JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
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Prendere una piastra multipozzetta contenente amebe coltivate in un mezzo di privazione.
Il mezzo di privazione contiene antibiotici e agenti antifungini che limitano la crescita microbica mantenendo al contempo gli amebe vitali senza moltiplicazione o formazione di cisti dormienti.
Prendere un tubo contenente il campione di acqua ambientale e sottoporlo a vortex per liberare i virus dai solidi sospesi e dai detriti.
Aggiungere il campione d'acqua contenente i virus alle amebe.
Posizionare la piastra in un sacchetto con una compressa umida per prevenire l'evaporazione e incubare.
Durante l'incubazione, le amebe ingeriscono i virus giganti mediante fagocitosi.
Dopo essere stato internalizzato, il virus rilascia il suo genoma nel citoplasma dell'ameba.
Un impianto virale citoplasmatico si forma attorno al genoma virale, dove utilizza il macchinario dell'ospite per replicarsi e produrre proteine virali che si assemblano in nuovi virioni.
Questo provoca l'arrotondamento e la lisi delle cellule amebiche, liberando nuovi virioni nel mezzo e arricchendo i virus giganti per il rilevamento successivo.
Dopo aver raccolto i campioni di acqua sporca seguendo il protocollo descritto, preparare la cellul
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