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Articolo metodologico

Utilizzo di topi knockout Stat3 inducibili specifici per il lignaggio osteoblastico per studiare il rimodellamento dell'osso alveolare durante il movimento ortodontico dei denti

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DOI:

10.3791/65613

21 luglio 2023

* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Questo studio fornisce un protocollo per l'utilizzo di topi knockout Stat3 inducibili specifici per il lignaggio osteoblastico per studiare il rimodellamento osseo sotto la forza ortodontica e descrive i metodi per analizzare il rimodellamento dell'osso alveolare durante il movimento ortodontico dei denti, facendo così luce sulla biologia meccanica scheletrica.

Abstract

L'osso alveolare, con un alto tasso di turnover, è l'osso più attivamente rimodellante del corpo. Il movimento ortodontico dei denti (OTM) è un processo artificiale comune di rimodellamento dell'osso alveolare in risposta alla forza meccanica, ma il meccanismo sottostante rimane sfuggente. Studi precedenti non sono stati in grado di rivelare il meccanismo preciso del rimodellamento osseo in qualsiasi tempo e spazio a causa delle restrizioni relative al modello animale. Il trasduttore di segnale e attivatore della trascrizione 3 (STAT3) è importante nel metabolismo osseo, ma il suo ruolo negli osteoblasti durante l'OTM non è chiaro. Per fornire prove in vivo che STAT3 partecipa all'OTM in punti temporali specifici e in particolari cellule durante l'OTM, abbiamo generato un modello murino knockout Stat3 specifico per il lignaggio osteoblastico inducibile dal tamoxifene, applicato la forza ortodontica e analizzato il fenotipo dell'osso alveolare.

La tomografia microcomputerizzata (Micro-CT) e la stereomicroscopia sono state utilizzate per accedere alla distanza OTM. L'analisi istologica ha selezionato l'area situata all'interno di tre radici del primo molare (M1) nella sezione trasversale dell'osso mascellare come regione di interesse (ROI) per valutare l'attività metabolica degli osteoblasti e degli osteoclasti, indicando l'effetto della forza ortodontica sull'osso alveolare. In breve, forniamo un protocollo per l'utilizzo di topi knockout Stat3 inducibili per il lignaggio osteoblastico specifico per studiare il rimodellamento osseo sotto forza ortodontica e descrivere metodi per analizzare il rimodellamento osseo alveolare durante l'OTM, gettando così nuova luce sulla biologia meccanica scheletrica.

Introduzione

È generalmente noto che l'osso è sottoposto a costante ricostruzione per tutta la vita, in risposta a forze meccaniche secondo la legge di Wolff 1,2. Un'adeguata stimolazione meccanica, come la gravità e l'esercizio quotidiano, mantiene la massa ossea e la forza e previene la perdita ossea stimolando sia gli osteoblasti che gli osteoclasti. Gli osteoclasti, responsabili del riassorbimento osseo 3,4,5,6,7, e gli osteoblasti, responsabili della formazione ossea

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Protocollo

Tutti i metodi che coinvolgono gli animali qui descritti sono stati approvati dal comitato etico del Nono Ospedale del Popolo di Shanghai, Scuola di Medicina dell'Università Jiao Tong di Shanghai (n. 82101048).

1. Stabilire topi knockout Stat3 inducibili per il lignaggio osteoblastico

NOTA: I topi Stat3 fl/fl sono stati ottenuti commercialmente; il ceppo Col1α2CreERT2è stato un regalo (vedi la Tabella dei Materiali per tutti i dettagli). Per tutti gli animali sono stati forniti mangime e acqua in pellet standardizzati e condizioni am....

