Summary
Denne protokol beskriver metoder til at registrere den auditive hjernestammen svar fra postnatal rotte unger. For at undersøge den funktionelle udvikling af ydre hårceller, er forsøgsmetoden af hele-celle patch klemme optagelse i isolerede ydre hårceller beskrevet trin for trin.
Abstract
Den ydre hår celle er en af de to typer af sensoriske hår celler i pattedyr cochlea. De ændrer deres celle længde med receptor potentielle til at forstærke svage vibrationer af low-level lydsignal. Morfologi og elektrofysiologiske ejendom af ydre hårceller (OHCs) udvikler sig i begyndelsen postnatal aldre. Modning af ydre hår celle kan bidrage til udviklingen af det auditive system. Processen for OHCs udvikling er imidlertid ikke godt undersøgt. Dette er dels fordi var vanskeligheden at måle deres funktion af en elektrofysiologiske tilgang. Med det formål at udvikle en enkel metode til at løse de ovenstående spørgsmål, beskrive her vi en trinvis protokol for at studere funktionen af OHCs i akut dissocierede øresneglen fra postnatal rotter. Med denne metode, kan vi evaluere de cochlear reaktion på ren tone stimuli og undersøge udtrykket niveau og funktion af motor protein prestin i OHCs. Denne metode kan også bruges til at undersøge de indre hårceller (IHCs).
Introduction
To forskellige funktioner af cochlear sensoriske hårcellerne er afgørende for pattedyr høring: mechanoelectric transduktion (MET) og electromotility1,2. Af markedsøkonomisk kanaler beliggende i til håret bundt, IHCs (IHCs) og OHCs konvertere lyd vibrationer i membranen potentielle ændringer samt de elektriske signaler innerverede spiral ganglion neuroner. OHCs ændre deres celle længde med membran potentiale og forstærke vibrationer af laveste-niveau-lyd. Denne aktivitet betegnes electromotility er afledt af den motoriske protein prestin placeret i den laterale væg af OHCs3.
I mange arter inklusive gnavere, er funktionen hørelse umodne i tidlige postnatal epoke4,5. Ingen handling potentiale i respons til lyd signaler der kunne påvises i den auditive cortex før høringen debut6,7. Udvikling af morfologi og funktion af øresneglen er blevet udbredt undersøgt i mus og ørkenrotte rotte4,5,8. Mechanotransduction og electromotility af hårcellerne er også udviklet i den tidlige liv epoke5.
For at vurdere retsmødet følsomhed af rotter på forskellige postnatal alderstrin, har vi udviklet en metode til auditive hjernestammen svar (ABR) optagelse i rotte unger. Hele-celle patch klemme er en ideel teknologi til at undersøge OHCs electrophysiologically. Men sammenlignet med patch klemme udført i neuroner og andre epitelceller, den lave udnyttelsesgrad for hele-celle forsegling begrænset undersøgelsen af electromotility af isolerede OHCs.
Her beskriver vi en metode til at undersøge OHCs morfologisk og electrophysiologically i akut dissocierede øresneglen fra postnatal rotter. Denne metode kan ændres for at studere de molekylære mekanismer, der regulerer inderste hår celle udvikling og funktion.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle eksperimentelle protokoller der involverer dyrs emner blev godkendt af dyr etiske komité i den sydlige medicinske universitet.
1. Forbered løsninger for eksperimenter
- Forberede narkose (Se Tabel af materialer): 1,5% pentobarbital natrium opløst i ddH2O.
- Forberede dissektion løsning (Se Tabel af materialer): opløses en taske af Leiboviz's L-15 pulver i 1 L i ddH2O. Juster pH til 7,3 med 1 M NaOH. Justere osmolaritet til 300-330 mOsm ved hjælp af en osmometer og 10 mM HEPES før brug.
- Opløs 2 mg/mL collagenase IV (Se Tabel af materialer) i dissektion rengøringsopløsning i trin 1.2.
- Forberede immunfarvning løsninger (Se Tabel af materialer): opløses 4% PARAFORMALDEHYD i fosfatbufferet saltopløsning (PBS).
Forsigtig: PARAFORMALDEHYD er giftige; bær passende beskyttelse. - Fortynd 0,3% permeabilitet agent i PBS. Fortyndet 10% normal ged serum i PBS som den blokerende buffer. Fortynd prestin antistof 1:200 i blokerende buffer. Fortynd Alexa488-konjugeret antistof 1:600 i blokerende buffer. Fortynd Phalloidin-Tetramethylrhodamine B isothiocyanat 1:200 i PBS.
