Summary
המתוארים כאן הם orthotopic השתלת השחלות פרוטוקולים עבור שינוי השחלות השפעה על הפיזיולוגיה של העכבר הנמען. הליך כירורגי זה משמש כדי לחשוף עכברים הנשי לסוגים שונים של השחלות השפעה והוא עשוי לכלול heterochronic השתלות והשתלות השחלות שעברו טיפולים שונים ex-vivo .
Abstract
השתלת השחלות נערך לראשונה באוניברסיטת יוטה בשנת 1963. עבודה עדכנית יותר, משמש heterochronic השתלת השחלות יונקים לחקור את ההשפעות בריאות-מגן צעיר השחלות אצל נקבות צעירות. ההליכים הנוכחי מעסיקים שיטת השתלת orthotopic, איפה השחלות allogenic מושתלים בחזרה למיקום המקורי שלהם ב בורסה השחלות. זאת בניגוד השתלת הטרוטופי הנפוצות של רקמת השחלה/השחלות subcutaneously או מתחת הקפסולה כליות. כל המיקומים שלושה לספק revascularization יעיל של רקמות המושתלים. עם זאת, השתלת orthotopic מספק את השחלה עם הסביבה הטבעית ביותר איתות והוא ההליך היחיד המספק את ההזדמנות לבעל החיים להתרבות באופן טבעי וכאב לאחר הניתוח. אחד צריך לדאוג כדי להסיר את כל רקמת השחלה אנדוגני במהלך ההליך ovariectomy. אם כל רקמות אנדוגני תישאר או אם רק שחלה אחת יוסר, הרקמה המושתלים יישאר רדום עד הרקמה הקיימת הופך senescent. בעוד revascularization של השחלות המושתלים מתרחשת במהירות רבה, מושתלי יכול לקחת כמות ניכרת של זמן להסתגל ציר חדש ההיפותלמוס/יותרת המוח/האשכים/בלוטת יותרת הכליה (HPG/א) איתות המשטר המשויך המושתלים רקמות. זה בדרך כלל לוקח בערך 100 ימים בתוך העכבר. לכן, צריך להיות מתוכנן השתלת ניסויים כדי להכיל את תקופת הסתגלות זו. תוצאות טיפוסי עם השתלת השחלות יכלול שינויים הבריאות של המטופל המשקפים את הגיל של השחלה המושתלים, ולא את הגיל הכרונולוגי של הנמען.
Introduction
ההשפעה של רבייה על הבריאות ועל תוחלת החיים היא לעתים קרובות בטעות חשבתי כמו מוגבלת רק על התקופה המקיף כשירות הרבייה. בעוד אורח החיים ואת פנוטיפים המשויך השלב reproductively המוסמכת של אורך החיים נבדלים בקלות שלבי קדם ו- postreproductive, מצב הרבייה משפיע על בריאותו לאורך כל שלבי תוחלת החיים. תקופת הרבייה כשירות הוא המכונה לעתים קרובות תוחלת החיים הרבייה, להבדיל עצמה מן תוחלת החיים בסדר כרונולוגי. זה המינוח הוא משאיל את עצמו ההפרדה המלאכותית בין שני וכינוים תוחלת החיים כאשר במציאות, שניהם אחד המשפיעים על קשר הדוק קשורים אחד לשני עם אירועים, לעתים קרובות יותר מאשר לא, להשפיע על השני גם כן.
ראיות בעשור האחרון מציין מצב הרבייה של הפרט הוא קשור עם סיכון מוגבר לפתח בריאות כרוניות תנאים1. מחקר אחד תיעד שיוך בין תוחלת חיים קצרה יותר וכישלון הרבייה עבור קבוצה של גברים2. האגודה הוא בולט יותר אצל נשים. מחלות לב וכלי דם נדירה בקרב נשים בגיל המעבר3, אך שחלות מגביר למחלות לב וכלי דם בחדות גיל המעבר4 , בנשים צעירות עם שחלות מוקדמת5. 6 עמידות לאינסולין וירידה עצם להגדיל ב גיל המעבר7 , כמעט שני שלישים של האמריקאים עם מחלת אלצהיימר הן נשים8. מוגדר היטב לשינויים איתות השחלות לסמן המעבר ממצב בגיל המעבר, מחלות עמידים, מצב לאחר גיל המעבר, מחלות-נטל. המעבר הזה יציב, מציג הזדמנות לזהות מנגנונים להאיץ את הסיכונים מחלת הזדקנות.
לאחרונה, השתלת רקמת השחלה cryopreserved שימש כדי לשחזר את פוריות אצל נשים שעוברים פרוצדורות רפואיות אשר עלולים לסכן את תאי השורה נבט, כגון כימותרפיה. השתלת רקמת השחלה יכול לשמש גם כדי לייצר צאצאים קיימא בבעלי חיים ללא השחלות פוריות מבוסס, כולל העכברים הטרנסגניים9. השתלת השחלות הוא שיטה יעילה כדי להפריד בין ההשפעה של תפקוד הרבייה או הרבייה הזדקנות כרונולוגית להזדקן כשלעצמה.
