JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 3:14 min. • September 26th, 2025
Prendi un monostrato di cellule endoteliali polmonari di ratto.
Lavare le celle con tampone. Aggiungere una sospensione di Pseudomonas aeruginosa e incubare.
Durante l'incubazione, i batteri entrano in contatto con le cellule e iniettano proteine effettrici nel citoplasma.
Queste proteine effettrici inducono la rottura dei microtubuli e la rottura del citoscheletro.
La disgregazione citoscheletrica attiva le risposte allo stress cellulare, portando alla formazione di aggregati proteici citotossici mal ripiegati-oligomeri amiloidi.
Le proteine effettrici creano anche pori nella membrana cellulare, consentendo il rilascio di oligomeri amiloidi nello spazio extracellulare.
Inoltre, l'alterazione del citoscheletro altera la morfologia cellulare, creando lacune intercellulari nel monostrato endoteliale.
Quindi, osservare il monostrato al microscopio ottico. Una volta che le lacune intercellulari diventano evidenti, terminare l'incubazione.
Quindi, raccogliere il surnatante contenente amiloidi citotossiche e centrifugare per pellettare i detriti.
Raccogli il surnatante e filtralo per rimuovere eventuali batteri rimanenti.
Il surnatante raccolto contenente amiloidi citotossiche è pronto per ulterio
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