Indurre miointimale Iperplasia Versus aterosclerosi nei topi: Introduzione di due modelli validi

L'obiettivo generale del seguente esperimento è quello di introdurre due modelli animali validi che portino al restringimento dell'aorta attraverso diversi meccanismi. Il primo modello è il cateterismo con palloncino dell'aorta per creare lo sviluppo dell'iperplasia miointimale. In primo luogo, l'aorta addominale infrarenale viene esposta e bloccata.

Quindi l'aorta viene aperta con un'incisione trasversale e viene introdotto il catetere a palloncino. L'endotelio dell'aorta viene quindi denudato con il catetere gonfiato e l'intervento chirurgico è completato. Il secondo modello è una manipolazione dietetica di topi transgenici APOE null per creare placche aterosclerotiche.

Questi topi sono alloggiati in condizioni standard e alimentati con una dieta occidentale ricca di lipidi per quattro o sei mesi. In definitiva, l'analisi istologica dell'iperplasia miointimale indotta chirurgicamente e il modello di restrizione dietetica mostrano che determinano un diverso restringimento luminale. Oggi vi mostreremo due diversi modelli per indurre il restringimento luminale: il modello murino che utilizza un catetere a palloncino per indurre lesioni ai vasi sanguigni e il modello di sclerosi arteriosa.

Utilizzando topi transgenici nella dieta occidentale, il modello di catetere a palloncino può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della stenosi. Il modello murino mutante superiore omozigote transgenico viene utilizzato per studiare la fisiopatologia dell'aterosclerosi. Per il modello di iperplasia intimale, ottenere C 57 topi neri a sei J che pesano circa 25 grammi.

Mantienili in condizioni normali con una dieta normale. Dopo aver anestetizzato il topo con il 2% di fluoro, tagliare i peli addominali, fornire carprofene mediante iniezione sottocutanea per analgesia. Successivamente, in alternativa, disinfettare la pelle con iodio Provo ed etanolo all'80% in due cicli.

Ora controlla l'assenza di riflessi usando un pizzico di punta. Iniziare l'intervento separando la pelle e il muscolo lungo l'alba lineare. Quindi, avvolgere l'intestino in un guanto inumidito con soluzione fisiologica, quindi eliminare attentamente il tessuto adiposo, ricoprendo l'aorta addominale.

Ora esponi l'aorta infrarenale fino alla sua biforcazione. Fare attenzione a non ferire i vasi di ramo. Ora stringi l'aorta.

Per prima cosa posizionare un morsetto microchirurgico sull'aorta infrarenale prossimale per interrompere il flusso sanguigno. In secondo luogo, applicare un secondo morsetto distale accanto alla biforcazione aortica. Quando il flusso sanguigno viene interrotto, praticare una piccola incisione nell'aorta vicino al morsetto prossimale.

Inserire il catetere verso il morsetto distale dell'aorta per provocare una lesione endoteliale. Denudare l'aorta gonfiando con cautela il palloncino del catetere e tirando lentamente il catetere nella direzione del morsetto prossimale. Ripeti l'operazione, manovra due volte per un totale di tre gonfiaggi dell'aorta.

Ora rimuovi il catetere e chiudi l'incisione aortica utilizzando 10 suture di prolina da corsa. Con i punti di sutura in posizione, aprire con cautela il morsetto distale se c'è sanguinamento nel sito di autotomia dell'AOR. Richiudere il morsetto, individuare l'emorragia e fermarla con ulteriori punti interrotti.

Quando non ci sono sanguinamenti, aprire lentamente la pinza prossimale. Un polso aortico dovrebbe essere visibile distalmente all'incisione. Ora disponete gli intestini in C due.

Quindi, chiudi la parete addominale iniziando dallo strato muscolare utilizzando sei suture da corsa con prolina OTT. Quindi chiudere la pelle con cinque punti di sutura OTT e trasferire nuovamente il topo nella sua gabbia. Durante i primi tre giorni postoperatori, fornire metrazolo all'acqua potabile per il controllo del dolore.

Monitorare l'animale durante tutto il suo recupero, che dura circa 28 giorni. Per il modello di aterosclerosi, procurarsi topi di quattro settimane carenti di POE. Ospita questi topi in condizioni standard con una dieta occidentale ricca di lipidi per quattro o sei mesi.

Mantenere questa dieta per tutta la durata dell'esperimento. Sei ore prima del prelievo dell'aorta, togli l'accesso al cibo. Quindi preparare il topo per l'intervento chirurgico come descritto nella sezione precedente.

Inizia l'intervento aprendo il torace. Quindi, tagliare l'apice del cuore e perfonderlo sotto una leggera pressione con tre millilitri di aldeide paraforma al 4% attraverso la radice aortica per fissare l'aorta. Quindi liberare l'aorta dalla radice alla sua biforcazione.

Cerca di rimuovere quanto più tessuto adiposo possibile. Quindi, tagliare l'arco aortico e conservarlo in para formaldeide al 4%. Ora trasferisci il cuore e l'albero aortico in un piatto di silicone con PBS nel piatto.

Tagliare un'estremità dell'albero aortico e fissarlo sullo strato di silicone con spilli sottili. Aprire l'aorta longitudinalmente e lasciare che il tessuto aortico giaccia in PBS a temperatura ambiente per alcuni minuti. Quindi sciacquare una volta il fazzoletto con etanolo al 50% e immergerlo in un bagno di Sudan.

Tre, soluzione colorante per circa 15 minuti. Dopo la colorazione, sciacquare rapidamente il fazzoletto con etanolo al 50% per alcuni secondi per rimuovere solo il Sudan in eccesso. Tre risciacqui rimuoveranno troppa macchia, sciacqueranno immediatamente il tessuto con acqua distillata e procederanno con l'imaging Per il modello di iperplasia miointimale, sono state raccolte aorte di topo denudate, incorporate paraffina e colorate con cromo I rapporti Im sono stati calcolati dalle sezioni di colorazione tricromica misurando lo spessore dell'intima e del mezzo.

Utilizzando l'analisi computerizzata seguita dal calcolo del rapporto, lo spessore massimo della placca è stato misurato come lo spessore intimale massimo nel lume mediante albero morfo computerizzato. La percentuale di obliterazione luminale è stata calcolata come il rapporto tra il nuovo lume interno e il lume precedente. L'area della placca è stata calcolata sottraendo il nuovo lume interno dal lume precedente.

Le stesse analisi sono state eseguite su sezioni trasversali colorate con tricromo del modello di aterosclerosi a livello della valvola aortica, dell'arco aortico e dell'aorta discendente solo per il modello di aterosclerosi. L'aorta discendente è stata aperta longitudinalmente e colorata di rosso Sudan. L'area della placca e l'area aortica totale sono state misurate con l'ausilio di un computer per l'analisi di entrambi i modelli.

Altri metodi, come l'istopatologia e la microscopia a immunofluorescenza confocale, possono essere eseguiti per rispondere a domande come l'oblazione luminale, la morfologia e la cellularità. Grazie per aver guardato e buona fortuna con i tuoi esperimenti.