תפקיד הדמות התומכת ומבוססת על הורמוני השחלה בהיבטים רבים של נשים בריאות מרמז על אובדן ייצור הורמון ממנו באופן פעיל בתאי הנבט, כגורם העיקרי של סיכון מוגבר למחלה-גיל המעבר. אמנם הערך של הורמוני השחלה בבריאות נשים מעורערים, החלפת הורמונים אלה פרי - ו נשים לאחר גיל המעבר כבר לא אמין שיחזור של היתרונות הבריאותיים נהנו נשים צעירות עם השחלות צעירים. אלה היתרונות הבריאותיים משוחזרים באופן אמין על ידי השתלת heterochronic של השחלות צעיר עכברים הנשי postreproductive10,11,12,13,14.
מצב הרבייה של עכברים התורם והן הנמען צריך להיקבע לפני ואחרי השתלת או פרוצדורות ovariectomy. עכברים postreproductive הרב, שעורר המציגים סימני קלט האשכים לפני הניתוח-בגיל 12 חודשים אינם נכללים ניסויים אלה. קלט האשכים נקבעת על ידי ציטולוגיה הנרתיק. נתונים על הנרתיק ציטולוגיה נאספים לניתוח מראש לפחות 10 ימים רצופים להבטיח מדינה postreproductive בעכברים הנמען באופן פעיל-רכיבה על אופניים השחלות בעכברים התורם. אחד estrous מחזור המוגדר כ התקופה מיום nucleated לתאי האפיתל מופיעים תחילה (קרי, proestrus) ליום שלפני ההופעה הבאה של nucleated בתאי אפיתל השמצות הנרתיק, בתנאי שלא קיים תקופה של נוסחת לייקוציטים נוכחות (קרי, diestrus) שביניהם. ייחום נקבעת על ידי הנוכחות של תאי אפיתל גדול, קשקש, של או בלי גרעינים. עכברים זה להציג שום פעילות מחזורית לתקופה 10 יום לפני או אחרי הניתוח נחושים יש קלט האשכים עבור התקופה האמורה. עכברים זה להציג ייחום מלא אחד לפחות בתקופה 10 יום לפני או אחרי הניתוח נקבע שיש האשכים קלט עבור התקופה האמורה. עכברים הנשי צריך להיות שוכן בנוכחות עכברים זכרים או נחשפים מצעים המלוכלכים מהכלוב של הזכר כדי להבטיח עקביות חשיפה לגירויים בתדר מחזור.
הליכים אלה השתלת מוכשרות באופן היעיל ביותר עם שני מנתחים לעבוד בו זמנית על התורם ועכברים הנמען. עם זאת, ההליכים מוכשרות בקלות על ידי רופא מנתח אחד עם השחלות תורם לרוב התאושש לפני תחילת ההליך ovariectomy על העכבר הנמען. פרוטוקול זה מתאר את ההליך עבור המנתח יחיד. חשיפה של מערכת הרבייה, סגירת האתר נעשה בדרך כלל ללא מיקרוסקופ, ואילו הסרה והחלפה של השחלות מתבצעת תחת מיקרוסקופ. עם למידה בכל הליך כירורגי, אתרי החתך עשוי להיות גדול יותר, ניתוחים עשויים להימשך זמן רב יותר תוך ההליך למידה הראשון, יהיה בדרך כלל ירידה עם ניסיון.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
כל השיטות המתוארות כאן פותחו תחת המועצה הלאומית למחקר הנחיות למצוא במדריך על טיפוח ועל שימוש של חיות מעבדה, אושרו על ידי יוטה המדינה אוניברסיטת מוסדיים חיה על עצמך ועל שימוש הוועדה.
הערה: ההליכים השתלת השחלות עשויה להיות כרוכה עכברים (זן כקבוצת/J) מ- 21 יום של גיל עד גיל 18 חודשים. עכברים של המתח כקבוצת/J להפוך reproductively המוסמכת בין 45 ל- 60 ימים של גיל reproductively senescent בגיל 10 ו- 12 חודשים.
1. השתלת השחלות תקין לעכברים בגילאי
הערה: הפרוטוקול הראשון מתאר את ההליך בשימוש במהלך העברת השחלות של עכבר צעיר (של גיל 60 ימים) כדי postreproductive הנקבה (12 חודשים של גיל) המתח באותה המפגרים. אותו הנוהל משמש עבור השתלת השחלות בין כל שני עכברים הנשי.
