Qui, presentiamo le ottimizzazioni di un modello di trapianto di polmone di ratto che servono a migliorare i risultati. Forniamo una guida alle taglie per i polsini in base al peso corporeo, una strategia di misurazione per accertare il 4° spazio intercostale e metodi di chiusura della ferita e raccolta di liquidi e tessuti BAL (lavaggio broncoalveolare).
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Un modello di trapianto di polmone di ratto di ischemia calda / danno da riperfusione: ottimizzazioni per migliorare i risultati
In questo articolo
Sommario
Abstract
Dalla nostra esperienza con il trapianto di polmoni di ratto, abbiamo trovato diverse aree di miglioramento. Le informazioni nella letteratura esistente riguardanti i metodi per la scelta delle dimensioni appropriate del bracciale per la vena polmonare (PV), l'arteria polmonare (PA) o il bronco (Br) sono varie, rendendo così la determinazione della corretta dimensione della cuffia durante il trapianto di polmone di ratto un esercizio di tentativi ed errori. Standardizzando la tecnica di cuffing per utilizzare il bracciale efficace più piccolo appropriato per le dimensioni del vaso o del bronco, si può rendere la procedura di trapianto più sicura, più veloce e più efficace. Poiché i diametri di PV, PA e Br sono correlati al peso corporeo del ratto, presentiamo una strategia per scegliere una dimensione appropriata utilizzando una guida basata sul peso. Poiché il volume polmonare è anche correlato al peso corporeo, raccomandiamo che questa relazione debba essere considerata anche quando si sceglie il volume d'aria appropriato per il gonfiaggio polmonare del donatore durante l'ischemia calda e per il volume corretto di PBS da instillare durante la raccolta del liquido di lavaggio broncoalveolare (BAL). Descriviamo anche i metodi per la dissezione dello spazio intercostale 4, la chiusura della ferita e la raccolta di campioni sia dai lobi nativi che da quelli trapiantati.
Introduzione
Per oltre tre decenni, i ricercatori hanno modificato e migliorato i modelli di trapianto di polmone di ratto in modo che i dati generati siano più coerenti e riflettano maggiormente le condizioni cliniche reali. Nel tempo in cui il nostro laboratorio ha eseguito questo modello, abbiamo determinato quattro aree di miglioramento: tecniche di cuffing per anastomosi, identificazione del 4° spazio intercostale del ricevente, gonfiaggio polmonare e chiusura della ferita durante la procedura del ricevente e raccolta di campioni per l'analisi.
Le modifiche alla tecnica di cuffing per le anastomosi possono migliorare l'intera procedura d....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Protocollo
I ratti maschi di Sprague-Dawley (180-270 g di peso corporeo) sono stati acquistati commercialmente (ad esempio, Envigo) e sono stati ospitati in condizioni prive di agenti patogeni presso la Ohio State University Animal Facility. Tutte le procedure sono state eseguite umanamente secondo il NIH e la Guida del Consiglio nazionale delle ricerche per la cura umana e l'uso degli animali da laboratorio e con l'approvazione del Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali dell'Ohio State University (protocollo IACUC # 2012A00000135-R2).
1. Configurazione iniziale
- Configurare i dispositivi chirurgici.
