Name: Luso di cellule staminali per la rigenerazione ossea perivascolari (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-25T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 5 s
Description: Impara l'impianto di cellule staminali perivascolari per la rigenerazione ossea in modelli ectopici e ortotopici. Questo metodo utilizza PSC isolate dal tessuto adiposo con scaffold personalizzati per promuovere la formazione ossea in vivo.

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Questo lavoro è stato supportato dal CIRM precoce Translational Research Award II TR2-01821, NIH / NIDCR (sovvenzioni R21 DE0177711 e RO1 DE01607), UC Discovery Grant 07-10677, AWJ e RKS hanno T32 premi (borse di formazione 5T32DE007296-14), jnz ha una borsa di studio CIRM formazione (TG2-01169).

1. Perivascolare Stem isolamento cellulare Questo è descritto in dettaglio nella adiacente "purificazione delle cellule staminali umane perivascolari da tessuto adiposo bianco" articolo di M. Corselli et al. 2. Scaffold Creation <ol><li> Ponteggi sono su misura per il protocollo precedentemente pubblicato da poli (lattico-co-glicolico) (PLGA, Burmingham Polymer) con rivestimento in idrossiapatite 4-6. Apatite rivestite impalcature PLGA sono fabbricati da 85/15 PLGA da solvente per colata e un processo di lisciviazione particolato. Le impalcature sono creati in una forma sferica (2-mm di diametro) per l'impianto muscolo sacchetto, una forma discoidale (4 mm di diametro) per l'impianto cranica, o cilindrica (4 mm di diametro, 6 mm di lunghezza) per femorale difetti segmentale. </li><li> In breve, PLGA / cloroformio soluzioni miste con saccarosio (polimero / rapporto meno di 5/95, w / w) sono fusi in uno stampo del diametro di 200-300-micron Teflon per creare su misura construct. Dopo liofilizzazione overnight, ponteggi vengono rimosse dallo stampo e Teflon immerso in ddh 2 O per sciogliere il saccarosio. Le impalcature sono disinfettati per immersione in 70% etanolo per 30 min, seguito da tre lavaggi di ddh 2 O. </li><li> Per rivestimento di apatite, un fluido corporeo simulato soluzione (SBF) viene preparata sciogliendo sequenzialmente CaCl 2, MgCl2 • 6H 2 O, NaHCO 3, e K 2 HPO 4 • 3H 2 O in ddh 2 O. PH della soluzione si abbassa a 6 con l'aggiunta di acido cloridrico 1M per aumentare la solubilità. Na 2 SO 4, KCl, e NaCl vengono aggiunti e il pH finale viene regolata a 6,5 (SBF 1). </li><li> Mg2 + e HCO 3 - libera SBF (SBF 2) viene preparata aggiungendo CaCl 2 e K 2 HPO 4 • 3H 2 O in ddh 2 O e si abbassa il pH a 6. KCl e NaCl vengono aggiunti e il pH finale viene regolata a 6,8. Tutte le soluzioni sono sterili filtrata attraverso un membr 0,22 micron PESAne (Nalgene). Immediatamente prima del processo di rivestimento, i ponteggi essiccati PLGA sono sottoposti a bagliore scarico plasma di argon etching (Harrick Scientific) per migliorare la bagnatura e uniformità di rivestimento. </li><li> Etched ponteggi vengono poi incubate in SBF 1 per 12 ore e cambiato Mg2 + e HCO 3 - libero SBF 2 per un'altra h 12 a 37 ° C sotto leggera agitazione. Ponteggi rivestiti vengono lavati con ddh 2 O per rimuovere gli ioni in eccesso e liofilizzati prima di ulteriori studi. </li></ol> 3. Il Muscle Pouch impianto modello <ol><li> 100 pl di una sospensione PSC in PBS (tampone fosfato salino) sono delicatamente cadere sulla sferica PLGA basato impianto subito prima dell'impianto. Le cellule sono state pre-etichettato mediante inserimento lentivirale luciferasi di lucciola, così da consentire dopo l'impianto in vivo inseguimento. Densità cellulare è di 2,5 x 10 5 per ogni impianto. </li><li> SCID (grave immunodeficienza combinata), i topi sono utilizzati a 6 settimane di età. Gli animali sono anesthetized per