklavera vid 121 ° C i 20 min. Låt svalna till 50 ° C och tillsätt följande sterila lösningar: 1 M Ca (NO 3) 2, 1 ml; 0,01 M MnCl2, 1 ml; 1 mM FeSO 4, 1 ml.
- Sval beredda medium till 40 ° C i 20 min vid rumstemperatur och häll 25 ml i var och en av 20 sterila petriskålar i den sterila skåpet. Låt mediet stelna över natten.
- Sprid 0,5 ml övernattskultur av Bacillus subtilis BSB3 på ytan av mediet i petriskålarna. Inkubera kulturen vid 37 ° C under 5 dagar tills 90% sporulering. Reveal fas-ljus sporer av hög upplösning mikroskopi.
- Skörd bakterier genom att tillsätta 1 ml steril fosfatbuffrad saltlösning (PBS) till plattan och skrapning bakterier från en yta med användning av en steril cellspridare. Lagra suspensionen i kylskåp tills det behövs.
- Bekräfta livsdugligheten av bakterier genom plätering 0,1 ml av den lämpliga spädningen (10 -5 till 10 -6) av en bakteriesuspension på sporulering mediumplattor följt av inkubation under 18-24 h vid 37 ° C
- Räkna bakteriekolonier på plattorna med användning av en koloniräknare och beräkna titer av bakterier i det testade suspensionen. Förbereda bakteriesuspension med den slutliga koncentrationen 1 x 10 8 CFU / ml i PBS.
2. Djur
- Använda 32 Sprague-Dawley-råttor (250-300 g). Behåll djur under specifika patogenfria förhållanden med fri tillgång till standard pellets chow och vatten. Upprätta en medeltemperatur (21 ± 1 ° C), luftfuktighet (50 ± 5%) och en 12 timmar ljus-mörker-cykel.
3. Experimentell design
- Starta behandling av djur genom oral sondmatning 11, efter 2 dagars acklimatisering. Använd sprutan med oral sondmatning nål. Behandla 16 råttor med B. subtilis BSB3 suspension (1 ml per råtta) två gånger per dag i två dagar (B. subtilis grupp). Behandla 16 råttor med PBS (1 ml per råtta) två gånger dagligen under två dagar (PBS grupp) (Figur 1).
- Efter behandlingen, dela varje grupp (8 råttor per grupp): Grupp 1 kontroll (PBS / ingen stress), Grupp 2 B. subtilis (B. subtilis / ingen stress), Grupp 3 stress (PBS / värmestress) och grupp 4- B. subtilis + stress (B. subtilis / värmestress).
- Mäta den rektala temperaturen hos varje råtta med användning av en electronic digital termometer. Hålla råttor i grupp 1 och 2 vid rumstemperatur under 25 min. Placera djur i grupperna 3 och 4 i en klimatkammare vid 45 ° C och relativ fuktighet 55% under 25 minuter.
- Efteråt mäta rektala temperaturen hos varje råtta i alla grupper med hjälp av en elektronisk digital termometer. Placera alla djur vid rumstemperatur under fyra timmar.
- Söva råttorna med isofluran (2-4%) i en förslutbar anestesi burk och observera tills råttorna djupt sövda (frånvaro av respons på tå nypa). Avliva råttorna genom snabb halshuggning med en giljotin.
- Samla stam blod från varje råtta 20 (15 - 16 ml) med apyrogen pipetter i apyrogent rör för att erhålla serum och omedelbart ta blodprov (7 il från varje råtta) med en pipett för mikroskopisk undersökning.
- Sätta rören med blodet i ett kylskåp i minst 30 min för att tillåta koagulering. Centrifugera rören vid 20 ° C, 7000 x g under 10 min och snabbtavlägsna serum med en pipett. Alikvot serum från varje råtta i 50 pl volymer och lagra vid -20 ° C tills analys.
4. Kirurgisk procedur
- Klipp / trimma all päls från buken och bröstkorg på undersidan av stommen med elektriska saxar. Placera stommen i ett sterilt skåp och behandla den rakade ytan av slaktkropps med 70% alkohol.
- Använda en steril skalpell för att skapa en mittlinjen snitt av buken. Ta lever, mesenteriska lymfkörtlar, mjälte och tunntarm från varje råtta med steril pincett.