- שוקל, עזים ומתנגד החיה התורמים מאת בקרום הבטן (I.P., המחט ga 27) זריקה, לדוגמה באמצעות קוקטייל של קטמין, חריגות השירותים הווטרינריים, איזופרומאזין (65 מ"ג/ק"ג קטמין, חריגות השירותים הווטרינריים 13 מ"ג/ק"ג 2.0 mg/kg, איזופרומאזין; מנה קוקטייל - 6.5 ml/kg). להחזיר את החיה לכלוב הביתה מחוממת עד ההרדמה יתחיל להשפיע.
- ברגע מרדימים, הסר את החיה הכלוב הביתה והמקום על מגבות נייר מחוממת. באמצעות הסרה (העדיפו להבים #40), קוצץ שיער מ מ כמה לרוחב על קו האמצע בכל צד, מתחילים ממש מתחת לצלעות, זז רחוק, הכנת החתוכים של 'תיקון' כ 2-3 ס מ מרובע משני צדדיו של העכבר נוטה להשאיר רצועת שיער כ 1-2 ס מ מכסה את קו האמצע.
- בקלילות לנגב את האזורים החתוכים עם 70% אתנול, להחיל פתרון betadine אתר החתוכים עם אוזניים.
- החלת ג'ל לאנטיביוטיקה הגנה העין ולפקח meloxicam (2.0 mg/kg) subcutaneously (ספורטינג, המחט ga 27) על הפן הלטראלי של הצוואר של החיה לשיכוך כאבים לאחר הניתוח.
- למקם את החיה שכיבה על שדה מחוממת כירורגי סטרילי, לנגב את האזור החתוכים עם גזה צמר גפן ספוג אתנול 2 ס"מ על 2 ס"מ 70%.
- עושים חתך paralumbar 1.0-1.5 ס"מ ומנתחים שמותחת את העור מפני fascia המשמש כבסיס. לעשות חיתוך נוסף דרך fascia. בלשון בוטה לנתח רוחבית מתחת זה fascia שטחי ככל האפשר עד שהגיע הבטני
- מקום קטן תלוי כירורגי על החתך (לחתוך מ- 2 ס"מ על 2 ס"מ גזה) ועל רטוב הכיסוי ותאבטחי עם סליין סטרילי.
- באמצעות מלקחיים קטנים, לאתר את רקמת שומן המקיף את השחלה בחלל הבטן, בעדינות לחלץ את fat pad ו השחלה ומניחים אותו על הכיסוי ותאבטחי גזה שנרטבו. כרית השומן השחלות יופיעו יותר 'לבן' מאשר רקמת שומן שמסביב.
- במקום מלחציים בולדוג 1.5 ס מ על משטח שמן (מטפל לא להפריע בורסה השחלות) להחזיק את דרכי במקום במהלך ההליך.
- להזיז את המיקרוסקופ ויבתר למקומו, לזהות בבירור בורסה השחלות. ולהיאחז בורסה בעזרת מלקחיים שען שני, פצעים וחתכים בורסה השחלות מול hilum השחלות כדי לחשוף את השחלה. אם האזור המיועד גישה של בורסה מאוד vascularized, להחיל טיפה של אפינפרין (1: 100, 000) בעזרת מזרק השטח bursal כדי להפחית את הדימום בזמן קורע.
- בעדינות להסיר את השחלה בורסה השחלות, לסלק את השחלה על ידי מחבר חובק למעקה ב hilum השחלות עם מלקחיים שען כדי למנוע דימום.
- הכנס את השחלה התורם זכוכית שעון מלא מלח סטרילית 4° C, לכסות ברפיון, להפריש עד מוכן עבור השתלת. באופן אידיאלי, המקום הזכוכית watch תחת מיקרוסקופ ויבתר נוספים כך השחלות יכול בקלות להתפס על ידי המנתח בזמנו של השתלת.
- בשלב זה, או המתת חסד, או להפריש את העכבר התורם (חייב להיות רציף פיקוח) לקבל השחלה המושתלים, רקמות, תאים או חרוז זכוכית מציין המיקום בנקודת זמן מאוחרת יותר.
- שדה נקי כירורגי, כלי נגינה, ovariectomize החיה הנמענים כמתואר לעיל. עכברים בוגרים נוטים להיות בעלי כמות מוגברת של רקמת שומן, עשוי לדרוש הרדמה מוגברת מנה (עד 20%).
- לאחר כריתה של השחלות של הנמען, מניחים חתיכה קטנה של משטח קצף hemostatic בתוך בורסה ריק הדימום, לסייע לקרישה ולמקם חתיכה קטנה של תמיסת מלח ספוג גזה מעל האתר חשוף.
- אתר של התורם שחלות (או רקמות, תאים, חרוז זכוכית מציין מיקום) עם שען מלקחיים באחד יד ולהעביר מיקרוסקופ השדה-of-view. עם מלקחיים עוד ביד הנגדית, להסיר את הגזה ולהסיר בו-זמנית משטח קצף hemostatic בורסה תוך הצבת השחלה חדש בתוך בורסה.