inalazione isoflurano e premedicazione con buprenorfina (Bedford Labs). Dopo la preparazione Betadine standard, incisioni bilaterali negli arti posteriori sono realizzati (longitudinale e 2 mm di lunghezza). </li><li> Tasche vengono tagliati nei muscoli bicipite femorale da parallelo smussa all'asse della fibra muscolare lungo. Per ciascun topo, il PLGA basata impianto con PSC viene inserito, e la fascia sovrastante il muscolo viene suturata con 5-0 Vicryl (Ethicon). </li><li> La pelle è chiusa con successivo 5-0 Vicryl in un modello sottocuticolare. Gli animali vengono trattati nel postoperatorio con buprenorfina per 48 ore e TMP / SMX (trimetoprim / sulfametossazolo; Qualitest) per 10 giorni. </li></ol> 4. Il cranica Defect impianto modello <ol><li> Dopo l'anestesia isoflurano di topi SCID (12-14 settimane), i capelli sono tagliati e la pelle disinfettato con Betadine per protocollo. </li><li> A 8 mm incisione cutanea è praticata lungo la sutura sagittale della volta cranica topo. Successivamente, il CALVarial periostio viene delicatamente rimosso da Q-tip applicazione. </li><li> Successivamente, utilizzando diamantate punte trapano in un trapano ad alta velocità dentale, uno da 4 mm difetto parietale è stato creato. Il difetto è tutto spessore - tuttavia si ha cura di non danneggiare il sottostante dura mater. </li><li> La misura PLGA-based impianto con PSC trapiantati viene poi messo delicatamente nel sito del difetto. Densità cellulare è di 2,5 x 10 5 per ogni impianto. Infine, la cute viene suturata con 6-0 Vicryl. Gli animali vengono trattati nel postoperatorio con buprenorfina per 48 ore e TMP / SMX per 10 giorni. </li></ol> 5. Il difetto femorale segmentale impianto modello <ol><li> Atimici ratti (12-14 settimane di età) sono anestetizzati con isoflurano inalazione. Il femore è rimosso e preparato secondo la procedura standard con Betadine (Figura 1). </li><li> A 27-30-millimetri incisione longitudinale è realizzata sulla faccia antero-laterale del femore. Il femore è quindi esposto separando il lat vastoeralis e muscoli bicipite femorale (Figura 2). </li><li> Per massimizzare la coerenza di rigenerazione ossea, il periostio sovrastante il difetto femorale viene completamente rimosso con il segmento asportato femorale. </li><li> Una piastra di polietilene (lunghezza, 23 mm, larghezza, 4 mm, altezza, 4 mm) è posto sulla superficie antero-laterale del femore. La piastra contiene sei fori predisposti per accogliere 0,9 mm di diametro fili di Kirschner filettati (Zimmer). Prendendo la piastra come modello, sei fili di Kirschner filettati sono perforati attraverso la piastra ed entrambe le corticali (Figura 3). </li><li> Successivamente, con una lama piccola sega oscillante (Stryker, MI), a 6 mm mid-diafisario difetto è stato creato. Difetti segmentali vengono poi trattati con l'inserimento di impianti PLGA base che sono stati carica di celle come da protocollo (Figura 4). </li><li> Il muscolo e la fascia sovrastante sono chiusi con 4-0 punti di sutura riassorbibili Vicryl per fissare l'impianto in posizione, e la pelle viene suturata. </li> 6. Valutazioni in vivo <ol><li> Valutazioni radiografiche sono eseguite in maniera longitudinale sia XR alta risoluzione e ad alta risoluzione μCT (micro tomografia computerizzata) analisi. Per l'analisi μCT (Skyscan 1172F), le immagini sono state scansionate ad una risoluzione di 19,73 micron (100 kV e 100 mA sorgente di radiazione, utilizzando un filtro in alluminio da 0,5 mm). Le immagini sono analizzate utilizzando DataViewer, Recon, CTAN e software CTVol. </li><li> Immagini bioluminescenza è anche fatto in modo seriale per valutare l'attecchimento delle cellule, vitalità, proliferazione ed escludere la migrazione dal sito