5. Analys av bakteriell translokation
- Placera varje prov av lever, kröslymfknutor och mjälte i förväg vägd sterila rör och väga. Beräkna vikten av provet som en skillnad mellan vikten av ett rör med ett prov och vikten av ett tomt rör.
- Tillsätt steril PBS till röret för att erhålla en 1:10 spädning (vikt / volym) av provet och homogenize varje prov med en steril glasvävnadshomogenisator för att erhålla en homogen suspension 21.
- Gör seriespädningar (10 -1 till 10 -4) av varje prov i steril PBS. Platta 0,1 ml av alla spädningar av varje vävnad på ytan av MacConkeys och 5% blodagar och Brucella blodagar med hemin (0,005 g / L) och vitamin K1 (0,01 g / L) plattor.
- Inkubera MacConkeys och 5% blodagarplattor aerobt och Brucella blodagarplattor under anaeroba förhållanden vid 37 ° C 22.
- Räkna kolonier av aeroba bakterier efter 24 timmar, och kolonier av anaeroba bakterier efter 48 h inkubation med hjälp av en koloniräknare. Uttrycka resultaten som antalet kolonibildande enheter (CFU) i ett gram vävnad.
6. Histologisk analys
- Avlägsna tunntarms prover från varje råtta genom den kirurgiska proceduren (steg 4,1-4,2). Fix prover i Bouins fixativ bädda i paraffin,förbereda 6 | im sektioner och fläck sektioner med hematoxylin och eosin genom att använda standardförfaranden 23.
- Använda en högupplösande mikroskopsystemet för att mäta höjden av intestinal villi och total mukosal tjocklek i varje prov (förstoring 100X) 24. Analysera 4 prover från varje råtta och gör åtminstone tjugo mätningar i varje prov. Uttrycka resultat i mikrometer.
7. Cytokine Assay
- Använda kommersiella råtta ELISA kit för IL-1β; IL-6; TNF-α; INF-γ och IL-10 för att mäta nivåer av cytokiner i serum enligt tillverkarens protokoll.
- Generera standardkurvor för varje uppsättning prover som analyserats med användning av standarder för den aktuella satsen. Definiera nivån av cytokiner i varje prov genom jämförelse av experimentella data med lämplig standardkurvan.
8. lipopolysackarid Assay
- Analysera nivå av LPS i serum med hjälp av en råtta LPS ELISA-kit enligttillverkarens protokoll. Uppskatta koncentrationen av LPS i prover genom jämförelse av de erhållna värdena med värdena för standardkurvan.
9. högupplöst ljusmikroskopi of Blood
- Använd mikroskopsystemet beskrivits tidigare 25,26. Använd en vibrationsisolering plattform som bas för mikroskopsystemet och videokamera och datorn 25 att spela in livebilder. Kalibrera testbilder med hjälp av en Richardson bilden som tidigare beskrivits 27.
- Placera 7 pl nytaget blod från varje råtta på ett objektglas, täck, fotografera och spela in tio bildrutor av 72 x 53,3 um två i varje prov (förstoring 1,700X).
- Mäta koncentrationen av vesiklar med hjälp av programvara som ger hög upplösning direkt-view optiska bilder i realtid. Undersök minst 20 bildrutor för varje experimentell tillstånd 28.
10. Statistics
- Uttrycka alla värden som medelvärdet och standardavvikelsen. Utföra statistiska analyser och diagram som visar. Analysera resultaten med de två prov t-test, ställ in signifikansnivån på 0,05 för att definiera statistisk signifikans.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Den genomsnittliga kroppstemperaturen hos djur före och omedelbart efter värmestress var 36,7 ± 0,07 ° C och 40,3 ± 0,17 ° C, respektive (P <0,05). Exponering av råttor för värme (grupp 3) resulterade i signifikant inhibering av villi höjd och total mukosal tjocklek (figurerna 2, 3). Oral administrering av BSB3 stam innan stressen skyddad tarmen från de skadliga effekterna av värme.
