Name: Casting cerebrovascolare del topo adulto per limaging 3D e analisi morfologica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-30T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 42 s
Description: Impara il casting cerebrovascolare del topo adulto per la visualizzazione 3D della vascolatura cerebrale. Questa tecnica semplice consente l'analisi morfologica con microscopia a campo chiaro e micro CT.

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Gli autori ringraziano il Voltaire Gungab per l&#39;assistenza nella preparazione del manoscritto. Questo lavoro è stato sostenuto in parte da finanziamenti: il National Institutes of Health (T32 GM008440 di EJ Walker, R01 NS27713 di WL Young, P01 NS44155 di WL H. Young e Sop) e R21 NS070153 a H. Su, e l&#39;americano Heart Association (AHA 10GRNT3130004 a H. Sop).

1. Compensazione del sangue da vasi <ol><li> Anestetizzare topo mediante iniezione intraperitoneale di 100 mg / kg di ketamina con 10 mg / kg xylazina diluiti in soluzione salina 0,25 ml. </li><li> Una volta che l'anestesia è stata confermata da alcuna risposta a un pizzico zampa, usare le forbici per fare un'incisione sul petto con le forbici appena sotto il processo xifoideo, tagliare diaframma, e tagliare tra il segmento dorsale e ventrale della gabbia toracica per esporre cavità toracica. Esporre cuore piegando fino allo sterno e della parete toracica adiacente e sicuro con hemostat. Aprire il sacco pericardico con le pinzette per esporre il cuore. </li><li> Accendere la pompa perfusione (100 mmHg di pressione) collegato al caldo PBS addizionato con eparina (5 unità / ml), soluzione in bagno di acqua calda a 37 ° C e il tubo con un brusco 22 gauge sul deflusso. </li><li> Inserire l'ago nel ventricolo sinistro, vicino all'apice del cuore. Immediatamente taglio aperto l'atrio destro per permettere deflusso arteriosa sistemica e continuare a sciacquare fino a sangue is ritirate dalla circolazione. </li></ol> 2. Perfusione di Casting Agent nel sistema vascolare <ol><li> Preparare Microfil (flusso Tech, Inc. Carver, MA), soluzione di fusione per protocollo del produttore: Mescolare 5 ml di diluente MV con 4 ml di composto MV filtrata. Aggiungere 450μl (5%) di catalizzatore (induritore MV). Tempo di soluzione di lavoro è di 20 minuti, ma miscelare al momento dell'uso per garantire la corretta viscosità. </li><li> Prelevare fusione soluzione agente in una siringa da 10 ml, allegare un brusco ago di calibro 20 alla siringa e riempire l'ago con soluzione. </li><li> Inserire l'ago nel ventricolo sinistro attraverso il foro stesso usato per il lavaggio del sangue. Fissare l'ago in posizione con pinza emostatica sul cuore. </li><li> Iniettare agente soluzione di colata lentamente nel ventricolo sinistro di circa 3 ml / min. Pressione in eccesso può portare a errate flusso di agente di casting o di rottura serbatoio potenziale. </li><li> Cercare i segni di perfusione di successo, tra cui: la visualizzazione del castcomunemente in commercio, vasi intestino e fegato, scolorimento distali degli arti, e il naso e scolorimento della lingua. Regolare di nuovo l'ago, se necessario, per raggiungere la perfusione corretta. </li></ol> 3. Raccolta ed elaborazione del tessuto <ol><li> Togliere il cervello e mettere in paraformaldeide 4% durante la notte a 4 ° C. </li><li> Disidratare cervello mettendo da paraformaldeide direttamente in EtOH sempre più concentrata a temperatura ambiente: 25% EtOH, 1 giorno, 50% EtOH, 1 giorno, 75% EtOH, 1 giorno, 95% EtOH, 2 giorni e il 100% EtOH, 2 giorni . </li><li> Chiarire tessuto cerebrale intorno ai vasi sanguigni immergendo il cervello perfuso in salicilato di metile per 2 giorni a temperatura ambiente. </li><li> Vascolarizzazione di tutto il cervello unsectioned chiarito può essere ripreso con il cervello immerso in salicilato di metile sotto un microscopio da dissezione (Fig. 