dell'impianto. Immagini bioluminescenza è effettuato con un dispositivo di IVIS Lumina II (Caliper Life Sciences). Uscite di luce vengono quantificati utilizzando il software Living Image (Xenogen). Emissione luminosa complessiva è registrata in fotoni / secondo / cm ² / steradiante. </li><li> L'analisi istologica e istomorfometrica viene eseguito post mortem. Macchie di routine impiegate includono Masson tricromica, blu di anilina, pentachrome, e Picrosirius rosso. L'analisi istomorfometrica viene eseguita facilmente con uno blu anilina o macchie pentachrome, in cui appare osteoide blu scuro e giallo, rispettivamente. Pixel per campo di alta potenza sono calcolati utilizzando lo strumento bacchetta magica in Adobe Photoshop. </li></ol> 7. Risultati rappresentativi Poiché entrambi i difetti cranica e femorale sono critiche imprese, non significativa la guarigione dovrebbe essere previsto senza trattamento con fattori di crescita o cellule staminali esogeni. In termini di manovre chirurgiche, la dissezione sacca muscolare dovrebbe essere lungo i piani fasciali e quindi sanguinamento minimo si dovrebbero incontrare. Anche se il modello sacca muscolare viene eseguita bilateralmente, il mouse deve essere a piedi con facilità il giorno postoperatorio 1. Per il difetto cranico, emorragia si incontra, ma può essere intrisa di una Q-tip. Prestare estrema attenzione a non ferire la dura sottostante dura - perché questo potrebbe interferirecon la guarigione normale. Per il modello FSD, si ha cura di non danneggiare i vasi sanguigni più importanti in modo da non provocare un sanguinamento eccessivo o il nervo femorale per evitare danni neurologici. Fili di Kirschner sono perforati con una leggera pressione in modo da non danneggiare l'osso corticale nel processo. <img alt="Figura 1." src="/files/ftp_upload/2952/2952fig1.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1."> Figura 1. Preparazione preoperatoria per difetto di femore (FSD) nei ratti atimici. Ratti maschi (12-14 settimane di età) sono anestetizzati con isoflurano inalazione. Il femore è rimosso e preparata secondo la procedura standard con Betadine. <img alt="Figura 2." src="/files/ftp_upload/2952/2952fig2.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2."> Figura 2. L'esposizione chirurgica per femorale segmentale Defect (FSD) creazione. A 27-30 millimetri incisione longitudinale è realizzata sulla faccia antero-laterale del femore. L'aspetto laterale della diafisi femorale è quindi esposto separando il vasto lateralebicipite femorale e muscoli. <img alt="Figura 3." src="/files/ftp_upload/2952/2952fig3.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3."> Figura 3. Di fissaggio per femorale segmentale Defect (FSD) creazione. Una piastra di polietilene (lunghezza, 23 mm, larghezza, 4 mm, altezza, 4 mm) è posto sulla superficie antero-laterale del femore. La piastra contiene sei fori predisposti per accogliere 0,9 mm di diametro fili di Kirschner filettati. Prendendo la piastra come modello, sei fili di Kirschner filettati sono perforati attraverso la piastra ed entrambe le corticali. Successivamente, da 6 mm mid-diafisario difetto viene creato. Una volta che questo viene eseguita una misura scaffold è inserito direttamente che si adatta esattamente sito del difetto (non mostrato). <img alt="Figura 4." src="/files/ftp_upload/2952/2952fig4.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 4."> Figura 4. Esempio di difetto cranico post-operatorio. A mm 4, difetto circolare cranica viene creato nel parietale destro nei topi atimici. Creata l'immagine qui è un sito del difetto impiantati conPSC a 8 settimane post-operatorie. Si noti la presenza di nuovo tessuto osseo all'interno del sito del difetto. </ol>