- Forberede den ekstracellulære løsning (Se Tabel af materialer): forberede den Leiboviz L-15 medium som beskrevet ovenfor (trin 1.2).
- Forberede den intracellulære løsning (Se Tabel af materialer).
2. ABR optagelse
Bemærk: ABR optagelse har været tidligere beskrevet i detaljer i vores tidligere undersøgelse9.
- Bedøver Sprague Dawley (SD) rotter (1-14 dage gamle hvalpe og 2 - måneder gamle voksne, begge køn) med en enkelt injektion af 1,5% natrium pentobarbital (22 mg/kg for hvalpe og 30 mg/kg for voksne, intraperitoneal (i.p.)).
- Placer de bedøvede dyr i en polyethylen-skum skimmel til at immobilisere dyrets krop. Placere dyret på en Vibrationsdæmpende tabel i en lyd-formildende værelse. Holde dyrets kropstemperatur på 37,5 ° C med en varmepude.
- Tør området hoved med ethanol 70% (vol/vol). Ved hjælp af et fin saks, gøre en 1-2 mm snit ventrolaterale til den eksterne toppunkt at placere referenceelektrode eller jorden. En subdermal nål elektrode (optagelse elektrode) er placeret over kraniet vertex (figur 1A).
- Ved hjælp af funktionsgenerator, generere kalibreret tone byger (1 ms stigning/fald, 3 ms plateau) af forskellige frekvenser (2, 4, 8, 16, 24 og 32 kHz) og intensitet (reduceret fra 85 til 10 dB SPL i 5 dB trin). Variere frekvens og amplitude manuelt eller ved hjælp af en computer. Levere lyd stimuli gennem en elektrostatisk højttaler placeret 10 cm væk mod lederen af dyr.
- Filtrere (100-1.000 Hz), forstærke og gennemsnitlig (256 gange) den sund elicited potentiale ved hjælp af en multi-funktion processor til at få ABRs. ABR spor overvåges online og gemt offline analyse. Det tager ca 40 min til at fuldføre ABR optagelse fra et dyr.
Bemærk: Normalt tre til syv tinder (vinker jeg til bølge VII) med ventetid mindre end 15 ms kan være identificeret (figur 1B). ABR tærskel er defineret som minimum lydniveauet på hvilke bølge I og II kunne påvises. - Aflive før dyrene vågne fra anæstesi (med en intraperitoneal injektion af 0,3 mL 1,5% natrium pentobarbital).
3. Organ under Corti (OC) dissektionen
- Bedøver rotte unger. For rotter mindre end 6 dage gamle (< P6), holde dyret i en 100 mm kultur fad og Dæk fadet med isbad i 10 min. For rotter > P6, bedøver dyret med en enkelt injektion af 1,5% natrium pentobarbital (22 mg/kg, i.p.). Halshugge rotte unger efter anæstesi.
- Sterilisere hovedet ved sprøjtning med 70% (vol/vol) ethanol.
- Åbne kraniet langs sagittal midterlinjen med saks; fjerne hjernen for at udsætte det indre øre.
- Overføre det indre øre til en 35-mm petriskål fyldt med 3 mL iskold L-15 (figur 2A).
- Mikroskopet dissektion bruge fine pincet til at fjerne den benede kapsel af cochlea (figur 2B).
- Unwrap OC og tilhørende stria vascularis (SV) fra modiolus.
- Ved at holde den basale del af SV med pincet, adskille OC fra SV helt ved afvikling langsomt fra base til apex (fig. 2 c).
- Skåret OC jævnt i tre stykker ved hjælp af fine saks (figur 2D).
4. immunofluorescens farvning
- Ved hjælp af en 200 µL pipette tip, overføre segmenter af OC (trin 3.8) på et glas dias og fix med 100 µL af 4% PARAFORMALDEHYD i mindst 4 timer ved 4 ° C.
Forsigtig: PARAFORMALDEHYD er giftige; bær passende beskyttelse. - Vask væv af fortrænger PARAFORMALDEHYD med 100 µL af frisk PBS. Vask væv tre gange i 10 min.
- Inkuber væv med 0,3% permeabilitet agent i PBS i 30 min. ved stuetemperatur.
- Kassér permeabilitet agent i PBS og vaske væv tre gange med PBS.
- Blokere med 10% normalt ged serum i PBS i 1 time ved stuetemperatur.