1) (MZFL microscopio Leica III, Leica Microsystems, Bannockburn, IL) o microscopio campo chiaro (Fig. 2) (Leica DM / LS, Leica Microsystems). </li><li> Reclarificationpuò essere fatto se il tessuto non è completamente eliminato. Dal cervello salicilato di metile, il trasferimento, al 95% EtOH per 2 giorni, 100% EtOH per 2 giorni, e salicilato di metile per 2 giorni. </li></ol> 4. Micro-CT Imaging o istologica Application-Preparazione del tessuto <ol><li> Il cervello può essere ripreso con micro-CT subito dopo chiarimenti o dopo il re-idratazione (Fig. 4). </li><li> Per preparare il tessuto cerebrale per l'analisi istologica, reidratare il cervello attraverso seriale EtOH diluito: 100% EtOH, 1 giorno, 95% EtOH, 1 giorno, 75% EtOH, 1 giorno, 50% EtOH, 2 giorni, il 25% EtOH, 2 giorni ; e conservare in PBS. Il cervello può essere quindi inclusi in paraffina utilizzando una procedura standard. </li></ol> 5. Rappresentante Risultati A seguito di fusione vascolare, la cerebrovasculature può essere visto macroscopicamente sulla superficie del cervello (Fig.1a). L'albero vascolare all'interno del parenchima può essere visualizzata precisa quanto segue (Fig. 1B). La struttura dettagliata vascolarepuò essere ripreso e analizzato al microscopio campo chiaro (Fig. 2), dissezione portata (Fig. 3), e con micro-TAC (Fig. 4). Utilizzando il microscopio chiaro, il sistema vascolare può essere vista a diversi piani focali senza sezionare il cervello (Fig. 2A), così come microvasi individuali a maggiore ingrandimento (Fig. 2B). In un ambito di dissezione, si può vedere l'intera struttura vascolare in un unico piano focale, permettendo una migliore visualizzazione della struttura tridimensionale della cerebrovasculature (Fig. 3). Le immagini scattate sotto un microscopio da dissezione può mostrare morfologia grande nave e vascolarizzazione intero cervello, ma mancano i dati riportati nelle immagini scattate con la microscopia brightfield (Fig. 2B). Questa tecnica ci ha permesso di individuare i pescherecci irregolari nel nostro modello sperimentale topo adulto BAVM 2. La Figura 5 mostra un esempio dei vasi stessi irregolari rilevate da micro-TAC (Fig. 5A) e microscopio a campo chiaro (Fig. 5B). Insieme, questi dati dimostrano che siamo in grado di analizzare tlo stesso campione con strumenti di imaging più dopo la fusione vascolare. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/2958/2958fig1.jpg"> Figura 1. Cervello di topo intero successivo getto vascolare. Prima (A) e dopo (B) chiarificazione con salicilato di metile solvente. Le navi possono essere chiaramente visualizzate sulla superficie del cervello (A) e nella procedura di chiarificazione parenchima seguente (B). <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/2958/2958fig2.jpg"> Figura 2. Immagini al microscopio di Brightfield chiarito cerebrali vascolari fuso. Cervello può essere ripreso in diversi piani e livelli diversi di ingrandimento. Scale Bar 200μm (A) e 50 micron (B). <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/2958/2958fig3.jpg"> Figura 3. Dissezione immagine al microscopio a 1x mostrando tutta topo adulto cerebrovasculature cervello da una vista dorsale. &lt;img alt = "Figura 4" src = "/ files/ftp_upload/2958/2958fig4.jpg" /&gt; Figura 4. Micro-CT scansione delle immagini del cervello stesso intero topo adulto mostrato in Figura 3 da una vista dorsale. <img alt="Figura 5" src="/files/ftp_upload/2958/2958fig5.jpg"> Figura 5. Applicazione del metodo di fusione vascolare per rilevare una malformazione arterovenosa cerebrale. A) Micro-TAC del cervello fuso vascolare mostra regione allargata, irregolari AVM-come navi in ​​emisfero destro da una vista ventrale. Immagine ingrandita della regione (scatola bianca) viene mostrato sulla destra. B) Lo stesso vasi irregolari visualizzati al microscopio campo chiaro con ingrandimento 50x. Scala bar 50 micron.

