Quantificazione dell'alginato batterico mediante il dosaggio del carbazolo dell'acido uronico

Prendi una coltura del batterio Pseudomonas aeruginosa in brodo.

Placcare la coltura su agar di isolamento e incubare per promuovere la crescita batterica e la produzione di alginato, un esopolisaccaride composto da acidi uronici.

Aggiungi soluzione salina isotonica al prato batterico e raschia per raccogliere le cellule batteriche insieme all'alginato.

Trasferire la sospensione in un tubo, vorticare per disperdere il contenuto e posizionarla sul ghiaccio per evitare la degradazione enzimatica.

Misurare la densità ottica, o OD, per determinare la densità batterica.

Aggiungere la sospensione batterica alla soluzione acido-borato e mescolare per idrolizzare l'alginato in monomeri di acido uronico.

Aggiungere il carbazolo, un reagente cromogenico, e incubare. In condizioni acide, il reagente reagisce con gli acidi urronici per formare complessi colorati.

Misurare l'assorbanza per quantificare i livelli di acido uronico, che riflettono la concentrazione di alginato.

Utilizzando una curva standard, determinare la concentrazione di alginato, quindi dividerla per la densità cellulare batterica misurata per calcolare la produzione di alginato per unità di biomassa.

Per iniziare il dosaggio del carb