Translokation av bakterier från tarmen bestämdes genom bakteriologisk analys av kröslymfknutor (MLN), levern och mjälten hos varje råtta. Bakteriekulturer i en koncentration av 1,7 x 10 3 ± 4,6 x 10 2 CFU / g vävnad (fig 4) isolerades endast från MLN och lever hos råttor som förbehandlats med PBS och exponerades för värme (grupp 3). Alla prover från kontrollråttor (grupperna 1, 2) och från värme stressade djurmottog en BSB3 stam (grupp 4) var sterila. Inga bakterier isolerades från mjälte prover.
Ingen förändring av IL-1β; IL-6, TNF-α, var INF-y cytokiner nivåer som är registrerade i värmestress råttor. I serumet hos djur som behandlats med PBS före värmeexponering signifikant förhöjning av IL-10 och LPS-nivåer hittades (grupp 3) - (figurerna 5, 6). Förbehandling med B. subtilis BSB3 (grupp 4) förhindrade ökningen av IL-10 och LPS i serum hos värme stressade djur.
En signifikant ökning av fri vesiklar koncentration från (1,4 ± 0,2) x 10 6 till (3,8 ± 0,3) x 10 6 vesiklar il -1 (p <0,001) befanns i blodet hos råttor som erhöll PBS före värmestress (figurerna 7 , 8). I en grupp av djur som förbehandlats med BSB3 ingen förändring av antalet fria vesiklar hittades akteruter värmeexponering (Figur 7).
Figur 1. Studiedesign. Två grupper av råttor (16 råttor i varje grupp) behandlades genom oral sondmatning med B. subtilis BSB3 (B. subtilis-grupp) eller med PBS (PBS grupp) två gånger om dagen. På dag 3 varje grupp delades upp genom 8 råttor i varje grupp. Råttor från grupp 3 och 4 placerades vid 45 ° C under 25 min. Kontrolldjuren (grupp 1 och 2) hölls vid rumstemperatur. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2. Mätning av Intestinal Villi Höjd (A) och Mucosal Tjocklek (B) hos råttor. Råttor förbehandlade med PBS ellerB. subtilis BSB3 exponerades för 45 ° C (Stress) eller till rumstemperatur (kontroll). Varje grupp bestod av 8 råttor. Tjugo mätningar av varje parameter i varje prov togs. Värden presenteras som medelvärdet och standardavvikelsen. Resultaten analyserades med de två prov t-test på signifikansnivån 0,05 för att definiera statistisk signifikans. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3. Histologiska Bilder av tarmslemhinnan färgades med hematoxylin och eosin. Råttor förbehandlade med PBS eller B. subtilis BSB3 och exponerades för 45 ° C (Stress) eller till rumstemperatur (kontroll) A. PBS / ingen stress,. B. PBS / värmestress; C. B. subtilis / ingen stress, D.B. subtilis / värmestress. Villi höjd indikeras med pilar. Bar 200 nm. Klicka god här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4. totala antalet bakterier i vävnader hos råttor. Råttor som förbehandlats med PBS eller B. subtilis BSB3 exponerades för 45 ° C (Stress) eller till rumstemperatur (kontroll). Varje grupp bestod av 8 råttor. Mesenteriska lymfknutor, lever och mjälte avlägsnades aseptiskt från varje råtta, homogeniserades och ströks ut på agarmedium för att återvinna aeroba och anaeroba bakterier. Totala antalet flyttad bakterier (aeroba och anaeroba) presenteras som kolonibildande enheter (CFU) per gram vävnad. Värden presenteras som medelvärdet och standardavvikelsen. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 5. Grad av IL-10 i serum hos råttor. Råttor förbehandlade med PBS eller B. subtilis BSB3 exponerades för 45 ° C (Stress) eller till rumstemperatur (kontroll). Varje grupp bestod av 8 råttor. Blodserum erhölls från varje råtta och analyserades med en kommersiell råtta ELISA-kit. Värden presenteras som medelvärdet och standardavvikelsen. Resultaten analyserades med de två prov t-test på signifikansnivån 0,05 för att definiera statistisk signifikans. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 6. LPS Koncentration i serum hos råttor. Råttor förbehandlade med PBS eller B. subtilis BSB3 exponerades för 45 ° C (Stress) eller till rumstemperatur (kontroll). Varje grupp bestod av 8 råttor. Blodserum erhölls från varje råtta och analyserades med en kommersiell råtta ELISA-kit. Värden presenteras som medelvärdet och standardavvikelsen. Resultaten analyserades med de två prov t-test på signifikansnivån 0,05 för att definiera statistisk signifikans. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 7. Antal Blåsor i blod råttor. Råttor förbehandlademed PBS eller B. subtilis BSB3 exponerades för 45 ° C (Stress) eller till rumstemperatur (kontroll). En liten droppe (7 l) av nytaget blod placerades på ett objektglas, täck, fotograferas och registreras tio bildrutor i varje prov (förstoring 1,700X). Koncentrationen av vesiklar mättes med användning av programvara som tillhandahåller hög upplösning direkt-view optiska bilder i realtid. undersöktes tjugo bildramar var för varje experimentell betingelse. Värden presenteras som medelvärdet och standardavvikelsen. Resultaten analyserades med de två prov t-test på signifikansnivån 0,05 för att definiera statistisk signifikans. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 8. Ökning av Vesicles Koncentration i blod efter värmestress. Videobilden av blod hos råttor som förbehandlats med PBS före exponering för rumstemperatur (A) eller till 45 ° C (B). En liten droppe (7 l) av nytaget blod placerades på ett objektglas, täck, fotograferas och registreras tio bildrutor i varje prov (förstoring 1,700X). Vesikeln anges som V. Bar 6 pm. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Exponering för höga temperaturer resulterar i allvarliga hälsotillstånd 29. Förebyggande och tidig upptäckt av komplikationer i samband med värmestress är av avgörande betydelse 30. Den presenterade protokollet kan användas för att utvärdera effektiviteten av olika metoder för prevention av värmestress negativa effekter.
Kritiska steg i detta protokoll omfattar: värmebehandlingsförfarandet (45 ° C, 25 min); användningen av apyrogent material under insamling och bearbetning av blod för att förhindra kontaminering med enterotoxiner; hålla serum alikvoter vid -20 ° C för att undvika upprepad frysning och upptining; och följande steril förfarande under analys av bakteriell translokation. Protokollet inrättades för oral behandling av råttor med bakterier för att motverka biverkningar värmestress. För andra administreringsvägar och andra föreningar, kan detta protokoll modifieras. Till exempel, tiden för treatment innan värmepåfrestning kan förlängas. Oral administrering kan ändras till rektal administration. Bacillus subtilis bakterier användes för förhindrande av värmespännings komplikationer genom oral behandling av djur före exponering för förhöjd temperatur. För att bota komplikationer av värmestress, kan detta protokoll modifieras genom användning av bakterier för behandling av djur efter exponering för värme.
Det visade sig att den förhöjning av kroppstemperaturen orsakat en ökning av erytrocyt blåsbildning, och det var helt förhindras genom förbehandling med B. subtilis-bakterier. Sålunda kan ökningen av vesiklar koncentrationen i blodet under exponering för värme ange nivån på värmestress och ger diagnostisk bevis för stabiliteten av erytrocyter och deras motståndskraft mot värme. Det är också en mycket användbar och snabbtest för utvärdering av effekten av förebyggande behandling mot värmestress komplikationer. Induktions of värmechockproteiner som en markör för värmestress var tidigare diskuterats 30, men detta tillvägagångssätt är tidskrävande och kan inte användas för realtidsdiagnos av svar på värmestress.