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Procedure sperimentali per l&#39;utilizzo di animali da laboratorio sono stati approvati dalla cura degli animali e del Comitato Istituzionale uso della University of California, San Francisco (UCSF).

Riportiamo qui un metodo per la fusione di cerebrovasculature topo adulto che può essere ripreso con diverse modalità. L&#39;applicazione di questo metodo al BAVM modello di malattia consente l&#39;analisi 3D dei vasi irregolari. Potenziali futuri studi includono la quantificazione dei micro-CT immagini, analisi istologica dei tessuti, e la diagnosi di progressione della malattia vascolare. Problemi comuni riscontrati e suggerimenti Perfusione completa del sistema vascolare del cervello non è sempre raggiunto. Avere una pressione sufficiente a raggiungere i vasi sanguigni distale senza rompersi l&#39;atrio sinistro e l&#39;aorta è una sfida. Per superare questo problema, applicare una pressione costante di circa 100 mmHg. Inoltre, regolare l&#39;ago grado di garantire deflusso appropriata di fusione agente nell&#39;aorta. E &#39;importante che le arterie carotidi non si limita così l&#39;agente di casting può raggiungere i vasi cerebrali. Procedure critiche che correlano con il miglioramento dei piccoli vasi perfusione sono: (1) adeguata compensazione del sangue dai vasi, (2) filtrazione del agente di casting, e (3) posizionamento dell&#39;ago durante l&#39;iniezione agente di casting. Si deve prestare attenzione per evitare l&#39;iniezione di casting agent in atrio sinistro e del polmone. Altri ricercatori sono riusciti a perfusi del mouse 3 e 4 ratto cerebrovasculature senza l&#39;utilizzo di ulteriori procedure. Analisi manuale di Microfil vasi perfusi di contrasto con hemotoxylin ha mostrato 93% nave perfusione lumen 5. Sempre scartare o completamente pulire qualsiasi tipo di strumento che viene a contatto con l&#39;agente di fusione in quanto dovrà polimerizzare rapidamente, e gli strumenti non possono essere utilizzati per soggetti multipli. Chiarimento del tessuto cerebrale circostante il mouse può essere impegnativo. A seguito di immersione in salicilato di metile, il tessuto può apparire opaca, rendendo difficile l&#39;imaging nave. Assicurare adeguata disidratazione e chiarificazione dovrebbe risolvere questo problema. Posizionamento tessuto cerebrale su un bilanciere durante l&#39;alcool metilico e di strattamento alicylate può migliorare chiarificazione dei tessuti. Inconvenienti della Tecnica I limiti di questa tecnica sono: (1) è necessario per iniettare la soluzione di agente di casting immediatamente dopo la miscelazione come sarà addensare rapidamente dopo il catalizzatore è aggiunto (2) l&#39;agente di casting riempie vasi di conduttanza di grandi dimensioni facilmente, ma non affidabile riempire navi più piccole, come le arteriole (vasi di resistenza) e capillari (vasi nutritivi) e (3) non è il miglior contrasto radiopaco per la micro-TC, anche se alcuni gruppi preferiscono Microfil per la micro-TC 1,6. Tuttavia, seguendo i suggerimenti proposti in precedenza, tra cui posizionamento dell&#39;ago, le posizioni nave e pressione di perfusione, fusione completa di navi più piccole può essere raggiunto. L&#39;adattabilità a vari strumenti di analisi rende questo agente di un prezioso strumento per analizzare la struttura cerebrovascolari, tra cui la circolazione arteriosa e venosa, con variprospettive. Le applicazioni della tecnica Il vantaggio di questo metodo è il suo potenziale applicazione ampio. Il cast riempie tutte le navi, comprese le arterie, vene e capillari di tutti i tessuti all&#39;interno del corpo, così le strutture vascolari in molti organi di diverse specie possono essere analizzati. In precedenza, altri gruppi hanno usato questa perfusione per grandi e piccoli 7 8 unità umani, scimmia 9, 10 pecore, ratto 4,11,12 e mouse 3,13. Mostriamo ora la prova di usare questa tecnica per analizzare la struttura dei microvasi nel cervello di topo, negli stati sani e malati 2. In aggiunta, ci sono soluzioni Microfil con diverse viscosità a disposizione di perfusione vasi di diverse dimensioni e colori diversi per migliorare la visualizzazione dei vasi in vari organi. Per esempio, il rosso può essere facilmente visibili nel parenchima cerebrale pallido e giallo contrasta bene conrosso scuro miocardio. Inoltre, poiché il materiale è radiopaco, vasi può essere ripreso con micro-TC per ottenere un&#39;immagine 3D ruotabile. Il tessuto può essere utilizzato anche per le sezioni di paraffina e l&#39;analisi istologica dopo essere stato fotografato. Conclusione Si dimostra qui un protocollo per fare un cast vascolari dei vasi sanguigni del cervello di topo adulto, che può essere adattato usando una varietà di tecniche di analisi per studiare la struttura morfologica del cerebrovasculature. Abbiamo anche fornito prove per l&#39;applicazione di questo metodo per un modello di stato di malattia BAVM, rappresentata dal allargata, i vasi di forma irregolare che il sangue arterioso al shunt da circolazione venosa. Ci sono una varietà di metodi di fusione vascolare disponibili. Il protocollo semplice forniamo qui per un cast vascolare può essere utilizzato come uno strumento per valutare la vascolarizzazione del cervello di topo adulto utilizzando varie modalità di imaging.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Note </td></tr><tr><td> Microfil </td><td> Flowtech, Inc. </td><td> MV130 </td><td> 4 mesi shelf life </td></tr><tr><td> Salicilato di metile </td><td> Fisher Scientific </td><td> O3695-500 </td><td> per chiarire i tessuti </td></tr></tbody></table>

