18 novembre 2012
Questo protocollo descrive una regolare manutenzione e cura per mantenere le condizioni ottimali per zebrafish allevamento. Il video illustra il protocollo per la manutenzione del sistema, regolarmente ad una casa, l'alimentazione, l'allevamento, e l'aumento di larve di zebrafish.
Questo protocollo descrive le cure e la manutenzione regolari di un laboratorio di pesci zebra. A causa dell'incremento dell'interesse nella ricerca sui pesci zebra, cresce anche la necessità di creare e mantenere un impianto per l'allevamento di pesci zebra. Sebbene esistano pubblicazioni sulla manutenzione di un laboratorio di pesci zebra, manca un protocollo video conciso.
In questo video vengono illustrate la manutenzione del sistema, l'alimentazione, l'acquacoltura e l'allevamento delle larve di pesce zebra. Ciao, sono ABH della Scuola di Scienze Mediche dell'Università. Ciao, sono Manchi dell'Istituto Thee.
Oggi vi mostreremo le operazioni di cura e manutenzione regolari di un laboratorio di pesci zebra. I pesci zebra stanno diventando sempre più popolari nella ricerca genetica, farmacologica e comportamentale. Grazie alla loro facile gestione e allo sviluppo rapido, sono particolarmente adatti alla modulazione genetica e all'esecuzione di schermate ad alto rendimento per farmaci.
Questa sezione fornisce indicazioni sull'allevamento del pesce zebra a quegli utilizzatori e ricercatori che stanno prendendo in considerazione l'allestimento di un nuovo impianto per pesci. Cominciamo. Diverse aziende offrono sistemi per pesci, ma noi utilizziamo sistemi prodotti da Aquatic Habitats.
Nel nostro laboratorio, i pesci zebra sono mantenuti a una temperatura compresa tra 26 e 28,5 gradi Celsius e in un ciclo luce/buio di 14 ore di luce e 10 ore di buio. I pesci zebra sono allevati in un sistema circolante, che filtra e aerifica continuamente l'acqua del sistema. Per mantenere la qualità dell'acqua necessaria per un ambiente acquatico sano, il sistema utilizza un insieme di filtri di diversi tipi all'interno del nostro impianto.
L'acqua proveniente dai serbatoi passa attraverso una piastra filtrante, un filtro a cartuccia, un filtro biologico, un filtro a carboni attivi e un filtro UV prima di essere ricircolata nel serbatoio. Nel sistema per zebrafish viene utilizzata acqua disclorata o invecchiata. L'acqua può essere disclorata lasciandola riposare per almeno 48 ore.
Verificare giornalmente il pH dell'acqua del sistema e mantenerlo compreso tra 6,8 e 7,5. Utilizzando bicarbonato di sodio, gli acquari devono essere puliti regolarmente. Per pulire un acquario, chiudere il flusso d'acqua verso questo serbatoio, svuotare l'acqua in eccesso inclinando l'acquario all'indietro e rimuovere con cura il serbatoio dal sistema.
Preparare un serbatoio pulito e riempirlo con acqua del sistema. Trasferire con attenzione i pesci in questo serbatoio utilizzando una rete da pesca. Chiudere il coperchio e sostituire con cura l'etichetta con il nome del serbatoio.
Posizionare il serbatoio nel sistema. Riposizionare il tubo all'interno del serbatoio e riattivare l'alimentazione dell'acqua. Decontaminare la rete per pesci e il serbatoio con etanolo al 70%.
Risciacquare in acqua e lasciare asciugare. Prima del riutilizzo, i filtri del sistema di circolazione devono essere controllati e sostituiti regolarmente per garantirne il corretto funzionamento.
Il filtro da 120 micron viene controllato e riposizionato nella direzione del flusso d'acqua ogni giorno prima di essere sostituito. Il filtro a cartuccia deve essere cambiato settimanalmente. Per sostituire il filtro a cartuccia, rimuoverlo con una chiave inglese o a mano.
Posizionare un foglio di plastica o un asciugamano al di sotto per evitare fuoriuscite d'acqua. Inserire un nuovo contenitore, filtro e rimontare l'unità nel sistema. Stringere con cura a mano e poi con una chiave inglese.
Se necessario, il filtro al carbone deve essere sostituito ogni due settimane. Per sostituire il filtro al carbone, rimuoverlo con attenzione. Utilizzando una chiave inglese, eliminare il carbone attivo presente nel filtro e sostituirlo con nuovo carbone attivo.
Rimontare il supporto del carbone e reinserirlo nell'unità del filtro. Rimettere l'unità del filtro nel sistema. Accendere il sistema e verificare se l'acqua scorre verso il filtro.
Il filtro biologico deve essere pulito ogni sei mesi. Per sostituire il filtro biologico, rimuovere il filtro dal sistema. Rilasciare la pressione dal filtro premendo il pulsante di sfiato.
Svitare il filtro e rimuovere il coperchio. Versare il contenuto in un contenitore setacciato per separare il Cy Oex dall'acqua. Se il Cy Oex è molto sporco, sostituirlo.
Riempire il filtro con il nuovo citoplasma assiale. Riempire l'unità con acqua di sistema. Chiudere il coperchio del filtro, rimontare l'unità e accenderla.