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Risultati

Utilizzando questo protocollo, abbiamo stabilito un modello murino knockout Stat3 inducibile specifico per il lignaggio degli osteoblasti (Stat3Col1α2ERT2) per esaminare gli effetti della delezione di STAT3 sul rimodellamento dell'osso alveolare ortodontico guidato dalla forza (Figura 1A,B). La delezione di STAT3 negli osteoblasti è stata confermata dalla colorazione in immunofluorescenza dell'osso alveolare (Figura 1C

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Discussione

Poiché la malocclusione è tra i disturbi orali più comuni che compromettono la respirazione, la masticazione, il parlare e persino l'aspetto, la domanda di ortodonzia aumenta di giorno in giorno con l'incidenza che sale dal 70% al 93% secondo una precedente indagine epidemiologica31,32. Come accelerare il rimodellamento dell'osso alveolare per aumentare l'efficienza del trattamento ortodontico in modo sicuro è diventato un argomento caldo in questo campo; pertant.......

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno conflitti di interesse da dichiarare.

Ringraziamenti

Questo lavoro è stato sostenuto in parte da sovvenzioni della National Natural Science Foundation of China (81870740, 82071083, 82271006, 82101048, 81800949); la Fondazione di Scienze Naturali di Shanghai (21ZR1436900, 22ZR1436700); il programma di Shanghai Academic/Technology Research Leader (20XD1422300); Piano di Ricerca Clinica di SHDC (SHDC2020CR4084); il Fondo di ricerca interdisciplinare del Nono Ospedale del Popolo di Shanghai, Scuola di Medicina dell'Università Jiao Tong di Shanghai (JYJC201902, JYJC202116); il team di ricerca sull'innovazione delle università locali di alto livello di Shanghai (SSMUZLCX20180501); il Fondo per la Disciplina della Ricerca n. K....

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
1x PBSPechino Solarbio Scienza & Tecnologia Co., Ltd.P1020
4% paraformaldeideWuhan Servicebio Technology Co., Ltd.G1101
Alizarina rossoSigma-AldrichA5533
Anticorpo anti-CTSKSanta Cruzsc-48353
Anticorpo anti-OPNR & D Systems, Minneapolis, MN, USAAF808
CalceinSigma-AldrichC0875
Molle elicoidali chiuseMateriali e dispositivi innovativi, Shanghai, CinaCS1006B
Col1α 2CreERT2 topiUn dono di Bin Zhou, Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences.
Dexmedetomidina cloridratoOrionintie Corporation, Orion Pharma Espoo sito
EDTABeyotime BiotechanologyST069
Serbatoi di inclusioneCitotest Labware Manufacturing Co., Ltd80106-1100-16
EtanoloSinopharm Reagente chimico Co., Ltd.
software ImageJNIH, Bethesda, MD, USA
Mezzo di montaggio con DAPIBeyotime BiotechanologyP0131
Piattaforma di dissezione del topoShanghai Huake Experimental Devices and Materials Co., Ltd.HK105
ParaffinaSangon biotech Co., Ltd.
Primer per la genotipizzazioneStat3 F-TTGACCTGTGCTCCTACAAAAA; Stat3 R-CCCTAGATTAGGCCAGCACACA; Cre F-CGATGCAACGAGTGATGAGG; Cre R-CGCATA ACCAGTGAAACAGC
Proteasi KSigma-Aldrich539480
Resina da restauro autopolimerizzante3M ESPE, St. Paul, MN, USA712-035
Stat3fl/fl miceGemPharmatech Co., LtdD000527
Kit
TRAPSigma-Aldrich387A
Tris-HClBeyotime BiotechanologyST780
Fissativo tissutale universaleWuhan Servicebio Technology Co., Ltd.G1105
XyleneSinopharm Reagente chimico Co., Ltd.
ZoletilVIRBAC 
100092183Fornitore verificato - A601889 di colorazione Tamoxifen Sigma-Aldrich T5648 10023418

Riferimenti

  1. Frost, H. M. The Utah paradigm of skeletal physiology: an overview of its insights for bone, cartilage and collagenous tissue organs. Journal of Bone and Mineral Metabolism. 18 (6), 305-316 (2000).
  2. Frost, H. M.

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Ristampe e permessi

Tag

Forza MeccanicaMicrotomografia ComputerizzataColorazione in ImmunofluorescenzaAttivit degli OsteoblastiMetabolismo OsseoInduzione con Tamoxifene