Den presenterade metoden för förebyggande av värmespännings negativa effekter är enkel, kostnadseffektiv och kräver ingen ytterligare utrustning eller speciella anläggningar. Framtida tillämpning av detta arbete kommer att hjälpa att förstå mekanismerna för skydd mot värmespännings komplikationer och karakterisera de nya förfarandena för skydd. Denna metod är av betydelse för vägarbetare, militär personal, idrottare - grupper av människor som är i riskzonen för värmeslag under intensiv utomhus fysisk aktivitet 29. Det föreslagna tillvägagångssättet gör att man kan undersöka graden av värmestress och utvärdera olika metoder för att skydda hälsan hos personer som arbetar under extrema förhållanden.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna förklarar att de inte har några konkurrerande ekonomiska intressen.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Phosphate buffered saline (PBS) | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO | P4417 | |
| Ethyl Alcohol | Pharmco products Inc. Brookfield, CT, USA | 64-17-5 | |
| Agar | VWR | 97064-334 | |
| MacConkey agar plates | VWR | 470180-742 | |
| 5% blood agar plates | VWR | 89405-024 | |
| Brucella blood agar plate with Hemin, and Vitamin K | VWR | 89405-032 | |
| Bouin’s Fixative | Electron Microscopy Sciences, Hatfield, PA, USA | 15990 | |
| IL-10 Rat ELISA kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | KRC0101 | |
| IL-1beta Rat ELISA Kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | KRC0011 | |
| IL-6 Rat ELISA Kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | KRC0061 | |
| INF-gamma Rat ELISA Kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | KRC4021 | |
| TNF-alpha Rat ELISA Kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | KRC3011 | |
| Rat LPS ELISA Kit | NeoBioLab, MA, USA | RL0275 | |
| Environmental Chamber 6020-1 | Caron, Marietta, OH, USA | 6020-1 | |
| Centrifuge | Beckman Coulter, Indianapolis, IN, USA | Optima L-90K | |
| Ultra Centrifuge | |||
| Light microscope optical system | CitoViva Technology Inc., Auburn, AL | ||
| Colony counter | Fisher Scientific , Pittsburgh, PA, USA | RE-3325 | |
| Freezer | Haier, Brooklyn, NY, USA | HCMO50LA | |
| Ultra microplate reader | Bio-Tek Instrument, Winooski, VT, USA | ELx 808 | |
| Auto Strip Washer | Bio-Tek Instrument, Winooski, VT, USA | ELx50 | |
| Pipettes | Gilson, Pipetman, France | P100, P200, P1000 | |
| C24 Incubator Shaker | New Brunswick Scientific, Enfield, CT, USA | Classic C24 | |
| Rocking Shaker | Reliable Scientific, Inc., Nesbit, MS, USA | 55 | |
| Petri dishes | Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, USA | 875713 | 100 mm x 15 mm |
| SterilGard III Advance | The Baker Company, Sanford, ME, USA | SG403 | |
| Culture Growing Flasks | Corning Incorporated, Corning, NY, USA | 4995 | PYREX 250 ml Erlenmeyer flasks |
| Optical Spectrometer Genesys 20 | Thermo Scientific, Waltham, MA, USA. | 4001 | |
| Sony DXC-33 Video camera | Sony | ||
| Richardson test slide | Electron Microscopy Science, Hatfield, PA, USA | 80303 | |
| Millipore water purification system | Millipore | Direct-Q | |
| Image-Pro Plus software | Media Cybernetics, MD, USA | ||
| Triple Beam Balance | OHAUS Corporation, Parsippany, NJ, USA | ||
| Tissue Homogenizer, Dounce | VWR | 71000-518 |
References
- Crandall, C. G., Gonzalez-Alonso, J.
- Lambert, G. P. Role of gastrointestinal permeability in exertional heatstroke. Exerc. Sport Sci. Rev. 32, 185-190 (2004).
- Yu, J., et al. Effect of heat stress on the porcine small intestine: A morphological and gene expression study. Comp. Biochem. Physiol. A-Mol. Integr. Physiol. 156, 119-128 (2010).
- Moseley, P. L., Gisolfi, C. V. New Frontiers in Thermoregulation and Exercise. Sports Med. 16, 163-167 (1993).
- Lambert, G. P. Stress-induced gastrointestinal barrier dysfunction and its inflammatory effects. J. Anim. Sci. 87, 101-108 (2009).
- Berg, A., Muller, H. M., Rathmann, S., Deibert, P. The gastrointestinal system - An essential target organ of the athlete's health and physical performance. Exerc. Immunol. Rev. 5, 78-95 (1999).
- Khan, M. W., et al. Microbes, intestinal inflammation and probiotics. Expert Rev Gastroent. 6, 81-94 (2012).
- Quigley, E. M. M. Prebiotics and Probiotics: Their Role in the Management of Gastrointestinal Disorders in Adults. Nutr Clin Pract. 27, 195-200 (2012).
- Gore, C., et al. Treatment and secondary prevention effects of the probiotics Lactobacillus paracasei or Bifidobacterium lactis on early infant eczema: randomized controlled trial with follow-up until age 3 years. Clin Exp Allergy. 42, 112-122 (2012).
- Gomes, A. C., Bueno, A. A., de Souza, R. G. M., Mota, J. F. Gut microbiota, probiotics and diabetes. Nutr. J. 13, (2014).