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</ol>

KT, BP, e CS sono inventori perivascolari di cellule staminali relativi brevetti depositati presso la UCLA. Drs. KT, e CS sono i fondatori del scarless Laboratories Inc., che sottolicenze perivascolari cellule staminali brevetti relativi al Regents UC. Dr. Chia Soo è anche un ufficiale di scarless Laboratories, Inc.

L&#39;isolamento di PSC è ben descritto altrove 1-3, compresa una pubblicazione JOVE separatamente presentato specificatamente legati protocolli di isolamento PSC e metodi. Lo scopo specifico di questo articolo è quello di descrivere e dimostrare 3 protocolli per PSC in applicazione vivo per la formazione dell&#39;osso / rigenerazione. La SCID sacchetto muscolare del mouse è un modello comunemente descritto per la formazione ectopica di osso umano 7. Notevoli differenze esistono tra ectopiche e ortotopico (difetto) i modelli per l&#39;osso, compresa l&#39;interazione con l&#39;host paracrino ossee 8 così come l&#39;abbondanza di osteogeniche fattori di segnalazione presenti nel microambiente difetto scheletrico. Due difetti sono presentati qui, un defect8 cranica e femorale difetto di 4. Entrambe sono ben documentati per essere critici imprese (vale a dire non guarire da soli). Interessanti differenze esistono tra i difetti cranica e femorale. In primo luogo, lacell: interazione cellulare tra PSC xenotrapiantati e cellule endogene è molto diversa. In termini di un difetto cranica, PSC interagire con il mater sottostante dura (lo strato più esterno delle meningi), nonché quelle osteoblasti e cellule periostali circoscrivono sito del difetto. È importante sottolineare che l&#39;interazione tra cellule impiantate e osteoblasti circostanti 8, o cellule impiantate e sottostante dura madre (Levi et al., In stampa) sono critici per cellule staminali normali mediata osteogenesi procedere. In termini di difetto femorale segmentale (FSD), PSC xenotrapiantati sono esposti a una cella diversa ambiente e citochine. Ad esempio, il sito FSD è composto delle cellule staminali mesenchimali del midollo osseo e di accompagnamento, così come la endosteum, periostio e delle ossa lunghe osteoblasti. Teoricamente, ogni cella ha la sua propria reazione al danno, e ognuno può avere l&#39;interazione fra cellule con xenotrapianti PSC. Altre differenze esistano tra cranicae difetti femorali. Le ossa cranica inizialmente formare attraverso ossificazione intramembranosa, mentre le ossa lunghe formano attraverso un intermedio cartilagine (encondrale). Inoltre, il processo riparativo post-infortunio anche imita queste origini dello sviluppo. Post-FSD, formazione del callo osseo la cartilagine si osserva, considerando che non intermedia cartilagine è formata all&#39;interno di un difetto osseo parietale. Infine, l&#39;origine embrionale del cranio può differire da quella delle ossa lunghe. La maggior parte del cranio (comprese cellule perivascolari - periciti - della regione intera testa) è derivato dalla cresta neurale (mesectoderm), mentre lo scheletro appendicolare è di derivazione mesoderma parassiale 9. Tutte queste differenze possono portare a differenze significative in termini di PSC-mediata riparazione ossea. L&#39;uso di PSC ha diversi vantaggi rispetto ai tradizionali cellule stromali derivate da tessuto adiposo (CSA). PSC non richiedono la cultura e sono una popolazione di cellule purificate WHIch non include altre cellule stromali che non partecipano - e può anche regolano negativamente - differenziazione osteogenico, come le cellule endoteliali 10. Al contrario, per esempio, analisi clonali di ASC mostrano che solo una sottopopolazione sono capaci di subire differenziazione osteogenico in vitro 11. In definitiva, scheletriche sforzi di ingegneria tissutale probabilmente integrare una cella osteocompetent staminali (come PSC) con fattori di crescita esogeni e uno scaffold osteoconduttivo (come HA-PLGA usato nei presenti metodi) per guarire meglio difetti scheletrici.