NOTA: Questo è un int....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Risultati
Per misurare l'edema polmonare, è stato calcolato il rapporto peso umido-secco. Il lobo nativo del donatore, il lobo trapiantato e il lobo nativo del ricevente sono stati raccolti come descritto nel protocollo e pesati immediatamente per il peso umido, essiccati a 60 ° C per 48 ore e quindi pesati nuovamente per il peso secco. Un aumento del rapporto peso umido-secco sarebbe indicativo di edema polmonare. I nostri risultati indicano che il lobo trapiantato ha avuto un aumento significativo de.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
In questo rapporto, siamo intervenuti in diverse fasi critiche in un protocollo di trapianto di polmone di ratto per ottimizzare la procedura. Mentre varie tecniche di cuffing per il trapianto di polmone di ratto sono state riportate 1,2,3,4,5,6,7,8,9,15.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
BAW, YGL e JLK sono supportati attraverso la sovvenzione R01HL143000 del National Institutes of Health (NIH). BAW è supportato attraverso la sovvenzione del Dipartimento della Difesa (DOD) W81XWH1810787. SMB è supportato tramite la sovvenzione NIH R01DK123475. JM è supportato attraverso le sovvenzioni NIH AR061385, AR070752, DK106394 e AG056919, nonché dalla sovvenzione DOD W81XWH-18-1-0787.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Angiocatetere calibro 12 | BD | 382277 | |
| Angiocatetere calibro 14 | B. Braun | 4251717-02 | |
| Angiocatetere calibro 16 | B. Braun | 4252586-02 | |
| Angiocatetere calibro 18 | B. Braun | 4251679-02 | |
| Angiocatetere calibro 20 | B. Braun | 4252527-02 | |
| Sutura | in seta 4-0Specialità chirurgiche Corp. | Sutura in nylon SP116 | |
| 6-0 | AD Sutura in nylon chirurgica | S-N618R13 | |
| 7-0 Sutura in nylon | AD | Surgical S-N718SP13 | |
| 8-0 AD | Surgical | XXS-N807T6 | |
| Betadine Spray Avrio | Health LP | UPC | |
| Clippers | VWR | MSPP-023326 | |
| Castroviejo micro forbici a molla per dissezione | Roboz Surgical Instrument Co | RS-5668 | |
| Dumont #5 - Fine Forceps | Fine Science Tools | 11254-20 | |
| Elettrocauterizzazione | Macan | MV-7A | |
| Kit per intubazione endotracheale | Kent Scientific | ETI-MSE Forcipe | |
| Fine Science Tools | 11027-12 | ||
| Emostatico per zanzare di Halsted | Roboz Surgical Instrument Co | RS-7112 | |
| Heparin | Fresnius Medical Care | C504701 | |
| Siringa da insulina | Life Technologies | B328446 | |
| Isoflurane | Piramal Critical Care | NDC 66794-017-25 | |
| Tamponi di alcol isopropilico | BD | 326895 | |
| ketamina | Hikma Pharmaceuticals PLC | NDC 0413-9505-10 | |
| Dieffenbach Bulldog Clamp | World Precision Instruments | WPI14117 | |
| Porta aghi/Pinze, | Micrine | MI1542 | |
| Porta aghi/Pinze, Micrine diritte | MI1540 | ||
| Perfadex Plus (soluzione per la conservazione degli organi) | XVIVO Perfusion AB | REF# 19950 | |
| PhysioSuite | Kent Scientific | PS-MSTAT-RT | Utilizzato per controllare la SpO2 e il divaricatore del battito cardiaco |
| Roboz Surgical Instrument Co | RS-6560 | ||
| Saline | PP Pharmaceuticals LLC | NDC 63323-186-10 | |
| Forbici | Fine Science Tools | 14090-11 | |
| SomnoSuite Sistema di anestesia per piccoli animali | Kent Scientific | SS-MVG-Module | |
| sterile Garza di cotone | Fisherbrand | 22-415-469 | |
| Microscopio operatorio | Leica | M500-N con | |
| 5mL | BD | 309646 | |
| Vannas-Tubingen Forbici a molla | Strumenti per la scienza fine 15008-08 | ||
| Xilazina | Korn Pharmaceuticals Corp | NDC 59399-110-20 | |
| Yasargil Clamp | Aesculap, Inc | FT351T | Utilizzato per bloccare il bronco |
| Yasargil Clamp | Aesculap, Inc | FT261T | Utilizzato per bloccare l'ilo |
| Yasargil Clamp Applicator | Aesculap, Inc | FT484T |
Riferimenti
- Mizuta, T., Kawaguchi, A., Nakahara, K., Kawashima, Y. Simplified rat lung transplantation using a cuff technique. Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 97 (4), 578-581 (1989).
- Zhai, W., et al. Simplified rat lung tr....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
