Modello Rat di emato-encefalica Turbativa Barriera per consentire mirato Therapeutics neurovascolare

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di interrompere la barriera emato-encefalica. Ciò si ottiene ponendo prima l'animale in anestesia endotracheale con una via aerea endotracheale. Successivamente, viene esposta la biforcazione dell'arteria carotide comune.

Quindi un catetere viene inserito nell'arteria carotide esterna. Infine, viene somministrato il mannitolo. In definitiva, si possono ottenere risultati che mostrano la rottura della barriera emato-encefalica attraverso lo stravaso del colorante blu di Evan.

Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti di terapia intra-arteriosa è che consente l'ingresso nel cervello di farmaci che normalmente non attraversano la barriera emato-encefalica in condizioni fisiologiche. Questo ha implicazioni nel campo delle neuroscienze perché ci permette di testare nuove terapie che hanno una scarsa capacità di attraversare la barriera emato-encefalica. Le implicazioni di questa tecnica si estendono alla neuro-oncologia perché molti agenti chemioterapici non attraversano la barriera emato-encefalica.

Bene, sebbene questo metodo ci fornisca informazioni sulla nuova oncologia, può anche fornirci informazioni su altri disturbi neurologici trattati con farmaci con scarsa permeabilità della barriera ematoencefalica. Ci auguriamo che la dimostrazione visiva di questo metodo consenta ai ricercatori e alla familiarità con la chirurgia animale di utilizzare questa tecnica nei loro laboratori. Per iniziare, prepara una soluzione di mannitolo al 25% e verifica che non ci siano cristalli.

Se sono presenti cristalli, scioglierli mettendo la fiala in un bagno d'acqua a 80 gradi Celsius e agitare. Registrare periodicamente la massa dell'animale e preparare due siringhe da 12 cc di propofol da erogare a una velocità di 0,1 millilitri al minuto. Dopo aver anestetizzato l'animale in una camera di induzione, posizionarlo su un asciugamano usa e getta e radergli il collo e l'interno coscia.

Rimetti l'animale nella camera di induzione per tre minuti. Per prepararsi all'intubazione per intubare il ratto, iniziare preparando un tubo endotracheale con un catetere IV. Il tubo deve essere abbastanza grande da consentire un flusso d'aria adeguato, ma abbastanza piccolo da entrare nella trachea senza causare danni.

Per creare uno stilo, estrarre l'ago dal catetere di plastica e rompere con cautela l'ago. A circa un centimetro dalla sua punta affilata, reinserire l'ago nel catetere. Quindi, appendi il topo per i denti su una superficie angolata, accendi una luce direttamente contro il collo dell'animale allineato tra le sue orecchie.

Quindi, inserisci una piccola spatola nell'orofaringe. Circa tre centimetri. Sollevare verso l'alto mentre si estrae delicatamente la lingua dalla bocca.

Visualizza l'apertura della trachea come un piccolo foro che si apre e si chiude. Ad ogni respiro, inserire delicatamente il catetere nel foro, facendo attenzione a non forzarlo nella cartilagine della trachea sensibile. Impostare il ventilatore a un litro al minuto e 60 BPM e poi il fluoro al 2%, quindi collegare il catetere al ventilatore e fissare il tubo alla superficie operativa.

Verificare che l'animale sia anestetizzato eseguendo un pizzicamento delle dita. Fissare il percorso fissando con nastro adesivo tutti e quattro gli arti della coda alla superficie operativa. Strofina tre volte il collo rasato e i siti inguinali con sapone alla clorexidina.

Quindi strofinare con clorexidina. Risciacquare tre volte. Collegare una siringa di propofol a un set di prolunga per flebo e montare la siringa sulla pompa di infusione.

Successivamente, usando un bisturi, tagliare la pelle della coscia rasata senza tagliare il muscolo. Quindi usa una pinza per aprire l'incisione e localizzare la vena femorale e tirare via il tessuto sopra l'arteria per esporre il vaso. Inserire un catetere endovenoso veterinario mono eiezione da 26 G nella vena.

Una volta che l'ago perfora la parete della vena, diventerà più facile spingere. Ritrarre l'ago e spingere il catetere nel vaso da tre a cinque minuti. Dopo aver iniziato l'infusione di propofol, passare il gas anestetico a una miscela di 50% O2 e 50% N due O e spegnere l'isoffluoro.