l&#39;uso di cellule staminali per la rigenerazione ossea perivascolari

Use of Human Perivascular Stem Cells for Bone Regeneration

Cellule staminali perivascolari (PSC) può essere isolato in numero sufficiente da diversi tessuti a fini di 1-3 scheletrico ingegneria dei tessuti. PSC sono una popolazione FACS-ordinata di &#39;periciti&#39; (CD146 + CD34-CD45-) e &#39;cellule avventiziale &quot;(CD146-CD34 + CD45-), ciascuno dei quali abbiamo già riferito di avere proprietà delle cellule staminali mesenchimali. PSC, come MSC, sono in grado di subire differenziazione osteogenico, nonché secernono pro-osteogenico 1,2 citochine. Nel presente Protocollo, dimostriamo la osteogenicity del PSC in diversi modelli animali tra cui un impianto muscolare sacchetto in SCID (immunodeficienza combinata grave) topi SCID, una difetto del mouse cranica e un difetto femorale segmentale (FSD) nei ratti atimici. Il muscolo della coscia modello sacchetto viene utilizzato per valutare la formazione ectopica dell&#39;osso. Difetti calvaria sono centrate con l&#39;osso parietale e sono ordinariamente 4 mm di diametro (criticamente imprese) 8. FSD sono bicorticale e sono stabilizzate conuna barra di polietilene e K-fili 4. La FSD è descritto anche un difetto dimensione critica, che non influisce significativamente guarire da 4 stessa. Al contrario, se le cellule staminali o fattori di crescita vengono aggiunti al sito del difetto, rigenerazione ossea significativo può essere apprezzato. L&#39;obiettivo generale di xenotrapianto PSC è quello di dimostrare la capacità osteogenico di questo tipo di cellule in modelli ossee sia ectopiche e ortotopico di rigenerazione.

Le cellule staminali perivascolari (PSC) sono una nuova classe di cellule staminali per la rigenerazione tissutale scheletrico simili alle cellule staminali mesenchimali (MSC). CSP possono essere isolati mediante FACS (fluorescenza selezione cellulare attivata) da tessuto adiposo prelevati durante le normali procedure di liposuzione, poi combinato con un osteoinduttiva impalcatura per ottenere la formazione ossea<em&gt; In vivo</em&gt;.

L&#39;uso di cellule staminali per la rigenerazione ossea perivascolari

Le cellule staminali perivascolari (PSC) umane possono essere isolate in numero sufficiente da molteplici tessuti ai fini dell'ingegneria del tessuto scheletrico1-3. Le PSC sono...