- Inkuber med anti-prestin-C-terminus antistof (1:200) i blokerende løsning i 2 timer ved stuetemperatur eller ved 4 ° C natten over.
- Vaskes tre gange med PBS i 5 min.
- Der inkuberes med Alexa488-konjugeret sekundære antistoffer (1:600) i blokerende løsning i 1 time ved stuetemperatur i mørke.
- Vaskes tre gange med PBS i 5 min. i mørke.
- Der inkuberes med rodamin-phalloidin (1:200) i 10 min ved stuetemperatur i mørke.
- Vaskes tre gange med PBS i 5 min. i mørke.
- Monteres på et glas dias med montering medium (indeholdende DAPI). Billede med konfokalmikroskopi ved hjælp af 405 nm, 488 nm og 594 nm lasere. Indstille laser effekt på 0,1-0,5 mW og scan hastighed på 0,5 ramme/s.
5. Patch klemme optagelse af isolerede OHCs
- Bruge pipette aftrækker og mikro-forfalskeren at få patch pipettes med en diameter på tip 2-3 µm. ryg-fill pipetter med intracellulære løsning. Normalt, var den indledende modstand af patch pipette 2,5-3,5 MΩ i Bad løsning.
- Ved hjælp af en 200 µL pipette tip, skal du overføre et stykke af OC (fra trin 3.8) i en 35 mm petriskål. Fordøje væv med 100 µL af enzymatisk fordøjelsen medium (collagenase IV, se Tabel af materialer) til 5 min ved stuetemperatur.
- Fortrænge de enzymatiske fordøjelsen medium med 100 µL af L-15. Skære væv i små stykker ved hjælp af en mikro skalpel for at isolere hårceller.
- Efter blid pipettering, overføres cellerne i et hjemmelavet lille plast kammer (diameter ~ 1,5 cm) fyldt med enzym-gratis bad løsning (~ 1,5 mL, se Tabel af materialer).
- Sted i salen på scenen i en inverteret mikroskop. Find de sunde forekommende ensomme OHCs.
- Indlæse patch pipette i hovedet scenen af en 700B forstærker. Flytte patch pipette omhyggeligt af en micromanipulator, og Placer det rundt i bunden af den ydre hår celle (figur 3A).
- Hele-celle patch klemme OHC ved forsegling den laterale væg af cellen kroppen. Anvende suge, indtil cellens membran er bristet. Indstille bedriften potentiel på -70 mV. Celler med adgang modstand varierede fra 10 til 17 MΩ og membran modstand varierede fra 100 til 500 MΩ, og betragtes som et vellykket hele-celle konfiguration.
- Med computerstyring, anvende hyperpolarizing og depolariserende spænding (250 ms varighed og spænder fra −140 til +94 mV i 13 mV trin) til cellen til at fremkalde hele-celle strømninger.
- Forstærke de hele-celle strømninger, filter (hjørne hyppigheden af 5 kHz) af en 700B forstærker. Konvertere data af en 1440A converter og butik for offline analyse.
- Måle membran kapacitans af OHCs ved hjælp af en to sinuskurve spænding stimulus protokol kontrolleres af en patch klemme software. Sæt stimulate spændingsområde fra-140 til 110 mV. Gem data for offline analyse.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
ABR kan være fremkaldt fra bedøvede rotte pups ældre end postnatal dag 7 (P7) ved hjælp af ren tone byger (figur 1A). Som vist i figur 1B, opnået ABR waveforms fra rotte pups viste kun tre til fire forskellige bølger med lille amplitude. Normalt blev op til syv tinder observeret i ABR kurveformer af voksne dyr (figur 1B).
Til følgende immunfarvning og elektrofysiologiske måling, var rotte indre øre frisk dissekeret fra den tidsmæssige knoglen. Vi viser de på hinanden følgende trin af væv dissektion at isolere OC fra SV og modiolus (figur 2A-2 C). OC blev skåret i tre stykker jævnt med mikro-saks (figur 2D). For at vise morfologi af hårcellerne, blev segmenterne farves med phalloidin, prestin antistof og DAPI (figur 2E). Hår bundter (i rødt) angiver den apikale overflade af hårcellerne, mens cellen kroppen af OHCs var præget af prestin (i grønt). Kernen var mærket af DAPI (i blåt) beliggende i regionen bunden af IHCs og OHCs. Som vist i figur 2E, blev ingen prestin fundet i OHCs i cochlea på P5. Prestin blev først observeret på P7 i OHCs ligger i den basale cochlea.