- אם השחלה החדש לא מתאים בתוך בורסה הנמען, לחתוך את השחלה תורם חצי (או 1/3 או 1/4), למקם את בורסה בחתיכות. אם בורסה אינה מכסה לחלוטין את השחלה כולה, מקום suture דרך בורסה, דרך השחלה, חזרה דרך בורסה להחזיק את השחלה במקום (ראו סעיף דיון).
הערה: החרוזים המקום-מחזיק כוס יכול להיות קשה להתמודד עם המלקחיים של שען. - בעת הצבת חרוז זכוכית בתוך בורסה, לאסוף החרוז עם מלקחיים גדול ושחרר משטח שמן ליד בורסה השחלות. תתקהלו החרוז בורסה.
- לאסוף בעל מחט Castroviejo כבר טעון עם מחט מחודדות, תפר monofilament 9-0 או 10-0, לאתר לקצה הקרוע של בורסה וסגור בורסה בעזרת תפרים האלסטד אחד או שניים.
הערה: תפירת לחלופין ניתן לבצע עם שען או מלקחיים קטנים אחרים. - להשקיית אתר בקלילות עם מלח סטרילית, להסיר את המלחציים שומן-pad ולחזור משטח השחלה/שומן בבטן.
- הסר את הכיסוי ותאבטחי וסגור לקיר הבטן עם 6-0 כרום הבטן או איחוי. שלב זה יכול להתבצע עם או בלי המיקרוסקופ.
- להזיז את המיקרוסקופ הצידה (אם לא עבר בשלב הקודם) וסגור את העור עם 9 מ מ פצע קליפים.
- למקם את החיה בתוך כלוב ההתאוששות מחוממת מוצל האור ונטר החיה ברציפות עד ההתאוששות מן ההרדמה. Meloxicam נוספים עשוי לשמש 24 שעות וכאב לאחר הניתוח אם צוין. הסר את הקליפים הפצע כ 9 ימים וכאב לאחר הניתוח.
הערה: אין טכניקות לדיכוי המערכת החיסונית הם מועסקים, אין עדות שתל – מול – מארח מחלות זוהה שלאחר השתלת או לאחר המוות.
2. השתלת של תא הנבט דלה השחלות לעכברים ללא פגע.
הערה: פרוטוקול זה כרוך בהעברת השחלות של עכבר צעיר, מדולדל תא נבט כדי נקבה postreproductive. ב פרוטוקול זה, הם הנמענים השחלה ונוהלי ovariectomy והשתלות לעיל למעט כי השחלות המושתלים יש כימית התרוקן תאי זקיקי הקדמוני, ראשי/נבט. הנותרים זקיקים משני ולא antral יעבור גיוס/בהכנת עוזב את השחלה חסר בתאי הנבט. תא נבט דלדול עם 4-vinylcyclohexene diepoxide (VCD) הוא תיאר היטב16. VCD הוא רעלן. בגלל השחלות שטופלו VCD להיות מושתלים עכבר שאינם מטופלים, הליך זה נהנה השחלה VCD שטופלו בעכבר אינה נחשפת ההשפעות הרעילות של VCD. פרוטוקול זה מתאר את ההליך עבור תא נבט-דלדול בעכברים השחלה-תורם צעיר.
- לדלל VCD (64 מ"ג/מ"ל) בשמן שומשום על הזרקת וחנות ב 4° C עד השימוש.
- להזריק תורמים שחלה פעם ביום עם VCD I.P. (160 מ"ג/ק"ג) במשך 15 ימים שמתחילים ב- 28 ימים של גיל. להזריק בקרת עכברים עם שמן שומשום בעקבות לוח הזמנים אותו.
- ב- 50 ימים של גיל, בדוק עכברים שטופלו VCD ו שמן בלבד-שטופלו על הפסקת הרבייה לאחר תקופת היובש במשך 10 ימים כאמור לעיל. ב- 60 יום של גיל, VCD מטופלים עכברים צריך להציג הוכחות cytological של קלט האשכים.
- להתאושש השחלות בת 60 יום עכברים והשתלת כמפורט לעיל.
- לקבוע בהצלחה השתלת השחלות מדולדל תא נבט על ידי זיהוי של חוסר רכיבה הרבייה, רמות גבוהות של מחזורי androstenedione. אנדרוגן: אסטרוגן יחסי להגדיל באופן משמעותי לאחר דלדול תא נבט עם VCD17.