L'obiettivo generale del seguente esperimento è osservare gli effetti dell'impianto di cellule staminali perivascolari in modelli di differenziamento osseo ectopico e ortotopico. Questo viene raggiunto isolando innanzitutto le cellule staminali dal tessuto adiposo mediante tecnologia fax. Successivamente, vengono realizzati scaffold personalizzati per fornire una superficie al differenziamento cellulare in un ambiente ectopico o ortotopico.Per testare la formazione ossea mediata da CSE, vengono creati difetti scheletrici utilizzando un modello di tasca muscolare in topo skid, un modello di calvaria in topo skid o un modello di difetto segmentale del femore in ratto atimico, e l'impalcatura trapiantata viene posizionata all'interno del difetto. L'analisi radiografica, istologica e biochimica rivela che la differenziazione delle cellule staminali perivascolari porta a una significativa formazione ossea in vivo. Il principale vantaggio dell'uso di cellule staminali perivascolari rispetto ad altre fonti di cellule staminali più tradizionali è che le CSE, o cellule staminali perivascolari, rappresentano una popolazione più omogenea, che aumenta la purezza delle cellule staminali, potenzia la produzione di fattori trofici e potenzialmente incrementa la formazione ossea.Iniziare creando un'impalcatura come descritto nel manoscritto allegato. Preparare l'impalcatura per l'impianto aggiungendo una sospensione cellulare. Per i modelli di tasca muscolare del topo o di difetto calvarico, utilizzare una densità di 250.000 cellule per cento microlitri dopo anestesia.Animale di sei settimane con isoflurano e buprenorfina. Eseguire una preparazione standard con Betadine nell'arto posteriore. Successivamente, praticare un'incisione bilaterale longitudinale di due millimetri ed utilizzare una dissezione ottusa per creare tasche profonde quattro millimetri nei muscoli bicipiti femorali.Parallelamente alla fibra muscolare, si dovrebbe incontrare solo un sanguinamento minimo. Inserire l'impianto trapiantato con cellule PSC. Suturare ora la fascia sovrastante il muscolo con un punto continuo semplice usando filo Vicryl cinque-oh.Successivamente, chiudere la cute con cinque punti di Vicryl in un modello sottocutaneo. Postoperatoriamente, trattare gli animali con buprenorfina per 48 ore e T-M-P-S-M-X per 10 giorni. Il topo dovrebbe camminare agevolmente già al primo giorno postoperatorio.Dopo l'isoﬂuorano, anestetizzare un topo skid di 12-14 settimane. Eseguire una preparazione standard della regione calottaia con Betadine. Effettuare un'incisione cutanea lunga otto millimetri lungo la sutura sagittale mediana della calotta cranica del topo.Successivamente, rimuovere delicatamente il periostio della calotta cranica utilizzando un bastoncino di cotone e impiegare un applicatore per assorbire il sangue. A questo punto, utilizzando una punta trapano diamantata collegata a un trapano dentale ad alta velocità, creare un difetto osseo parietale di quattro millimetri. Il difetto deve essere a tutto spessore, ovvero attraverso l'intero spessore dell'osso, ma prestare la massima attenzione a non danneggiare la dura madre sottostante, poiché ciò comprometterebbe la guarigione.Ora posizionare delicatamente l'impianto innestato con PSCs nel sito della lesione. Infine, suturare la cute con Vicryl 6-0 postoperatoriamente. Trattare gli animali con buprenorfina per 48 ore e con T-M-P-S-M-X per 10 giorni.Iniziare eseguendo una detersione accurata e preparando il femore di un ratto amico di 12-14 settimane, precedentemente