Efter blid fordøjelsen var OHCs isoleret fra OC (figur 3A). Hele-celle spænding-klemme optagelser blev udført fra OHCs akut isoleret fra rotte cochlea. Et repræsentativt eksempel på det hele-celle nuværende optaget fra et isoleret P9 OHC svar på membran potentiale ændret fra −140 til +107 mV er vist i figur 3B. Bemærk venligst-V-kurven, hvilket indikerer tilstedeværelsen af KCa aktuelle der er en enestående svar af OHCs N-form-regionen. Drevet af membran spænding, intracellulære Cl- kombineret med prestin, vises som en ikke-lineær membran kapacitans (NLC) ændres under hele-celle patch klemme tilstand. Den typiske NLC af en moden OHC er karakteriseret ved klokke-formede afhængighed af membran potentiale. NLC kan være forsynet med en to-stats Boltzmann funktion og kan afspejle funktionen electromotility af OHCs. Funktionen Boltzmann for kapacitans montering er beskrevet som:
Ligningen og parametrene, der blev beskrevet i vores tidligere papir9. To repræsentant NLCs er vist i figur 3 c.
Figur 1. Auditive hjernestammen svar optagelse. (A) optagelse elektroden blev sat ind i hovedbunden mellem to ører. Jorden og reference elektroderne var placeret under den venstre og højre pinna, henholdsvis. Et åbent felt højttaler var placeret 10 cm fra den nasale spids af rotten. (B) to repræsentative ABR bølgeformer svar på 16 kHz, 80 dB SPL tone brister. Øvre spor optaget fra en P8 pup. Bunden spor optaget fra en voksen rotte. Tallene angiver de forskellige toppe af bølgeformer. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2. Organ under Corti dissektion. (A) det indre øre dissekeret fra en P9 rotte pup. Cochlea og vestibulære region er vist. (B) strukturen i cochlea blev udsat efter fjernelse af den benede væg. (C) organ under Corti (OC) og stria vascularis (SV) blev isoleret fra modiolus. (D) et organ under Corti var skåret jævnt i tre stykker. Skala barer i A-D repræsenterer 1.000 µm. (E) Konfokal billeder Vis hårcellerne beliggende inden for forskellige segmenter (basal, midterste og apikale) langs cochlea. Rodamin-phalloidin (rød) repræsenterer hår bundter beliggende på den apikale overflade af hårceller. DAPI (blå) repræsenterer atomkerner ligger i midten-nederste del af hårceller. Prestin (markeret med grønt) var kun udtrykt på den laterale væg af de ydre hårceller. For midten og basal segmenter på P7 vises kun den grønne kanal til at illustrere et udtryk for prestin i OHCs. Skalalinjen repræsenterer 20 µm. venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3. Hele-celle patch klemme optagelse af isolerede ydre hårceller. (A) en isoleret ydre hår celle var forseglet i hele-celle tilstand. Skalalinjen repræsenterer 10 µm. (B) A repræsentant I-V kurve optaget fra en P9 ydre hår celle. (C) ikke-lineære membranen kapacitans (NLC) fremstillet af to ydre hårceller på forskellige alderstrin. Kapacitans-spænding svar (open kredse) blev monteret til funktionen Boltzmann (vist som de tykke linjer). NLC var normaliseret til den tilsvarende lineære kapacitans (Clin). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
I rotter yngre end dag 11, kunne ingen aktionspotentialet i respons til lyd stimulation observeres i auditive cortex6,7. Derfor er postnatal dag 11 beskrevet som "høring debut"10. Udvikling af hørelse funktion før retsmødet debut ikke var godt undersøgt endnu. Ved hjælp af metoden svarer til voksen ABR optagelse, vi viser, at ABRs kunne være fremkaldt af ren tone brast fra rotte hvalpe yngre end P11 (figur 1). ABR waveforms fra rotte pups viste imidlertid nogle forskellige funktioner fra dem af voksne dyr. ABR-svar er små i amplitude med relativt høje tærskler. Dette resultat antyder, at det auditive system, der udvikles har lav følsomhed over for lyd signaler. Signifikant forskel blev observeret i ABR bølgeformer optaget fra rotte unger. Normalt blev op til syv tinder observeret i voksen ABR bølgeformer9. Disse toppe med forskellige latency er genereret af forskellige hjernestammen kerner langs de auditive vej11. Vores resultater viser, at kun I-IV bølgerne var påvises i ABR fra rotte unger (figur 1B). Bølgerne I og II repræsenterer svarene fra cochlea og hørenerven11. Resultaterne viser derfor, at det højere niveau auditive kerner ikke reagerer på akustiske stimuli under udvikling. Disse data tyder at cochlea reach funktionelle modenhed tidligere end det centrale auditive system. Metoden vi beskrive her er vigtige for studiet af molekylære mekanismer, der regulerer cochlea udvikling og hår celle funktion.