Per esporre la biforcazione dell'arteria carotide comune, inizia usando una lama di bisturi per praticare un'incisione sulla linea mediana sul collo. Tagliare la plancia superficiale lungo la linea mediana per raggiungere il muscolo ioide sternale sopra la trachea. Sposta il tessuto lateralmente per visualizzare un gruppo di tre muscoli, lo ioide sternale, il gastrico e il mastoideo sternale che formavano il triangolo carotideo del ratto con una pinza o una forbice.

Separare la fascia tra i muscoli del triangolo carotideo per esporre l'arteria carotide. Usa il cauterismo bipolare per dividere i vasi minori insieme a garze e tamponi di cotone Per controllare l'emorragia, usa i divaricatori per tenere separati i muscoli con una pinza. Sposta il tessuto fuori dalla carotide e trova la biforcazione.

Esporre l'arteria occipitale appena distale alla biforcazione. Cauterizzarlo tra una pinza e l'altra e utilizzare un elettrocauterizzazione per separarlo con una pinza. Esporre completamente la biforcazione carotidea e la maggior parte possibile dell'arteria carotide esterna o ECA.

Esporre l'arteria tiroidea superiore che si dirama dall'ECA distalmente all'arteria occipitale. Cauterizzarlo tra una pinza e separarlo per cateterizzare l'ECA. Metti due lunghezze di seta da quattro sotto di essa.

Usa un emostatico e afferra un pezzo di sutura e ritrai il coly posteriore ECA con l'altra sutura. Legalo con il nodo del chirurgo il più possibile craniale, distalmente alla biforcazione e prossimalmente alla legatura permanente. Lega senza stringere il nodo di un altro chirurgo per rilassare l'arteria.

Irrigarlo con lidocaina all'1%, riempire il catetere con soluzione fisiologica eparinizzata. Quindi, posizionare una clip temporanea per vasi con un angolo il più vicino possibile alla biforcazione. Quindi fai scorrere il nodo sciolto verso la clip usando le micro forbici.

Fai un piccolo taglio nell'ECA appena prossimalmente alla legatura. Se la clip e la legatura sono sicure, non dovrebbero esserci sanguinamenti con il forcipe. Per controllare le pareti dell'ECA, inserire l'estremità smussata del catetere nel vaso con il nodo del chirurgo allentato.

Fissare il catetere. Legare l'arteria attorno al catetere, quindi rimuovere la clip e utilizzare un batuffolo di cotone per pulire l'area. Far avanzare il catetere di circa un millimetro distalmente alla biforcazione.

Usa una pinza per tenere l'arteria prossimale al nodo per assicurarti che il vaso sia immobilizzato. Per somministrare il mannitolo. Riempi un set di prolunga IV da otto pollici e una siringa da sei millilitri con mannitolo senza creare bolle d'aria.

Conservarlo a 37 gradi Celsius per visualizzare l'interruzione della barriera emato-encefalica, o BBBD somministrare due milligrammi per chilogrammo di Evans Blue al 2% attraverso un nuovo sito IV sulla gamba controlaterale all'infusione di propofol. Collegare il set di prolunga a un filtro da cinque micron e riempirlo di minol per rimuovere le bolle d'aria. Quindi attaccarlo al rubinetto di arresto senza creare bolle.

Somministrare mannitolo a 0,09 millilitri al secondo Per 25 secondi, osservare che il mannitolo raggiunga l'equilibrio con il flusso nella carotide comune in un punto appena prossimale all'arteria carotide interna, dovrebbe sembrare pulsare con la frequenza cardiaca del ratto. Assicurarsi che il mannitolo non fluisca verso il cuore, il che indica che il flusso ha superato la pressione sanguigna del ratto e può causare gravi complicazioni. La rottura della barriera emato-encefalica su un lato del cervello consente al blu di Evan di entrare e colorare di blu l'emisfero distrutto, mentre l'emisfero non distruttivo rimane invariato.

Qui è mostrato un esempio di un cervello senza interruzione della barriera emato-encefalica o BBBD, e qui c'è un esempio di un cervello colorato di blu dopo BBBD osmotica, notare che l'emisfero destro è colorato e che un po' di blu è entrato nell'emisfero sinistro vicino alla fessura longitudinale mediale a causa del mescolamento del flusso sanguigno nel cerchio di Willis. Questa tecnica apre la strada ai ricercatori per esplorare terapie che non attraversano la barriera emato-encefalica in un modello di ratto. Dopo aver visto questo video, dovresti essere in grado di interrompere la barriera cerebrale offuscata cateterizzando l'arteria carotide e infondendo una soluzione di manitolo direttamente nel cervello.