JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 5:45 min. • July 8th, 2025
Le cellule T regolatorie, o Treg, sono una sottopopolazione specializzata di cellule T che esercita effetti immunosoppressivi per mediare l'omeostasi del sistema immunitario. Le Treg esprimono i marcatori della superficie cellulare CD4, CD25 e Neuropilina 1, Nrp1 e i fattori di trascrizione nucleari forkhead box P3, Foxp3 e Helios.
Per isolare le Treg dai linfonodi drenanti pancreatici di topo, o PDLN, posizionare una rete metallica su un tubo conico. Posizionare i PDLN sulla rete e macinare il tessuto per dissociarlo meccanicamente. Aggiungere un mezzo adatto sopra la rete, lavando le cellule nel tubo.
Centrifugare, rimuovendo le cellule morte e i detriti cellulari. Risospendere le cellule vitali nel terreno. Far passare le cellule attraverso un tappo filtrante montato su un tubo a fondo tondo per ottenere una sospensione omogenea di una singola cellula, eliminando eventuali grumi cellulari rimanenti.
Aggiungere anticorpi anti-CD4, anti-CD25 e anti-Nrp1 coniugati con fluorocromo. Gli anticorpi anti-CD4 e anti-CD25 si legano ai rispettivi antigeni di superficie cellulare sulle Treg. Contemporaneamente, l'anti-Nrp1 si lega ai recettori Nrp1.
Trattare le cellule con un tampone di fis
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