Valutazione della permeabilità intestinale in C. elegans dopo l'esposizione batterica

Prendere C. vermi elegans coltivati su piastre agar ricche di nutrienti contenenti E. coli per la condizione di controllo e Pseudomonas aeruginosa per la condizione patogena.

Durante l'incubazione, i vermi si nutrono di batteri che colonizzano il lume intestinale.

Nel controllo, l'epitelio intestinale rimane intatto, mentre le tossine rilasciate dal patogeno causano danni epiteliali.

Lavare i vermi con un tampone e trasferirli su piastre integrate con traccianti fluorescenti e batteri inattivati dal calore come fonte di cibo.

Nel controllo, i traccanti fluorescenti ingeriti rimangono nell'intestino, mentre nei vermi infetti dal patogeno attraversano l'epitelio danneggiato ed entrano nella cavità corporea.

Lava di nuovo i vermi e mettili su piatti freschi. Poi trasferirle su una piastra multipozzetto contenente un fissativo per preservare la struttura cellulare.

Rimuovi il fissativo. Poi aggiungi un supporto per l'imaging.

Osserva usando un sistema di imaging a fluorescenza.

Aumento della fluorescenza nella cavità corporea di P. Vermi esposti a Aeruginosa indicano permeabilità intestinale indotta dal patogeno.

Lavare le larve L4 sincronizzate con l'età con il tampone S e trasferire circa 500