anestetizzato con Isofluorina. Applicare il protocollo standard con Betadine. Eseguire un'incisione longitudinale di 27-30 millimetri sulla faccia anterolaterale del femore.Successivamente, esporre la diafisi femorale separando i muscoli vasto laterale e bicipite femorale per evitare un sanguinamento eccessivo. Prestare attenzione nelle vicinanze dei vasi sanguigni principali. Per massimizzare la coerenza della rigenerazione ossea, completamente.Rimuovere il periostio sovrastante il difetto femorale, insieme al segmento femorale resecato. Evitare di danneggiare il nervo femorale per prevenire danni neurologici. Posizionare ora una piastra in polietilene sulla superficie anterolaterale del femore.Sei fori preforati nella piastra accolgono fili di Kirschner filettati con diametro di 0,9 millimetri. Utilizzando la piastra come stampo, si inseriscono sei fili di Kirschner filettati attraverso la piastra e entrambe le corticci. Con una piccola lama oscillante, si crea un difetto mid-diastale di sei millimetri.Quindi impiantare la PSC e l'impalcatura innestata nel difetto. Chiudere il muscolo e la fascia sovrastanti con quattro punti di sutura riassorbibili Vicryl. Per fissare saldamente l'impianto, somministrare al ratto una terapia analgesica per due giorni dopo l'intervento e monitorare la deiscenza della ferita per quattro settimane successive all'impianto nella tasca muscolare.È stato osservato un aumento graduale del volume osseo e della densità minerale ossea mediante analisi con micro-CT e raggi X durante un periodo di otto settimane dopo l'induzione di un difetto calvarico; in assenza di un scaffold non è stata osservata alcuna guarigione ossea a causa delle dimensioni critiche del difetto, mentre con lo scaffold ma senza cellule si è verificata una guarigione minore stimata intorno al 20%, come previsto. Con uno scaffold seminato è stata osservata una progressiva ossificazione del difetto.La principale ossificazione si è verificata entro due settimane. L'ossificazione completa si è raggiunta entro otto settimane dall'induzione di un difetto femorale. Un aumento graduale dell'ossificazione è stato osservato quando il difetto è stato trattato con BMP2, con evidenza di unione già a quattro settimane in alcuni animali, e entro otto settimane tutti gli animali erano guariti.Al contrario, nessuna unione ossea è stata osservata in assenza di scaffold o con uno scaffold privo di cellule o di proteina ricombinante. Dopo aver visto questo video, si dovrebbe avere una buona idea su come isolare le cellule staminali paravascolari, su come utilizzare successivamente tali cellule in combinazione con scaffold osteoinduttivi in PLGA e, infine, su come impiegare questi scaffold combinati con le cellule per tre diversi metodi di ingegneria tissutale. Tuttavia, nel tentativo di eseguire ciascuna procedura come qui presentato, ci sono alcuni aspetti importanti da tenere a mente. In primo luogo, nel modello di difetto calvarico, la precisa conservazione della dura madre garantisce un corretto processo di guarigione.In secondo luogo, per il modello di difetto segmentale del femore del ratto, è importante ridurre al minimo il trauma ai nervi e ai vasi sanguigni circostanti. Una volta che un individuo ha acquisito una certa tecnica chirurgica come quella qui presentata, ci si può aspettare che ogni impianto nella tasca muscolare richieda circa 20 minuti per essere eseguito, e che ogni difetto calvarico e difetto segmentale femorale possa richiedere fino a 30 minuti per essere eseguito correttamente.