- Eutamene, H., et al. Synergy between Lactobacillus paracasei and its bacterial products to counteract stress-induced gut permeability and sensitivity increase in rats. J. Nutr. 137, 1901-1907 (2007).
- Ait-Belgnaoui, A., et al. Lactobacillus farciminis treatment attenuates stress-induced overexpression of Fos protein in spinal and supraspinal sites after colorectal distension in rats. Neurogastroenterol. Motil. 21, 585-593 (2009).
- Fujiya, M., et al. The Bacillus subtilis quorum-sensing molecule CSF contributes to intestinal Homeostasis via OCTN2, a host cell membrane transporter. Cell Host Microbe. 1, 299-308 (2007).
- Cutting, S. M.
- Pinchuk, I. V., et al. In vitro anti-Helicobacter pylori activity of the probiotic strain Bacillus subtilis 3 is due to secretion of antibiotics. Antimicrob Agents Ch. 45, 3156-3161 (2001).
- Sorokulova, I. B., Kirik, D. L., Pinchuk, I. V.
- Gracheva, N. M., et al. The efficacy of the new bacterial preparation biosporin in treating acute intestinal infections. Zh Mikrobiol Epidemiol Immunobiol. , 75-77 (1996).
- Horosheva, T. V., Vodyanoy, V., Sorokulova, I. Efficacy of Bacillus probiotics in prevention of antibiotic-associated diarrhoea: a randomized, double-blind, placebo-controlled clinical trial. JMM Case Report. 1, (2014).
- Sorokulova, I. B., Krumnow, A. A., Pathirana, S., Mandell, A. J., Vodyanoy, V. Novel Methods for Storage Stability and Release of Bacillus Spores. Biotechnol. Prog. 24, 1147-1153 (2008).
- Vogel, H. G., Vogel, W. H. Drug Discovery and Evaluation: Pharmacological Assays. eds H.G. Vogel & W.H. Vogel. Vogel, H. G., Vogel, W. H. , 658-659 (1997).
- Bailey, M. T., Engler, H., Sheridan, J. F. Stress induces the translocation of cutaneous and gastrointestinal microflora to secondary lymphoid organs of C57BL/6 mice. J. Neuroimmunol. 171, 29-37 (2006).
- Rakoff-Nahoum, S., Paglino, J., Eslami-Varzaneh, F., Edberg, S., Medzhitov, R. Recognition of commensal microflora by toll-like receptors is required for intestinal homeostasis. Cell. 118, 229-241 (2004).
- Leon, L. R., Blaha, M. D., DuBose, D. A. Time course of cytokine, corticosterone, and tissue injury responses in mice during heat strain recovery. J. Appl. Physiol. 100, 1400-1409 (2006).
- Ribeiro, S. R., et al. Weight loss and morphometric study of intestinal mucosa in rats after massive intestinal resection. Influence of a glutamine-enriched diet. Rev. Hosp. Clìn. Fac. Med. S. Paulo. 59, 349-356 (2004).
- Vainrub, A., Pustovyy, O., Vodyanoy, V. Resolution of 90 nm (lambda/5) in an optical transmission microscope with an annular condenser. Opt Lett. 31, 2855-2857 (2006).
- Moore, T., Globa, L., Pustovyy, O., Vodyanoy, V., Sorokulova, I. Oral administration of Bacillus subtilis strain BSB3 can prevent heat stress-related adverse effects in rats. J Appl Microbiol. 117, 1463-1471 (2014).
- Richardson, T. M. Test slides: Diatoms to divisions-What are you looking at. Proc Roy Microsc Soc. 22, 3-9 (1988).
- Moore, T., Sorokulova, I., Pustovyy, O., Globa, L., Vodyanoy, V. Microscopic evaluation of vesicles shed by rat erythrocytes at elevated temperatures. J Therm Biol. 38, 487-492 (2013).
- Leon, L. R., Helwig, B. G. Heat stroke: Role of the systemic inflammatory response. J. Appl. Physiol. 109, 1980-1988 (2010).
- Kumar, Y., Chawla, A., Tatu, U. Heat Shock Protein 70 as a Biomarker of Heat Stress in a Simulated Hot Cockpit. Aviat Space Env Med. 74 (7), 711-716 (2007).