casting cerebrovascolare del topo adulto per l&#39;imaging 3d e analisi morfologica

Cerebrovascular Casting of the Adult Mouse for 3D Imaging and Morphological Analysis

Di imaging vascolare è di fondamentale importanza nella diagnosi clinica e la gestione delle malattie cerebrovascolari, come malformazioni artero-venose cerebrali (BAVMs). Modelli animali sono necessari per lo studio delle terapie eziopatologia e le potenzialità di malattie cerebrovascolari. Imaging del sistema vascolare in animali di grandi dimensioni è relativamente facile. Tuttavia, lo sviluppo di metodi di imaging vaso di modelli murini della malattia del cervello è auspicabile a causa del costo e la disponibilità di organismi geneticamente modificati linee del mouse. Imaging del murino albero vascolare cerebrale è una sfida. Negli esseri umani e animali più grandi, il gold standard per la valutazione della angioarchitecture al macrovascolari (conduttanza) di livello è x-ray catetere contrasto a base di angiografia, un metodo non adatto per piccoli roditori. In questo articolo, presentiamo un metodo di fusione cerebrovascolari che produce uno scheletro durevole del letto vascolare intero, comprese le arterie, vene e capillari che possono essere analizzati utilizzando molti dmodalità ifferent. Fusione completa dei microvasi della cerebrovasculature mouse può essere difficile, tuttavia, queste sfide vengono affrontate in questo step-by-step del protocollo. Attraverso la perfusione intracardial del materiale di colata vascolare, tutte le navi del corpo sono fuso. Il cervello può quindi essere rimosso e chiarito utilizzando il salicilato di metile, solventi organici. Tre immagini tridimensionali dei vasi sanguigni del cervello possono essere visualizzati e getta con qualsiasi microscopio brightfield convenzionali o microscopio da dissezione. Il cerebrovasculature fuso può essere ripreso e quantificati utilizzando micro-tomografia computerizzata (micro-CT) 1. Inoltre, dopo essere stato fotografato, il cervello fuso possono essere inclusi in paraffina per l&#39;analisi istologica. Il vantaggio di questo metodo di fusione vascolare rispetto ad altre tecniche è il suo adattamento ampio per vari strumenti analitici, tra cui l&#39;analisi microscopica campo chiaro, la TC a causa delle caratteristiche radiopacoteristic del materiale, nonché l&#39;analisi istologica ed immunoistochimica. Questo uso efficiente di tessuto può salvare l&#39;utilizzo degli animali e ridurre i costi. Abbiamo recentemente dimostrato applicazione di questo metodo per visualizzare i vasi sanguigni irregolari in un modello murino di BAVM adulti a livello microscopico 2, e fornire altre immagini dei vasi malformati ripreso da micro-TC. Anche se questo metodo ha inconvenienti e non possono essere l&#39;ideale per tutti i tipi di analisi, si tratta di una semplice tecnica pratica che può essere facilmente appreso ed ampiamente applicata al casting vascolari dei vasi sanguigni in tutto il corpo.

