JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:18 min • August 31st, 2026
Prelevare una coltura di ameba infettata con un virus gigante noto come Faustovirus.
Raccogliere il sopranatante della coltura contenente il Faustovirus.
Su una griglia per microscopia elettronica sottoposta a scarica elettrica, depositare il surnatante.
Incubare per consentire l'adsorbimento delle particelle virali sulla griglia.
Asciugare la griglia sulla carta da filtro per rimuovere le particelle virali non legate.
Deposita una goccia di molibdato di ammonio.
Il molibdato di ammonio agisce come colorante negativo legandosi alla griglia intorno al virus e scurendo lo sfondo per migliorare il contrasto durante l'imaging.
Rimuovere l'eccesso di molibdato di ammonio tamponando la griglia su carta da filtro.
Posizionare la griglia su una piastra di Petri e lasciarla asciugare.
Quindi, posizionare la griglia sul portacampioni.
Inserire il portacampioni nel microscopio elettronico.
Catturare un'immagine del Faustovirus e misurare la dimensione del Faustovirus per ulteriori analisi.
Per eseguire la microscopia elettronica, depositare cinque microlitri del campione positivo su una griglia trattata con plasma, e incubare a temperatura ambiente per circa 20 minuti. Asciugare con attenzione la griglia, quindi aggiungere una piccola quantità di molibdato di ammonio al 1% e incubare per 10 secondi. Dopo aver rimosso con cura la goccia, lasciare asciugare la griglia per cinque minuti. Successivamente, impostare il microscopio elettronico a 200 kiloelettronvolt. Poi, posizionare la griglia sul supporto ed inserire il supporto nel microscopio. Fare clic sull'icona della panoramica del vuoto e verificare il livello di vuoto. Chiudere quindi le valvole e impostare una dimensione del punto di cinque e un'ingrandimento di 25.000 prima di iniziare l'osservazione. Dopo aver localizzato un virus gigante sullo schermo di acquisizione, utilizzare lo strumento di misura per misurare il virus.
Eseguire la biologia molecolare e il sequenziamento del genoma virale secondo il protocollo indicato nel testo.