I filtri UV vengono utilizzati per controllare i contaminanti biologici e devono essere sostituiti ogni nove-dieci mesi. I pesci zebra possono essere nutriti con cibo secco o cibi vivi come gamberetti d'acqua salata; le uova di gamberetti sono disponibili nei negozi di animali locali e possono essere schiuse in laboratorio seguendo i semplici passaggi descritti qui. Sciogliere il sale marino Red Sea nell'acqua del sistema per ottenere una soluzione di 30-35 grammi per litro.
Riempire il contenitore per Artemia con acqua salata e aggiungere le uova di gamberetti in una concentrazione di 1,2 cucchiai per litro. Aerate vigorosamente l’incubatore con una pompa per aria e lasciare che le uova di Artemia si sviluppino per circa 48 ore. Rimuovere il tubo dell’aria e lasciare decantare la coltura per quattro o cinque minuti.
Gli artemia fecondati si accumulano sul fondo dell'incubatore; utilizzando il rubinetto in fondo all'incubatore, scartare il primo flusso, che contiene le uova non fecondate. Successivamente raccogliere gli artemia fecondati. Separare gli artemia dall'acqua salata.
Utilizzando una rete da raccolta per gamberetti d'acqua salata, risciacquare i gamberetti in un contenitore con l'acqua del sistema. I gamberetti si concentrano in alto numero sul fondo del contenitore e sono ora pronti per l'alimentazione dei pesci zebra. Somministrare i gamberetti ai pesci utilizzando una pipetta o un contagocce.
La quantità di cibo distribuito dipende dalla dimensione della popolazione di ciascun serbatoio. Dopo l’immissione del cibo nell’acqua, i pesci affamati nuotano per catturare gli artemi, attività importante per il loro esercizio regolare. L’alimentazione con cibo secco può essere effettuata utilizzando un habitat acquatico, un distributore automatico di cibo per pesci oppure un semplice cucchiaio.
I pesci zebra iniziano la riproduzione all'inizio della luce. Le uova possono essere ottenute tramite riproduzione in vasca o accoppiata. Mentre la riproduzione in vasca è più efficiente dal punto di vista lavorativo ed è utilizzata nella raccolta regolare di embrioni, l'accoppiamento è preferito quando è necessario effettuare lo screening di geni o mutazioni nella riproduzione in vasca; assemblare il riproduttore in vasca e immergerlo lentamente in un acquario.
Dopo l'accensione della luce, lasciare l'allestimento per l'accoppiamento in vasca per circa 15 minuti, permettendo ai pesci di riprodursi prima di rimuovere l'animale riproduttore dalla vasca e raccogliere le uova. L'accoppiamento a coppie viene allestito nel tardo pomeriggio, assemblando il contenitore per l'accoppiamento e riempiendolo con acqua del sistema. Trasferire una femmina e un maschio su lati opposti del contenitore.
Le femmine possono essere distinte dai maschi a causa del ventre più grande. Rimuovere il divisorio la mattina successiva. Poco dopo l'inizio della luce, lasciare che i pesci si accoppino senza disturbarli per 20 minuti o fino a quando un numero sufficiente di embrioni viene deposto sul fondo del serbatoio.
Dopo l'accoppiamento, restituire i pesci ai loro acquari. Raccogliere le uova con un colino. Lavare accuratamente gli embrioni.
Con acqua del sistema. Trasferire gli embrioni in una piastra di Petri risciacquando il setaccio con il mezzo per embrioni. Gli embrioni possono essere osservati al microscopio.
Gli embrioni non fecondati devono essere separati dagli embrioni fecondati utilizzando un ago e una pipetta. Dopo che le uova fecondate sono state separate da quelle non fecondate, vengono mantenute in un incubatore a circa 28,5 gradi Celsius per 72 ore, fino a quando le larve non sono schiuse. Ora le larve sono uscite dai COR e nuotano liberamente.
I larve devono essere alimentate a partire da cinque giorni dopo la fecondazione e mantenute in acqua stagnante per alcuni giorni prima di trasferirle nel sistema. Trasferire delicatamente le larve in un serbatoio contenente una schermatura di dimensioni ridotte, di circa 300-400 micron. Dopo 14 giorni, i serbatoi contenenti le larve possono essere inseriti nel sistema e alimentati con un debole flusso di acqua in circolazione.
Devono essere utilizzati deflettori di dimensioni diverse a seconda delle dimensioni delle larve e dei pesci adulti. Di solito occorrono tre mesi perché gli embrioni si sviluppino in adulti sessualmente maturi. Grazie per aver seguito il video e buona fortuna per i vostri esperimenti.
Questo protocollo descrive la manutenzione e le cure regolari necessarie per un allevamento ottimale dei zebrafish. Include procedure dettagliate per la manutenzione del sistema, l'alloggiamento, l'alimentazione, la riproduzione e l'allevamento delle larve di zebrafish.
L'adozione di protocolli solidi di allevamento del pesce zebra favorisce modelli preclinici affidabili per la ricerca farmacologica e genetica. Pratiche standardizzate di alloggio, alimentazione e riproduzione riducono la variabilità biologica e migliorano la riproducibilità dei dati nei flussi di lavoro della fase iniziale di scoperta. Ciò consente schermate fenotipiche costanti e la validazione di bersagli in sistemi pertinenti alle malattie.
L'allevamento del pesce zebra si integra nel percorso della scoperta, dalla validazione iniziale del bersaglio fino all'identificazione del composto leader e al profilo preclinico, fornendo una piattaforma biologica stabile e scalabile.