In questo articolo vi presentiamo una semplice tecnica pratica per la fusione cerebrovascolari che è facile da eseguire e possono essere utilizzati per l&#39;immagine dell&#39;albero vascolare del cervello di topo adulto.

Casting cerebrovascolare del topo adulto per l&#39;imaging 3D e analisi morfologica

L'imaging vascolare è fondamentale per la diagnosi clinica e la gestione delle malattie cerebrovascolari, come le malformazioni arterovenose cerebrali (BAVM).

L'obiettivo generale di questa procedura è visualizzare la vascolarizzazione cerebrale del topo adulto in 3D. Questo risultato si ottiene innanzitutto aprendo la cavità toracica e rimuovendo tutto il sangue dalla vascolatura mediante perfusione orale di PBS con eparina. Successivamente alla perfusione, un agente di colata viene iniettato nel ventricolo sinistro per perfondere l'intero sistema circolatorio. Il cervello perfuso viene quindi rimosso e fissato in paraformaldeide.L'ultimo passaggio della procedura consiste nella disidratazione e nella chiarificazione del tessuto cerebrale con etanolo e salicilato di metile. Alla fine, si possono ottenere risultati che mostrano un cervello trasparente di topo, il cui albero vascolare può essere visualizzato al microscopio in campo chiaro o al microscopio stereoscopico, nonché mediante scansione micro-TC. Ciao, mi chiamo Spen Walker dell'Università della California di San Francisco.Oggi realizzeremo una calco vascolare del cervello di topo adulto. I principali vantaggi di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti, come l'angiografia, sono che può essere applicata a piccoli animali come il topo, non richiede l'uso di materiali radioattivi ed è una procedura relativamente semplice da eseguire.Ha permesso l'adattamento a diversi strumenti analitici, inclusi l'analisi in campo chiaro, l'analisi microscopica, la scansione TC, grazie alla caratteristica radiopaca del materiale, nonché l'analisi istologica e immunoistochimica. Ora iniziamo. Anestetizzare il topo mediante iniezione intraperitoneale di ketamina e xilazina diluite in soluzione fisiologica e verificare l'anestesia completa mediante pinzatura della zampa.Dopo aver confermato l'anestesia, utilizzare le forbici per praticare un'incisione trasversale sul torace appena al di sotto del processo xifoideo. Successivamente, tagliare il diaframma e quindi risalire tra il segmento dorsale e ventrale della gabbia toracica. Per esporre la cavità toracica, sollevare lo sterno e la parete toracica adiacente e fissarli con un emostatico al fine di esporre il sacco pericardico.Quindi aprire il sacco pericardico con pinzette, se necessario, per esporre il cuore. Con la pompa di perfusione impostata a 100 millimetri di mercurio, iniziare a perfondere PBS contenente cinque unità per millilitro di eparina, riscaldato a 37 gradi Celsius. Inserire l'ago ottuso da 22 gauge collegato al deflusso della pompa nel ventricolo sinistro in prossimità dell'apice del cuore. Tagliare immediatamente.Aprire l'atrio destro per consentire l'efflusso del sangue sistemico e continuare a lavare fino a quando il sangue non è stato rimosso dalla circolazione. In primo luogo, preparare una soluzione di agente di colata mescolando cinque millilitri di diluente con quattro millilitri del composto filtrato. Successivamente, aggiungere 450 microlitri dell'agente indurente e assicurarsi di utilizzare la soluzione di agente di colata entro 20 minuti.Mescolare la soluzione