Modello murino aspirazione orofaringea di polmonite batterica associata a ventilazione e acquisite in ospedale

Sommario

Polmonite infettiva è tra le più comuni infezioni nell'uomo. Un modello appropriato in vivo è fondamentale per comprendere la patogenesi della malattia e dell'efficacia di nuove terapie. Con questo modello di polmonite di aspirazione orofaringea murino, si può esaminare la patogenesi ed i nuovi trattamenti contro queste infezioni mortali.

Abstract

Modelli murini di infezione sono fondamentali per comprendere la patogenesi della malattia e dell'efficacia di approcci terapeutici progettati per combattere gli agenti patogeni causativi. Polmonite infettiva è tra le più comuni infezioni presentate dai pazienti nella clinica e garantisce così un modello appropriato in vivo . Polmonite tipica modelli utilizzano inoculazione intranasale, che depositi eccessivi organismi di fuori del polmone, causando complicazioni fuori bersaglio e sintomi, come la sinusite, gastrite, enterite, trauma fisico o microparticella di nebbia per imitare aerosol diffusione più tipica di polmonite virale, tubercolotica o da fungo. Questi modelli non riflettono accuratamente la patogenesi di polmonite batterica tipica di comunità o assistenza sanitaria acquistata. Al contrario, questo modello murino di polmonite di aspirazione orofaringea imita l'itinerario della gocciolina in polmonite acquisita in assistenza sanitaria. Inoculando 50 µ l di batteri sospensione nell'orofaringe dei topi anestetizzati causa aspirazione riflessivo, che si traduce in polmonite. Con questo modello, si può esaminare la patogenesi degli agenti patogeni che causano polmonite e nuovi trattamenti per combattere queste malattie.

Introduzione

Infezione respiratoria più bassa è la malattia infettiva più mortale del mondo e la più comune causa di morte nei paesi in via di sviluppo¹. Globalmente, queste infezioni rappresentano più di 3,2 milioni di morti nel¹. Inoltre, polmonite nosocomiale è tra le forme più comuni e più mortale delle infezioni acquisite assistenza sanitaria ed è causata da agenti patogeni più resistenti agli antibiotici^2,3. Il tipico percorso di acquisizione di polmonite batterica per entrambi acquisita in comunità e polmonite nosocomiale è l'aspirazione orofaringea contenuto negli alv....

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono gli animali devono essere approvate dal ricercatore istituzionale Animal Care ed uso Committee (IACUC).

1. preparazione dell'inoculo batterico

1. Isolare le colonie batteriche.
   1. Striscia un ceppo batterico (ad es., a. baumannii "HUMC1") su appropriato sterile agar (ad es., agar soia triptico), facendo attenzione a generare colonie isolate.
   2. Incubare a condizioni appropriate (ad esempio, durante la notte a 37 ° C).
2. Far crescere cultura durante la notte.
   1. Selezionare un rappresentante, Colonia isolata dalla piastra di a....

Risultati

Seguendo scrupolosamente il protocollo, riproducibili e affidabili dati possono essere facilmente ottenuti. È fondamentale rispettare rigorosamente di uno protocollo di preparazione dell'inoculo su misura per esperimenti per essere paragonato a una vicenda. Inoltre è importante gestire correttamente topi durante la procedura di infezione. Assicurarsi di posizionare i topi in una camera di anestesia privo di isoflurane. Topi panico se vengono inseriti in una camera che è stato pre-riempita.......

Discussione

Per essere sicuri, topi non sono esseri umani in miniatura. Risultati ottenuti da modelli murini devono essere considerati nel contesto e successivamente interpretati per applicabilità agli esseri umani, basata su differenze e similitudini tra le due specie⁶. È anche importante scegliere il ceppo del mouse appropriato come certi sono più suscettibili di alcune infezioni rispetto ad altri; lo stesso vale per il ceppo patogeno di scelta¹⁶.

È essenz.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Agar	BD	214530	Combinare con TSB per realizzare perline TSA
135003 Kimble		vetro borosilicato	Sterilizzare mediante cottura o sterilizzazione in autoclave prima di ogni utilizzo
Becher, 250 mL	Pyrex	1003	Utilizzato durante l'aliquotazione precisa di inoculi batterici concentrati
Centrifuga	Sorvall	ST 40R	Capace di 4.000&volte; g a 4 gradi;
Camera C per anestesia	Kent Scientific Corporation	VetFlo-0720	Ospita fino a 5 topi
Cryomold, dimensioni intermedie	Sakura Tissue-Tek	4566	Stampi monouso per campioni di vinile, 15& 15&volte;
Filo interdentale	Oral-B	37000469537	Legare al perno stabile a circa 6" sopra l'altezza del tavolo
Pinze	VWR	82027-440	Utilizzato per estrarre delicatamente la lingua dalla bocca del topo
Omogeneizzatore per tessuto polmonare	Omni International	TM125-115	prima del primo utilizzo; risciacquare tra i campioni
Isoflurano per anestesia	Abbott	10015516	È possibile utilizzare farmaci alternativi; modificare la procedura di conseguenza
Cartuccia iSTAT	Abbott	03P79-25	Sono disponibili varie cartucce per soddisfare le vostre esigenze
Ketamina, 100 mg/mL	Western Medical Supply	4165	Diluire 1:10 in PBS a 1 mg/mL e combinare con xilazina a 1 mg/mL
Unguento per gli occhi	Akorn	Rinnovato Evitare	di toccare gli occhi con la punta del dosatore
Temperatura di taglio ottimale (O.C.T.) Composto	Fisher Scientific	23-730-571	Utilizzato per congelare campioni polmonari a -80 ° C per preparare il sezionamento patologico
Piastra di Petri	VWR	25384-302	Polistirene, monouso, sterilizzato, 100&volte; Soluzione
salina tamponata con fosfato (PBS)	mmCorning	21-031-CM	PBS di Dulbecco senza calcio e magnesio Puntali
pipette, 200-μ L	VWR	10017-044	Autoclave prima dell'uso
Pipetta, 200-μ L	Gilson	Pipetman P200	Autoclave e calibrare prima dell'uso
Spalmatore, cellula batterica	Bel-Art	F377360006	Sterilizzare mediante cottura o sterilizzazione in autoclave prima di ogni utilizzo
Barra di agitazione, magnetica, 7,9 mm Diametro e tempi; 38,1 mm Lunghezza	VWR	58948-150	Utilizzato per mescolare inoculi batterici concentrati durante l'aliquotazione
Piastra di agitazione,	Corning	PC-620D	Utilizzato per mescolare inoculi batterici concentrati durante l'aliquotazione
Brodo di soia triptico (TSB)	BD	211822	Combinare con l'agar per ottenere
fiala TSA, conica, sterile, 50 mL	Corning	431720	Utilizzata per la preparazione di inoculi batterici
Fiala, conica, sterile, 500 mL	Corning	431123	Utilizzata per concentrare inoculi per la preparazione di inoculi congelati
Fiala, criogenica, 2,0 mL	Corning	430659	Utilizzato per la conservazione criogenica di inoculi batterici concentrati
Xilazina, 20 mg/mL	Akorn	AnaSed Injection	Diluire 1:20 in PBS a 1 mg/mL e combinare con ketamina a 1 mg/mL

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