Høj kvalitet dissektion af OC er kritisk for yderligere eksperimenter herunder immunfarvning, Western blotting og elektrofysiologiske målinger. Disse eksperimenter er blevet udført ved hjælp af adult SD rotter og rotte hvalpe mellem 1 og 14 dage gammel. Rotte unger er ideelle til fine dissektion som cochlear knoglen er blød og let kan fjernes med pincet uden at beskadige OC. For voksne rotter er særlig forsigtighed påkrævet for at undgå brud OC mens du fjerner den hård-benede kapsel. Ved hjælp af fine pincet, kan OC og tilknyttede SV løftes fra modiolus. Den adskilte OC og SV har forskellige tekstur (figur 2 c). For rotte pups, kunne OC blive skåret i tre segmenter med en længde på 800-1200 µm. Bemærk venligst, at alle trin skal udføres i iskold L-15 så hurtigt som muligt for at minimere nedbrydning og væv forringelse.
Isolerede segmenter af OC er godt forberede immunfarvning, Western blotting og RNA analyse. Her viser vi morfologi af sensoriske hårcellerne i OC ved immunfarvning. OHCs har hår bundter på deres apikale overflade kernen har dem ligger basalt12. Motor protein prestin udtrykkes på den laterale membran af OHCs. Konfokal billeddiagnostiske data viste, at prestin først blev udtrykt på P6-P7 og udviste en fortsat stigning i den følgende uge (figur 2E). I yderligere eksperimenter, blev Western blotting og q-PCR udført for at kvantificere de observerede udtryk niveau ændringer af prestin under udvikling (data ikke vist). Fordi hårcellerne er mindretal i OC, anbefales 6 til 10 cochleae i en enkelt eksperiment at opnå robuste signaler.
For patch klemme optagelser af OHCs, blev mild enzymatisk fordøjelsen udført for at adskille OHCs. Hårcellerne er skrøbelige, og særlig forsigtighed er påkrævet på dette trin. Bruge en 200 µL pipette tip til at overføre væv og celler, adskilte. Den isolerede segment af OC blev overført til en dråbe af collagenase løsning (~ 100 µL) i en petriskål i ca 5 min ved stuetemperatur. Undgå lange fordøjelsen gange, som skader cellemembranen af OHCs. Under mikroskopet, blev sundt udseende OHCs valgt til patch klemme optagelse. Celler viser tegn på svind, hævelse, skade, eller omplantning af kernen blev udelukket fra næste eksperiment. Sund optræder ensomme OHCs og IHCs er nemme at identificere ved deres morfologisk forskel. OHCs Vis cylindrisk og en større akse-diameter-forhold, hvorimod IHCs er kolbe-formet med en stram hals12. Hele-celle patch klemme i OHCs er lidt svært fra dem i neuroner og andre epitelceller. For vellykket hele-celle konfiguration, patch pipette var som regel i nærheden af kernen, holdt væk fra den øvre laterale membran der indeholder en høj tæthed af prestin partikler (figur 3A). Når membranen var bristet, blev en to sinuskurve spænding stimulus protokol anvendt på cellen for at opnå membran kapacitansen af OHCs. Med den samme teknik, er ved hjælp af spænding trin, det muligt at fremkalde hele-celle strøm.
Denne metode er et godt redskab til at undersøge funktionen electromotility af OHCs in vitro-9,13. Denne metode kan også bruges til at undersøge funktionen af Ionkanaler, samt de farmakologiske egenskaber af receptorer i OHCs og IHCs14.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ikke noget at oplyse.