dell'agente di colata immediatamente prima dell'uso. Per garantire la viscosità corretta, aspirare la soluzione dell'agente di colata in una siringa da 10 millilitri. Applicare un ago smussato da 20 gauge alla siringa e riempire l'ago con la soluzione.Inserire l'ago nel ventricolo sinistro attraverso lo stesso foro utilizzato per il lavaggio del sangue, quindi fissare l'ago in posizione con una pinza emostatica. Iniettare manualmente la soluzione dell'agente di stampo nel ventricolo sinistro a una velocità di circa tre millilitri al minuto, poiché una pressione eccessiva potrebbe causare un flusso errato o una potenziale rottura dei vasi durante l'iniezione. Osservare segni di perfusione riuscita, come la visualizzazione dell'agente di stampo nei vasi intestinali e epatici, la discolorazione degli arti distali e la discolorazione del naso e della lingua. Riassestare l'ago se necessario per ottenere una perfusione adeguata.Rimuovere il cervello e collocarlo in paraformaldeide al 4% per tutta la notte a quattro gradi Celsius. Successivamente, disidratare il cervello nell'arco di sette giorni, ponendo direttamente il cervello in etanolo di concentrazione crescente a temperatura ambiente, partendo dal primo giorno con etanolo al 25%. Una volta disidratato il cervello, chiarificare il tessuto cerebrale intorno ai vasi sanguigni immergendo il cervello perfuso in salicilato di metile per due giorni a temperatura ambiente; dopo due giorni, la vascolarizzazione dell'intero cervello chiarificato può essere visualizzata senza sezionamento, immergendolo in salicilato di metile sotto un microscopio a campo chiaro, nonché con un microscopio stereoscopico o una scansione micro-CT. Mediante microscopia a campo chiaro, la vascolarizzazione può essere osservata a diversi piani focali senza sezionare il cervello, così come i singoli microvasi a ingrandimento maggiore.Mostrato qui nel pannello inferiore. Con un microscopio stereoscopico, è possibile osservare l'intera struttura vascolare cerebrale in un singolo piano focale, consentendo una migliore visualizzazione della sua struttura tridimensionale. Questa immagine mostra la morfologia dei vasi di grandi dimensioni e la vascolarizzazione dell'intero cervello, ma manca dei dettagli visibili nelle immagini ottenute con microscopia in campo chiaro.La scansione micro-CT consente la visualizzazione tridimensionale della vascolarizzazione e permette la costruzione di modelli 3D ruotabili. Per visualizzare la vascolarizzazione, qui viene mostrata una struttura vascolare cerebrale anomala rilevata mediante micro-CT, confrontata con un'immagine al microscopio in campo chiaro della stessa malformazione vascolare. Complessivamente, questi dati dimostrano che lo stesso campione può essere analizzato utilizzando diversi strumenti di imaging dopo la realizzazione di un calco vascolare.Dopo aver visionato questo video, si dovrebbe avere una buona comprensione di come ottenere un calco dei vasi sanguigni del cervello adulto del topo utilizzando una soluzione di Microfil. Questa procedura comprende la rimozione del sangue dalla vascolarizzazione, l'iniezione intraventricolare della soluzione di Microfil, la raccolta e l'elaborazione del cervello adulto del topo e l'analisi della vascolarizzazione cerebrale mediante microscopia a campo chiaro. L'obiettivo generale di questo protocollo è visualizzare la vascolarizzazione cerebrale del cervello adulto del topo in tre dimensioni.