- ליזום ציטולוגיה הנרתיק 10-14 ימים במשככי ולאסוף נתונים לפחות 10 ימים רצופים להבטיח קביעה מדויקת של לאחר תקופת היובש.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Ovariectomy ב- 21 ימים של גיל להימנע הגדולות למעלה-ויסות מערכת הרבייה מיד עם תחילת גיל ההתבגרות ולחסל את השפעות אחרות שבלוטת המין הנשי שיש בנוסף להשפעות ישירה של הורמוני האשכים. ירידה הרבייה בעכברים כקבוצת/J מתחילה בדרך כלל עם מחזורים לא סדיר בגיל 8-10 חודשים של גיל. בגיל 11 חודשים של גיל, שרוב הנשים בשורה זו של עכברים הגיעו נקודת כשל הרבייה15 עם אובדן מוחלט של oocytes מגיב על ידי בגיל 12 חודשים. בגילאים אלה להשתנות זנים שונים של עכברים. השתלת ovariectomy דו-צדדיים/השחלות גורמת בדרך כלל הפעלה של השחלות המושתלים בתוך ימים ספורים. כשל להסיר את שתי השחלות אנדוגני של המטופל (חמי-ovariectomy) לפני השתלת תגרום השחלה המושתלים הנותרים רדומים עד אנדוגני השחלה הנותרת יוסר. הניתוחים נערכים לרוב בשטח פתוח (exteriorizing את דרכי) ולא תחת מיקרוסקופ ויבתר (נהלים ovariectomy והשתלות).
הארכת תוחלת החיים
אורך החיים הממוצע עבור עכברים הנשי כקבוצת/J הוא 644 ימים18. עכברים נותח (המזויפים [השחלה הסרת והחלפת מיידית] או השתלת) נבחרו לחיות לפחות בניתוח. בהתאם הניסוי, זו היתה בגיל 11 עד 18 חודשים. ב הראשונית ניסויים19, ניתוחים נערכו בגיל 11 חודשים ואת דמה העכברים חיו בממוצע 728 ימים (393 ימים לאחר בניתוח) עכברים שלם לקבל השחלות חדש חיו 811 ימים (476 ימים אחרי הניתוח, GC-TX-1, איור 1). בניסוי עדכני יותר, נערכו ניתוחים בגיל 17 חודשים וחי עכברים המקבלים השחלות חדש 798 ימים (281 ימים אחרי הניתוח, GC-TX-2). עכברים שקיבלו השחלות מדולדל תא הנבט להרחיב זה יחזיק רשע 880 ימים (363 ימים וכאב לאחר הניתוח).
הארכת תוחלת בריאות
עכברים כי השחלות חדש, תא הנבט המכילים שהתקבלו מוצגות למחלות לב וכלי דם ירד משמעותית10 ו מחלות אורטופדיות11 , הפגינו שיפור משמעותי של בריאות מספר span פרמטרים. עכברים postreproductive המתקבלים חדש השחלות בגיל 12 חודשים, היו לבדיקה בגיל 16 חודשים של גיל, הדגימו ירידה sarcopenia12, שיפור בתפקוד המערכת החיסונית, כליות13, ואת התנהגות קוגניטיבית משופרת תפקוד חושי14 .
אימות של דלדול תא נבט
טיפול של עכברים כקבוצת/J נקבה בת 28 15 ימים עם VCD תוצאות דלדול של הקדמונים, ראשי (המכילות תא הנבט) זקיקים. עכברים כקבוצת/J ניתחו ב 37 ימים בלבד לאחר אתחול של הפסקת הטיפול כבר מוצגים VCD הרבייה לאחר תקופת היובש (התקרנות הנרתיק מתמיד), מופחתת משקולות השחלות (1.7 מ"ג ב שמן בלבד לעומת 0.9 מ ג ב שטופלו VCD) מתרוקנים הבראשיתי, ראשי זקיקי השחלה, בהשוואה עם פקדים (איור 2).
איור 1: השפעתה של השחלות צעיר על תוחלת החיים של נמענים postreproductive. השחלות צעיר מושתלים 11 עכברים בן חודש האריכה את תוחלת החיים ב- 11% (GC-Tx-1 n = 14, התקבל היום בן 60, תא הנבט המכילים את החדש השחלות בגיל 11 חודשים של גיל). השתלת השחלות צעיר בגיל 17 חודשים של גיל המיוצר ללא שינוי בהארכת תוחלת החיים (GC-Tx-2 n = 5, התקבל היום בן 60, תא הנבט המכילים את החדש השחלות בגיל 17 חודשים של גיל). Depleting תאי נבט של השחלות צעיר לפני השתלת הכפילה את הארכת תוחלת החיים ל 21% (GD-Tx n = 5, התקבל היום בן 60, מדולדל תא הנבט השחלות חדש בגיל 17 חודשים של גיל). גיל המוות: מ. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 2: VCD דלדול של זקיקים קטנים בעכברים כקבוצת/J. H & E שהוכתמו מקטעים (25 X) מראה שופע זקיקים קטנים (א) שטופלו שמן (n = 6) עכברים, (B) צמצום מספר זקיקים קטנים ב שטופלו VCD (n = 4) עכברים ו- (ג) והבדלים משמעותיים הבראשיתי וגם ראשי זקיק מספרים. חיצים מציינים זקיקים הקדמוני, ראשי. שגיאה ברים מייצגים SE- אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Ovariectomy והשתלת השחלות שלמים ולא מדולדל תא הנבט שנערכו בעכברים ועד 21 ימים בגיל 18 חודשים. בעת ביצוע של ovariectomy שבהם רצוי לשמור על בורסה השחלות תקין, יש לנקוט כאשר אם הרקמה bursal. בעכברים שגילן עולה על גיל שישה חודשים, הרבה בורסה הופך בשכבות עם כרית השומן, אשר מגביל את האזורים שיכול לשמש עבור גישה. במקרים אלה, לעתים קרובות יתרון כשהבנו בורסה קרוב לגבול fat pad. שיטה זו לעיתים קרובות משאיר יותר נגיש 'כיס' של רקמת bursal ' ללוות ' השחלה חדש בתוך בורסה. גישה זו ניתן גם לדרוש פחות תפירת לסגור את הרקמה bursal. סיבוב הפתיחה ב בורסה רוחבית גם יכול לעזור לשמור על השחלה חדש במקום במהלך תפירה.
