Valutazione del bilanciamento del motore e di coordinamento nei topi utilizzando la Balance Beam

L'obiettivo generale di questa procedura è valutare la coordinazione motoria e l'equilibrio nei topi. Il primo passo è quello di assemblare una trave di equilibrio con la posizione del rilevatore di movimento per registrare la latenza dell'attraversamento della trave per iniziare l'allenamento posizionata sul punto di partenza della trave di equilibrio e lasciata attraversare una piattaforma sicura. A volte è necessario incoraggiare l'animale lungo la trave verso il punto finale.

Dopo un intervallo di prova intermedio di 10 minuti, maer si è poi allenato su un raggio più stretto per consentire una maggiore sensibilità. La fase finale della procedura consiste nel testare gli animali addestrati su travi di diverse larghezze. In definitiva, si possono ottenere risultati che mostrano deficit nella coordinazione motoria e nell'equilibrio.

Ciao, sono Tim Luong e sono un dottorando in medicina presso il dipartimento di biologia del California Institute of Technology. Sono Holly Carlisle e sono un postdoc presso il California Institute of Technology nel dipartimento di biologia, e oggi vi mostreremo come valutare l'equilibrio e la coordinazione motoria nei topi utilizzando il test della trave di equilibrio. Ora, il vantaggio principale di questa tecnica rispetto ad altri metodi come l'asta del rotore, è che il test del bilanciere tende ad essere più sensibile anche a sottili deficit nella coordinazione motoria.

Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave in campo comportamentale, come ad esempio se la nostra coordinazione motoria e l'equilibrio sono influenzati in alcuni modelli di malattia neurologica e se i nostri deficit motori sono alleviati da particolari trattamenti. Lo scopo di questo test è misurare la quantità di tempo impiegata da un topo per attraversare il raggio senza fermarsi o bloccarsi e senza sollecitare l'investigatore. Per ottenere una corsa pulita il giorno del test, ci alleniamo per due giorni prima del test.

La dimostrazione visiva di questo metodo è utile in quanto il modo in cui i topi vengono maneggiati e aiutati attraverso il raggio può essere difficile per coloro che hanno meno familiarità con i test comportamentali. Quindi iniziamo. Questo protocollo si basa su quelli di Southwell, etal e Carter etal.

L'apparato viene assemblato appoggiando una trave lunga un metro tra due pali alti 50 centimetri. Le travi hanno una superficie piana di sei o 12 millimetri di larghezza. Travi di larghezza maggiore possono essere utilizzate per i topi più grandi e per quelli che non sono in grado di attraversare le dimensioni più strette.

Una scatola nera è posizionata all'estremità del raggio e il materiale di nidificazione è posizionato all'interno della scatola nera per incoraggiare il mouse verso il punto di arrivo, illuminare il punto di partenza con una lampada che funge da stimolo avversivo. I rilevatori di movimento sono posizionati a zero e 80 centimetri per registrare la latenza dell'attraversamento del raggio, allungare un'amaca di nylon sotto il raggio e circa 7,5 centimetri sopra il piano del tavolo per attutire eventuali cadute. I topi utilizzati in questa procedura sono alloggiati in un ciclo di buio e luce di 12 ore e sono stati acclimatati per due settimane prima del test.

Introdotto gli animali nella sala prove circa 10 minuti prima di iniziare l'esperimento e utilizzato una coorte di almeno 10 topi per condizione di test per ottenere i migliori risultati. Per iniziare l'allenamento, posizionare un mouse sulla posizione iniziale di un raggio largo 12 millimetri. Il timer inizia quando il naso del topo entra al centro di 80 centimetri e si ferma quando l'animale raggiunge la fine degli 80 centimetri.

I topi dovrebbero attraversare il raggio con un numero minimo di arresto o stallo. Se l'animale smette di avanzare, incoraggialo a continuare spingendolo delicatamente da dietro. Una volta che l'animale ha attraversato con successo la trave, rimuovila dalla cassetta di sicurezza e rimettila nella gabbia di casa per 10 minuti prima di iniziare la sessione di addestramento successiva.

La trave di bilanciamento e la scatola vengono pulite e pulite con etanolo al 70% prima di introdurre il mouse successivo. Ogni topo viene addestrato sul raggio largo 12 millimetri tre volte, seguito dall'addestramento sul raggio largo sei millimetri. Un ulteriore addestramento tre volte superiore può aumentare il verificarsi di stallo man mano che l'animale acquisisce maggiore familiarità con il compito e l'apparato.

D'altra parte, se i topi non riescono ad attraversare con successo l'intero raggio dopo due giorni di addestramento, potrebbe essere necessario un ulteriore addestramento. Assicurarsi di registrare le misurazioni di base prima che gli animali ricevano qualsiasi trattamento. Al termine dell'addestramento per la giornata, riporta i topi nelle loro gabbie domestiche nella struttura di detenzione.

Il giorno del test, portare gli animali nella stanza 10 minuti prima di iniziare l'esperimento come mostrato in precedenza, posizionare un mouse nella posizione di partenza e registrare la latenza con cui l'animale attraversa il centro di 80 centimetri del raggio. I dati sono riportati come la media di due studi di successo in cui il topo ha attraversato direttamente la fine senza fermarsi e senza essere sollecitato dallo sperimentatore. Le registrazioni video possono essere utilizzate per un'analisi più precisa dello scivolamento e di altri deficit motori osservabili.

In questo esempio, topi C 57 neri di età compresa tra nove e 11 settimane sono stati testati su fasci larghi da 12 millimetri e sei millimetri. Il tempo medio per attraversare il fascio largo 12 millimetri è stato di 4,6 più o meno 0,4 secondi per i maschi e di 3,3 più o meno 0,3 secondi per le femmine, i tempi sui sei raggi sono stati di 6,8 più o meno 0,7 secondi per i maschi e 5,9 più o meno 0,5 secondi. Per le femmine.

Le prestazioni del raggio di bilanciamento possono variare a seconda dell'età e del ceppo dei topi. I topi C 57 black six utilizzati in questo esempio sono tipicamente animali attivi, alcuni scivolamenti, ma non sono state osservate cadute per questi topi e animali manipolati geneticamente o farmacologicamente, scivolamenti e cadute possono diventare più frequenti e possono essere quantificati. I topi danneggiati possono aggrapparsi al lato del raggio, il che aumenta il loro tempo di attraversamento durante il tentativo di questa procedura.

È importante essere persistenti e coerenti nell'incitamento i topi ad andare avanti se si bloccano o si distraggono sul raggio. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come addestrare i topi ad attraversare la trave di equilibrio e a valutare il loro equilibrio e coordinazione. Grazie per aver guardato e spero che tu l'abbia trovato utile.