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Presentiamo un metodo per formare una finestra di imaging nel cranio topo che si estende millimetri ed è stabile per mesi senza infiammazione cerebrale. Questo metodo è adatto per studi longitudinali di flusso sanguigno, dinamica cellulare, e cellule / struttura vascolare con microscopia a due fotoni.

Un lucido e rinforzato Assottigliato cranio-Window a lungo termine Imaging del cervello di topo

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Impianto di finestra di imaging cranico in un modello murino: una procedura chirurgica per impiantare un vetrino coprioggetti a base di vetro per un accesso ottico stabile alle regioni del cervello murino

Fonte: Choi, J. P. et al. Induzione e imaging micro-CT di malformazioni cavernose cerebrali in modello murino. J. Vis. Exp. ( 2017)Questo video dimostra l'uso dell'imaging micro-CT per visualizzare le lesioni della malformazione cavernosa cerebrale (CCM) nel cervello di un topo. Descrive in dettaglio le fasi per la preparazione del campione, l'imaging e la ricostruzione dell'immagine 3D per valutare la densità e la posizione delle lesioni CCM nel tessuto cerebrale.

Imaging micro-CT con mezzo di contrasto di lesioni da malformazione cavernosa cerebrale in un cervello di topo

Utilizzando scansioni MRI (umane), software di imaging 3D e analisi immunoistologica, documentiamo i cambiamenti nei ventricoli laterali del cervello. La mappatura 3D longitudinale delle variazioni di volume del ventricolo laterale e la caratterizzazione dei cambiamenti cellulari periventricolari che si verificano nel cervello umano a causa dell'invecchiamento o della malattia vengono quindi modellati nei topi.

Modellazione 3D del laterale ventricoli e istologica Caratterizzazione del Tissue periventricolare di esseri umani e il mouse

L'utilizzo di più angoli per tagliare il cervello di topo cucciolo, miglioriamo su una fetta cerebrale acuto precedentemente descritto, che cattura le connessioni tra le maggiori strutture mesencefalo e proencefalo uditive.

Modifica di un Colliculo-talamo-corticale mouse Cervello Fetta, Incorporando stampa 3-D della Camera componenti e multi-scala Optical Imaging

Questo manoscritto descrive una procedura per monitorare il rimodellamento del cerebrovasculature durante accumulo di placca amiloide in vivo utilizzando longitudinale microscopia a due fotoni. Una preparazione assottigliato-teschio consente la visualizzazione di coloranti fluorescenti per valutare la progressione del danno cerebrale in un modello murino della malattia di Alzheimer.

Longitudinale<em&gt; In Vivo</em&gt; Imaging del Cerebrovasculature: Rilevanza per le malattie del sistema nervoso centrale

Questo protocollo dimostra l'induzione della malattia di malformazione cavernosa cerebrale in un modello murino e usi contrasto migliorato micro tomografia computerizzata per misurare il carico lesionale. Questo metodo aumenta il valore di modelli murini stabilito per lo studio delle basi molecolari e le terapie potenziali per malformazione cavernosa cerebrale e altre malattie cerebrovascolari.

Induzione e Micro-CT Imaging delle malformazioni cavernose cerebrali nel modello del topo

Lo scopo di questa tecnica è la visualizzazione ex vivo delle reti arteriliiche polmonari dei primi topi postnatali e adulti attraverso l'inflazione polmonare e l'iniezione di un composto a base di polimeri radio-opaco attraverso l'arteria polmonare. Vengono inoltre discusse le potenziali applicazioni per i tessuti castati.

Casting vascolare di polmoni di mouse postnatali adulti e precoci per l'imaging Micro-CT

Questo studio descrive i passaggi per ottenere immagini ad alta risoluzione del cervello di topo neonatale combinando la micro-tomografia computerizzata (micro-CT) e un agente di contrasto in campioni ex vivo . Descriviamo le analisi morfometriche di base per quantificare le dimensioni e la forma del cervello in queste immagini.

Imaging micro-CT e analisi morfometrica del cervello neonatale del topo

Il metodo dell'ago della stenosi bilaterale asimmetrica dell'arteria carotide comune è proposto per creare un modello murino per il deterioramento cognitivo vascolare e la demenza. Si traduce in risultati a lungo termine rispetto ai modelli precedentemente stabiliti ed è compatibile con la risonanza magnetica dal vivo. La rappresentazione visiva che dimostra la procedura fornisce una guida per padroneggiare l'intervento chirurgico.

Un modello murino per il deterioramento cognitivo vascolare e la demenza basato sulla stenosi dell'arteria carotide comune bilaterale asimmetrica guidata da ago

La microscopia intravitale consente lo studio di processi biologici dinamici come la rigenerazione dei tessuti e lo sviluppo del tumore. Il midollo osseo calvariale, un tessuto altamente dinamico, offre informazioni sull'emopoiesi e sulla funzione vascolare. L'utilizzo di un impianto di fissazione della testa biocompatibile stampato in 3D consente l'imaging longitudinale ripetitivo, migliorando la nostra comprensione delle dinamiche dei tessuti e del microambiente tumorale.

Imaging longitudinale intravitale della dinamica vascolare nel midollo osseo calvariale

Impara il casting cerebrovascolare del topo adulto per la visualizzazione 3D della vascolatura cerebrale. Questa tecnica semplice consente l'analisi morfologica con microscopia a campo chiaro e micro CT.

Casting cerebrovascolare del topo adulto per l'imaging 3D e analisi morfologica

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