Il completo ed aggiornato "Rotifero Metodo Polyculture" per l'allevamento Prima Zebrafish Feeding

L'obiettivo generale del metodo di policoltura dei rotiferi è quello di sfruttare la produttività naturale e le caratteristiche biologiche dei rotiferi d'acqua salata per creare un ambiente che promuova una rapida crescita e la massima sopravvivenza delle larve di pesce zebra che si nutrono per la prima volta. Il vantaggio principale di questa tecnica è che riduce drasticamente la quantità di tempo e spazio necessari per allevare con successo un gran numero di larve di zebrafish da utilizzare negli esperimenti di ricerca. Iniziare la manutenzione della coltura dei rotiferi riempiendo il recipiente di coltura di alimentazione, o FCV, al 90% della capacità con acqua dolce pulita e declorata dosata con 10 grammi per litro di sali dell'acquario.

Assicurarsi che l'acqua sia ben miscelata e che tutto il sale sia completamente sciolto. Quindi, impostare il flusso d'aria nel recipiente in modo che mantenga un'ebollizione. Misurare la salinità del liquido con un rifrattometro.

Quindi, assaggia i rotiferi nel recipiente di coltura, o CV.Assicurati che la coltura sia ben miscelata. Quindi, raccogliere tre campioni da due a tre millilitri utilizzando una pipetta di trasferimento da diverse parti della coltura e combinare i campioni in una provetta. Trasferire da uno a due millilitri del campione combinato su una capsula di Petri.

Visualizzare il campione al microscopio da dissezione e verificare la qualità della coltura. Aggiungere 100 microlitri di soluzione di iodio al 50% di Lugol al campione per immobilizzare i rotiferi e contarli. Prelevare immediatamente un sottocampione da due millilitri con una pipetta di plastica e dosare un millilitro in un vetrino di conteggio Sedgewick Rafter.

Utilizzando il microscopio da dissezione, contare la maggior parte dell'area del vetrino necessaria per contare fino a 100 rotiferi intatti e il numero totale di uova attaccate ai rotiferi. Quindi, calcolare il numero di rotiferi per millilitro per un uso successivo. Avviare la raccolta rimuovendo l'alimentazione dell'aria e il filtro del filo interdentale.

Aprire lentamente la valvola nella parte inferiore del CV e lasciare che l'acqua fluisca delicatamente in un collettore di plancton con uno schermo a maglie da 53 micron. Raccogliere l'acqua che fuoriesce dal fondo del collettore dopo averla filtrata in un secchio o averla scaricata. Quindi, riempi una bottiglia con 10-15 grammi per litro di acqua salata pulita.

Capovolgere lo schermo sopra l'FCV e lavare i rotiferi nell'FCV con un leggero getto di acqua salata. Avviare il timer di dosaggio programmabile o PMT per fornire l'alimentazione all'FCV. Quindi, strofinare l'intero interno del CV con un tampone pulito.

Crea una nuova miscela da 15 grammi per litro in un secchio da cinque galloni per sostituire il volume di acqua perso durante il raccolto. Mescolare energicamente la soluzione fino a quando il composto non sarà completamente sciolto. Quindi, aggiungere la soluzione al CV.Quindi, sciacquare il filtro del filo interdentale con uno spray ad alta pressione.

Quando il filtro del filo interdentale è privo di detriti, rimetterlo nel CV.Regolare le velocità di alimentazione delle alghe erogate al CV modificando la durata di ciascun evento di dosaggio. Trascorse le 24 ore, ripetere il processo, iniziando la raccolta dei rotiferi rimasti nel FCV. Concentrare i rotiferi in due litri di acqua fresca, pulita, declorata con cinque grammi per litro di sale.

Questi possono essere conservati a quattro gradi Celsius come riserva di riserva, o utilizzati per nutrire le fasi successive dei pesci oltre a quanto descritto in questo protocollo. Raccogli gli embrioni di pesce zebra da un evento di deposizione delle uova versando gli embrioni deposti attraverso un colino da tè. E poi, risciacquare delicatamente con acqua di pesce sterile da una bottiglia di lavaggio in piastre di Petri.

Una volta raccolti tutti gli embrioni, incubarli. Inizia la fase di policoltura quando oltre il 90% delle larve schiuse nuota attivamente nella colonna d'acqua. Aggiungere 500 millilitri di coltura di rotiferi direttamente dall'FCV a un serbatoio di vivaio da 3,5 litri.

Quindi, versare delicatamente le larve da una capsula di Petri nella vasca del vivaio. Assicurarsi che non rimangano larve nel piatto. Aggiungere 500 millilitri di acqua di pesce pulita e condizionata da una fonte d'acqua dedicata all'acquario fino a un volume finale di un litro e 5 grammi per litro di salinità finale.

Osservare la vasca di policoltura almeno una volta al giorno per assicurarsi che i rotiferi e i pesci siano presenti e in crescita. Verificare che i rotiferi siano visibili in tutta la colonna d'acqua. Assicurarsi che i pesci siano visibili anche all'interno della colonna d'acqua e che nuotino tra i rotiferi.

È fondamentale valutare lo stato di ogni vasca su base giornaliera per assicurarsi che siano vivi e nuotino con rotiferi disponibili per tutte le larve di pesce. Dopo esservi assicurati che i rotiferi e i pesci stiano crescendo, iniziate il normale flusso d'acqua attraverso la vasca. Infine, posizionare uno schermo sopra la porta di scarico per assicurarsi che le larve non vengano espulse dal serbatoio.

Le prestazioni tipiche di una coltura di rotiferi sono state monitorate per un periodo di 30 giorni e hanno prodotto una densità media di coltura di 932 rotiferi per millilitro. E un massimo di 1.330 rotiferi per millilitro. La popolazione di rotiferi in una vasca di policoltura con zebrafish ha una densità media di rotiferi di 589,4 rotiferi per millilitro.

Il valore minimo di 481 rotiferi per millilitro è 10 volte migliore rispetto ai lavori pubblicati in precedenza. Il pesce zebra ha mostrato una crescita costante ogni giorno per un periodo di cinque giorni da una lunghezza totale media di 3,9 millimetri a 5,4 millimetri. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come allevare i rotiferi per l'uso in un sistema di policoltura ideato per soddisfare le esigenze nutrizionali del pesce zebra che si nutre per la prima volta.