לעיתים, הרקמה bursal צריך להיפתח נרחב בגלל כיסוי כרית השומן מופרז, התמצאות יוצאת דופן של דרכי או לשחזר קטעים רקמות השחלה קשה כדי לאחזר. במקרים אלה, השחלה חדש עשוי לא ביעילות להיות 'תחוב' בורסה. אם השחלה שוכן על גבי בורסה פתוח, יותר ממחצית השחלה מכוסה על ידי הרקמה bursal הנותרים, בתפר הארנק-מחרוזת ימוקם אמיד לקצה הקרוע של בורסה והוא הסמוכים השחלה. הארנק-המחרוזת לאט התהדקה, השחלה נדחף למטה לתוך בורסה הנותרים, בורסה סגורה מספיק רחוק כדי לשמור את השחלה במקום, אבל לא סגור לחלוטין. אם השחלה שוכן על ראש פתוח בורסה, פחות ממחצית השחלה מכוסה על ידי הרקמה bursal הנותרים, suture ממוקם טוב מחוץ לקצה הקרוע של בורסה בצד אחד, דרך השחלה, דרך בורסה בצד הנגדי, ומסוקסות מעל של השחלה. שיטה זו עשויה לדרוש התפרים מרובים, לא יביא כיסוי מלא של השחלה על ידי הרקמה bursal. עם זאת, שיטה זו להחזיק את השחלה במקום ולאפשר revascularization יעיל, בסופו של דבר חידוש פעילות השחלות.
בעת ביצוע של ovariectomy שבהם רצוי לשמור על בורסה השחלות תקין, יש גם לנקוט כדי להבטיח כל מרקמת השחלה אנדוגני יוסר. זה יכול להיות קשה עם השחלה גדול אנדוגני. כדי לשמר כמו רקמת bursal הרבה ככל האפשר, השחלות גדולים ניתן להסיר חתיכות. עם זאת, כאשר משתמשים בשיטה זו, תוספת דריכות צריך לשמש כדי להבטיח שכל רקמות השחלה אנדוגני יוסר. זה יכול להיות קשה לאחר הסרת חלק של השחלה, בורסה יש מלא בדם. חתיכה קטנה של משטח קצף hemostatic ניתן להציב לתוך בורסה פתוח תחסיר הדם וסיוע ב קרישת בתוך בורסה. לאחר 30-60 s, משטח קצף hemostatic מוסר ולא בורסה הוא בדק (בורסה אפשר גם לשטוף בקלות עם תמיסת מלח) לנוכחות של כל הקטעים השחלות.
השתלת השחלות דורש כי השחלה המושתלים ניתן להפריד את אספקת הדם הוקמה ו revascularization של השחלה בבית החדש שלה אינה מיידית. מסיבה זו, השחלה המושתלים עובר נמק קצת, בעיקר מעורבים זקיקים בוגר ו/או מגויסים. עם זאת, הרוב המכריע של השחלות המושתלים להציג פעילות מחזורית זמן קצר לאחר ההשתלה, קצת צירוף ימשיך מחזור עד מותו. לכן, האובדן של זקיקי עקב נמק ההשתלה לא נראה מאוד משפיעים על הקמת השילוב של השחלה המושתלים המארח החדש שלו.