Acknowledgments
Dette arbejde blev støttet af tilskud fra den 973 Program (2014CB943002) og National Natural Science Foundation of China (11534013, 31500841).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Anesthetic | |||
| Pentobarbital sodium | Sigma | P3761 | 1.5% in water |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Dissection solution | |||
| Leiboviz's L-15 Medium | Life Technologies | 41300-039 | 1 pack in 1 L water |
| Collagenase IV | Sigma | C5138 | 2 mg/mL in L-15 |
| HEPES | Sigma | 7365-45-9 | 10 mM |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Immunostaining solutions | |||
| PBS | Thermo Fisher Scientific | 10010023 | PH 7.3 |
| Paraformaldehyde | Sigma | 158127 | 4% in PBS |
| Triton X-100 | Amresco | ZS-0694 | 0.3% in PBS |
| Normal goat serum | Thermo Fisher Scientific | 10000C | 10% in PBS |
| prestin antibody | Santa Cruz | SC-22694 | dil 1:200 |
| Alexa Fluor 488-conjugated antibody | Thermo Fisher Scientific | A-11055 | dil 1:600 |
| Phalloidin-Tetramethylrhodamine B isothiocyanate | Sigma | P1951 | dil 1:200 |
| DAPI | Solarbio | C0060 | dil 1:20 |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Extracellular solution | |||
| Leiboviz's L-15 Medium | Life Technologies | 41300-039 | 1 pack in 1 L water |
| HEPES | Sigma | 7365-45-9 | 10 mM |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Intracellular solution | |||
| CsCl | Sigma | 7647-17-8 | 140 mM |
| MgCl2 | Sigma | 7791-18-6 | 2 mM |
| EGTA | Sigma | 67-42-5 | 10 mM |
| HEPES | Sigma | 7365-45-9 | 10 mM |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Equipment | |||
| Osmometer | Gonotec | OSMOMAT 3000 basic | |
| Forcep | WPI | 14095 | Tweezers dumont |
| Micropipette puller | Sutter Instrument | MODLE-P97 | |
| Micro Forge | Narishigen | MF-830 | |
| Mini Operating System | Sutter Instrument | MP-285 | |
| MultiClamp | Axon | 700B | |
| Low-Noise Data Acquisition System | Axon | 1440A | |
| ES1 speaker | Tucker-Davis Technologies | ||
| TDT system 3 | Tucker-Davis Technologies | ||
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Software | |||
| SigGenRP software | Tucker-Davis Technologies | ||
| BioSigRP software | Tucker-Davis Technologies | ||
| jClamp | Scientific Solutions | ||
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Animal | |||
| SD rat | Experimental Animal Center of Southern Medical University |
References
- He, D. Z., Zheng, J., Kalinec, F., Sacchi Kakehata, S. S. antos-, J, Tuning in to the amazing outer hair cell: membrane wizardry with a twist and shout. J Membr Biol. 209, 119-134 (2006).
- Dallos, P. Cochlear amplification, outer hair cells and prestin. Curr Opin Neurobiol. 18, 370-376 (2008).
- Zheng, J., et al. Prestin is the motor protein of cochlear outer hair cells. Nature. 405, 149-155 (2000).
- Abe, T., et al. Developmental expression of the outer hair cell motor prestin in the mouse. J Membr Biol. 215, 49-56 (2007).
- Waguespack, J., Salles, F. T., Kachar, B., Ricci, A. J. Stepwise morphological and functional maturation of mechanotransduction in rat outer hair cells. J Neurosci. 27, 13890-13902 (2007).
- Zhang, L. I., Bao, S., Merzenich, M. M. Persistent and specific influences of early acoustic environments on primary auditory cortex. Nat Neurosci. 4, 1123 (2001).
- De, V. -S. E., Chang, E. F., Bao, S., Merzenich, M. M. Critical period window for spectral tuning defined in the primary auditory cortex (A1) in the rat. J Neurosci. 27, 180-189 (2007).
- He, D. Z., Evans, B. N., Dallos, P. First appearance and development of electromotility in neonatal gerbil outer hair cells. Hearing Res. 78, 77-90 (1994).
- Hang, J., et al. Synchronized Progression of Prestin Expression and Auditory Brainstem Response during Postnatal Development in Rats. Neural Plast. , 4545826 (2016).
- Ehret, G. Development of absolute auditory thresholds in the house mouse (Mus musculus). J Am Audiol Soc. 1, 179-184 (1976).
- Møller, A. R. Hearing:anatomy, physiology, and disorders of the auditory system. , Academic Press. Dallas. (2006).
- He, D. Z., Zheng, J., Edge, R., Dallos, P. Isolation of cochlear inner hair cells. Hearing Res. 145, 156-160 (2000).
- Tang, J., Pecka, J. L., Tan, X., Beisel, K. W., He, D. Z. Z. Engineered Pendrin Protein, an Anion Transporter and Molecular Motor. J Biological Chem. 286, 31014-31021 (2011).
- Fu, M., et al. The Effects of Urethane on Rat Outer Hair Cells. Neural Plast. 2016, 1-11 (2016).
