Misurazione dell'induzione spontanea dei fagi nei batteri lisogeni nel tempo

Prelevare una coltura notturna di un batterio lisogeno, in cui la maggior parte delle cellule ospita DNA fagico dormiente integrato nel loro genoma.

Inocularlo in un mezzo fresco e incubare.

Alcuni batteri subiscono un'induzione spontanea, entrando nel ciclo litico, in cui il DNA del fago viene escisso, replicato e vengono prodotte le proteine virali.

I nuovi fagi infettivi assemblati vengono rilasciati attraverso la lisi cellulare.

Prelevare campioni di coltura a intervalli definiti.

Per contare i lisogeni non indotti vitali, depositare diluizioni seriali di ogni campione su una piastra di agar e incubare.

Conta le colonie per calcolare le unità formanti colonie (UFC).

Per contare i fagi infettivi, depositare le stesse diluizioni su una piastra di agar con antibiotico precedentemente seminata con cellule ospiti indicatori resistenti all'antibiotico. Poiché i lisogeni sono sensibili all'antibiotico, solo gli ospiti resistenti possono crescere.

I fagi infettano e lisano le cellule, formando placche trasparenti.

Conta le placche per calcolare le unità formanti placca (PFU). Un numero inferiore di PFU indica meno eventi di induzione spontanea.

Tracciare le UFC e le PFU nel tempo. Durante la fas