התגבשה מתוך ההשקפה בתרבית של הזדקנות היא כי האסטרוגן מייצג את ההשפעה הרבייה החשוב היחיד על בריאות. השינויים הדרמטיים שנצפו בריאות ישנים עכברים שקיבלו השחלות החדש יכול לבטל בקלות כמו שחזור פשוטה של מחזורי רמות האסטרוגן. עם זאת, במחקר שנערך לאחרונה, משוכפלים באופן עצמאי על-ידי שלוש מעבדות20, 17-α-אסטרדיול לא היתה השפעה על תוחלת החיים הנשי כאשר מוזן בגיל 10 חודשים. זה בהחלט לא ההורמון אותו כמו 17-β-אסטרדיול היותר ידועים, אך רבים מתופעות הקשורות בריאות של אסטרוגן המיוחס 17-α-אסטרדיול איתות21. טיפול באסטרוגן הוכח יש השפעות חיוביות ושליליות על פתולוגיות הקשורות לגיל רבים בנשים לאחר גיל המעבר, בבירור לא מחזיק את ההשפעה זהה בנשים לאחר גיל המעבר כפי שהוא מופיע אצל נשים צעירות. בזמן ייצור אסטרוגן מגורה תא הנבט הוא קריטי עבור רבייה, על גיל המעבר, השחלות מדולדל תא הנבט עדיין בעלי תכונות מקדמת בריאות, כמו הסרת השחלות postreproductive עוד יותר מגביר את שיעורי התמותה, כולל מחלות הקשורות לגיל22. עכברים ovariectomized יש תוחלת חיים מעט קצרה יותר מאשר עכברים ניתוח דמה (715 ימים לעומת 728 ימים, בהתאמה19). אם המנגנונים המשפיעים על אריכות ימים אבולוציונית נשמרים, ראיות של אורגניזמים דגם טוען נגד הסבר אסטרוגן בלבד עבור בריאות span סיומת ביונקים.
השתלת השחלות עם ובלי פעיל בתאי הנבט שיחזר יתרונות בריאותיים לרמה נאבקה להשיג טיפול הורמונלי לבד. היבטים רבים של בריאות, אשר מושפעים לרעה על ידי הזדקנות אצל נקבות, יכול להיות מושפע באופן חיובי על ידי הקמתה מחדש של תפקוד השחלות פעיל בעכברים בגילאי. עם זאת, מחקרים שנעשו לאחרונה פיילוט מראים כי תופעות אלו עשוי להיות, במידה מסוימת, עצמאית של הורמוני השחלה תא הנבט.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
המחברים אין לחשוף.
Acknowledgments
מחקר דיווח בפרסום זה נתמך על ידי תרומה נדיבה של עכברים כקבוצת נקבה בת 14 חודשים מן המכון הלאומי לזיקנה, מכרסם בני המושבה (ננסי Nadon) על ידי אוניברסיטת מדינת יוטה, בית הספר לרפואה וטרינרית, המחלקה לחקר בעלי חיים, מוצרי חלב ומדעי וטרינרי.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Dissecting microscope | Any dissecting scope with an adjustable working distance. | ||
| Warm Water Recirculator and appropriate pad for your size surgical/recovery field. | Stryker/Gaymar | TP700 | Circulating water pads produce even and consistent temperature operating and recovery fields. |
| Surgical instruments-dissection instruments for access to the reproductive tract | Choice of specific surgical instruments is highly surgeon-specific | ||
| Surgical instruments-fine instruments for the transplantation procedure. | Choice of specific surgical instruments is highly surgeon-specific | ||
| Suture material for abdominal wall | eSutures | G3756K: 6-0 MILD CHROMIC GUT 18" HE-7 CUTTING, DOUBLE ARMED | |
| Suture material for ovarian bursa | eSutures | 2809G: 9-0 or 2810G: 10-0 ETHILON BLACK 5" BV130-5 TAPER | 10-0 suture can be difficult to locate if dropped on the surgery field. |
| Absorbable gelatin sponge | PFIZER. | Gelfoam- PFIZER 09-0315-08. | cut into small (~2mm) pieces under sterile conditions. |
| Staples for skin closure | Becton Dickinson | MikRon Autoclip 9mm (BD 427631) | |
| Eye ointment. | MWI Veterinary Supply Co. | Puralube sterile opthalmic ointment | |
| Syringes for anesthesia, analgesia and epinephrine | MWI Veterinary Supply Co. | BD 305536 | 27g x 3/8in,Intradermal Bevel 1/2ml |
| Syringes for saline. | MWI Veterinary Supply Co. | BD 309657. | 3ml syringe, luer-lok tip, 27g needle |
| Clippers/blade | Andis | Super AGR+™ Cordless Detachable Blade Clipper and a CeramicEdge® #40 blade. | Any clippers with a fine blade. |
| Ethanol | University chemical supply | dilute to 70% for use. | |
| Betadine solution | MWI Veterinary Supply Co. | 003233 | |
| 2x2 gauze pads | MWI Veterinary Supply Co. | 003073 | autoclaved with surgery packs |
| Borosilicate glass beads | Sigma-Aldrich Co. | Z273619 | Autoclave in sintilation vials |
| 4-vinylcyclohexene diepoxide | Sigma-Aldrich Co. | 94956 | |
| Sesame oil | Sigma-Aldrich Co. | S3547 |
References
- National Institutes of Health, Eunice Kennedy Shriver National Institute of Child Health and Human Development, Fertility and Infertility Branch. 'Fertility Status as a Marker of Overall Health'. "Support studies that investigate fertility status as a marker of overall health for both men and women". New Research Priorities. , (2016).