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Questo protocollo descrive l'isolamento di adiposo cellule stromali di lipoaspirate e la creazione di un millimetro 4 critico imprese difetto cranica per valutare rigenerazione scheletrico.

Riparazione di un critico di dimensioni modello Difetto cranica Usando derivate da tessuto adiposo cellule stromali raccolte da Lipoaspirate

Le cellule staminali mesenchimali (MSC) hanno un potenziale di differenziazione verso la linea osteoblastica quando vengono stimolate con fattori solubili o biomateriali specifici. Questo lavoro presenta una nuova opzione per la somministrazione di MSC dalla membrana amniotica umana (AM-hMSCs) che impiega la matrice ossea bovina Nukbone (NKB) come scaffold.

Isolamento di cellule staminali mesenchimali umane e la loro coltivazione in poroso Bone Matrix

tessuto cardiaco umano alberga popolazioni di cellule precursore perivascolari multipotenti che possono essere adatti per la rigenerazione del miocardio. La tecnica qui descritta permette l'isolamento e la purificazione simultanea di due popolazioni di cellule stromali multipotenti associati con i vasi sanguigni nativi, cioè CD146 + CD34 - periciti e CD34 + CD146 - cellule avventiziale, dal miocardio umano.

Isolamento di perivascolare Multipotent precursori delle cellule popolazioni dal cardiache umane Tissue

Coltura umane cellule mesenchimali stromali (hMSCs) con siero autologo, riduce i rischi di rigetto di materiale xenogenico e altri effetti negativi. Esso permette inoltre il recupero di un sottoinsieme di progenitori mesodermici, che può trasportare hMSCs freschi. Incorporare hMSCs in un coagulo di fibrina autologa consente una facile maneggevolezza ed efficace impianto chirurgico.

Mesenchimali stromali coltura cellulare e la consegna in autologhi Condizioni: un approccio intelligente per applicazioni ortopediche

Le cellule stromali derivate dal tessuto adiposo possono essere utili per ingegnerizzare nuovi tessuti dalle cellule di un paziente. Presentiamo un protocollo per l'isolamento di una sottopopolazione di cellule stromali umane di derivazione adiposa (ASC) con aumentato potenziale osteogenico, seguito dall'applicazione delle cellule in un saggio di guarigione calvariale in vivo.

Isolamento rapido di BMPR-IB + derivate da tessuto adiposo cellule stromali per l&#39;uso in un cranica difetto di guarigione Modello

Qui, presentiamo un protocollo per visualizzare formazione del vaso sanguigno in vivo e in tempo reale in 3D impalcature da microscopia multifotonica. Angiogenesi in impalcature geneticamente è stato studiato in un modello di difetto critico calvarial murino dell'osso. Più nuovi vasi sanguigni sono stati rilevati nel gruppo di trattamento rispetto ai controlli.

Visualizzando l'angiogenesi da microscopia multifotonica In Vivo in geneticamente 3D-PLGA/nHAp impalcatura per Calvarial riparazione di difetti ossei critici

Viene presentato un metodo per creare e vivere immagini diverse nicchie di midollo osseo umanizzato nei topi. Sulla base della nicchia di supporto creata da cellule mesenchimali umane, l'aggiunta di cellule endoteliali umane induce la formazione di vasi umani, mentre l'aggiunta di rhBMP-2 induce la formazione di tessuto osseo chimerico maturo umano-mouse.

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Vi presentiamo un protocollo per studiare i biomarcatori di espressione di mRNA di cellule derivanti dal periostio (PDC) indotte da vitamina C (vitamina C) e 1,25-diidrossi-vitamina D [1,252D-3]. Inoltre, valutiamo la capacità di differenziarsi in adipociti, condrociti e osteociti PDC.

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La terapia ossea tramite ossificazione endocondrale mediante l'impianto di tessuto cartilagineo artificiale prodotto da cellule staminali mesenchimali ha il potenziale per aggirare gli inconvenienti delle terapie convenzionali. Gli idrogel di acido ialuronico sono efficaci nel ridimensionare gli innesti di cartilagine uniformemente differenziati e nel creare osso integrato con vascolarizzazione tra innesti fusi in vivo.

Formazione ossea integrata attraverso l'ossificazione endocondrale in vivo utilizzando cellule staminali mesenchimali

Qui, abbiamo stabilito osteo-organoidi in vivo innescati da scaffold di gelatina caricati con proteina morfogenetica ossea 2 per raccogliere cellule staminali/progenitrici ematopoietiche terapeutiche per la ricostruzione di un sistema ematopoietico e immunitario danneggiato. Nel complesso, questo approccio può fornire una promettente fonte cellulare per le terapie cellulari.

Approccio osteo-organoide in vivo per la raccolta di cellule staminali/progenitrici ematopoietiche terapeutiche

Impara l'impianto di cellule staminali perivascolari per la rigenerazione ossea in modelli ectopici e ortotopici. Questo metodo utilizza PSC isolate dal tessuto adiposo con scaffold personalizzati per promuovere la formazione ossea in vivo.

L'uso di cellule staminali per la rigenerazione ossea perivascolari

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