- Eisenberg, M. L., Li, S. F., Behr, B., Cullen, M. R., Galusha, D., Lamb, D. J., Lipshultz, L. I. Semen quality, infertility and mortality in the USA. Hum. Reprod. 29 (7), 1567-1574 (2014).
- Thom, T., et al. American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee. Heart disease and stroke statistics - 2006 update - A report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee. Circulation. 113 (6), E85-E151 (2006).
- Shuster, L. T., Rhodes, D. J., Gostout, B. S., Grossardt, B. R., Rocca, W. A. Premature menopause or early menopause: Long-term health consequences. Maturitas. 65 (2), 161-166 (2010).
- Jacobsen, B. K., Knutsen, S. F., Fraser, G. E. Age at natural menopause and total mortality and mortality from ischemic heart disease: The Adventist health study. J Clin Epidemiol. 52 (4), 303-307 (1999).
- Kulaksizoglu, M., et al. Risk Factors for Diabetes Mellitus in Women with Primary Ovarian Insufficiency. Biol Trace Elem Res. 154 (3), 313-320 (2013).
- Johnell, O., Kanis, J. A. An estimate of the worldwide prevalence and disability associated with osteoporotic fractures. Osteoporos Int. 17 (12), 1726-1733 (2006).
- Rosario, E. R., Chang, L., Head, E. H., Stanczyk, F. Z., Pike, C. J. Brain levels of sex steroid hormones in men and women during normal aging and in Alzheimer's disease. Neurobiol Aging. 32 (4), 604-613 (2011).
- Cargill, S. L., Medrano, J. F., Anderson, G. B. Infertility in a line of mice with the high growth mutation is due to luteal insufficiency resulting from disruption at the hypothalamic-pituitary axis. Biol Reproduction. 61 (1), 283-287 (1999).
- Mason, J. B., et al. Transplantation of young ovaries restored cardioprotective influence in postreproductive-aged mice. Aging Cell. 10 (3), 448-456 (2011).
- Mason, J. B., Terry, B. C., Merchant, S. S., Mason, H. M., Nazokkarmaher, M. Manipulation of Ovarian Function Significantly Influenced Trabecular and Cortical Bone Volume, Architecture and Density in Mice at Death. Plos One. 10 (12), 15 (2015).
- Peterson, R. L., Parkinson, K. C., Mason, J. B. Manipulation of Ovarian Function Significantly Influenced Sarcopenia in Postreproductive-Age Mice. J. Transplant. , (2016).
- Peterson, R. L., Parkinson, K. C., Mason, J. B. Restoration of immune and renal function in aged females by re-establishment of active ovarian function. Reprod. Fertil. Dev. , (2017).
- Parkinson, K. C., Peterson, R. L., Mason, J. B. Cognitive behavior and sensory function were significantly influenced by restoration of active ovarian function in postreproductive mice. Exp. Geront. 92, 28-33 (2017).
- Cargill, S. L., Carey, J. R., Muller, H. G., Anderson, G. Age of ovary determines remaining life expectancy in old ovariectomized mice. Aging Cell. 2 (3), 185-190 (2003).
- Brooks, H. L., Pollow, D. P., Hoyer, P. B. The VCD Mouse Model of Menopause and Perimenopause for the Study of Sex Differences in Cardiovascular Disease and the Metabolic Syndrome. Physiology. 31 (4), 250-257 (2016).
- Rivera, Z., Christian, P. J., Marion, S. L., Brooks, H. L., Hoyer, P. B. Steroidogenic Capacity of Residual Ovarian Tissue in 4-Vinylcyclohexene Diepoxide-Treated Mice. Biol. Reprod. 80 (2), 328-336 (2009).
- Yuan, R., et al. Aging in inbred strains of mice: study design and interim report on median lifespans and circulating IGF1 levels. Aging Cell. 8 (3), 277-287 (2009).
- Mason, J. B., Cargill, S. L., Anderson, G. B., Carey, J. R. Transplantation of Young Ovaries to Old Mice Increased Life Span in Transplant Recipients. J. Gerontol. A Biol. Sci. Med. Sci. 64 (12), 1207-1211 (2009).
- Harrison, D. E., et al. Acarbose, 17-alpha-estradiol, and nordihydroguaiaretic acid extend mouse lifespan preferentially in males. Aging Cell. 13 (2), 273-282 (2013).
- Manay, K., et al. 17α-Estradiol Attenuates Neuron Loss in Ovariectomized Dtg AβPP/PS1 Mice. J. Alzheimers Dis. 23 (4), 629-639 (2011).
- Parker, W. H., et al. Ovarian conservation at the time of hysterectomy and long-term health outcomes in the nurses' health study. Obstet Gynecol. 113, 1027-1037 (2009).
