Protocollo per lo sviluppo di un modello di osteotomia femorale in ratti albini Wistar

Questo modello di osteotomia del femore può aiutare i ricercatori a studiare il processo di guarigione delle fratture e valutare come un farmaco potrebbe influenzare la guarigione delle fratture. È un modello di roditore semplice e facile da seguire che può aiutare i ricercatori a identificare se un farmaco ha proprietà di guarigione ossea e comprendere il suo meccanismo d'azione. Anche se si concentra principalmente sull'osservazione e l'analisi della guarigione delle fratture, può anche fornire informazioni sulla patogenesi della malattia.

Questo metodo può guidare la ricerca futura sulla guarigione delle ossa in salute e malattia. Può essere utilizzato per valutare l'effetto di potenziali farmaci osteoanabolizzanti. Indurre una corretta linea di frattura e la fissazione della frattura con un K-wire sono impegnativi.

Un paio di sessioni di pratica dovrebbero aiutare. La semplicità e la riproducibilità di questo metodo sono evidenti nella sua dimostrazione visiva Pawan Pagaku, un giovane residente del mio laboratorio, aiuterà a dimostrare la procedura. Per iniziare posizionare il blocco di cera contenente cera fino a una profondità di 2,5 centimetri sul tavolo operatorio e coprirlo con tende sterili.

Dopo aver praticato un'incisione cutanea verticale di un centimetro sul lato laterale della coscia destra, esporre il muscolo vasto laterale separando la fascia profonda usando le forbici Metzenbaum. Dividere il vasto laterale in linea con le fibre muscolari fino a raggiungere l'asta del femore. Quindi, utilizzare l'ascensore periostale per liberare l'osso dai muscoli ad esso collegati.

Dopo aver iniettato l'anestesia locale dentro e intorno al periostio, creare una rientranza nel terzo centrale dell'asta del femore usando la lama chirurgica numero 15. Posizionare uno scalpello sulla rientranza e picchiettare delicatamente lo scalpello con un martello per fratturare completamente l'osso nel terzo centrale dell'albero. Fissare internamente la frattura utilizzando un filo K sterile di un millimetro tenuto con l'aiuto di un trapano elettrico a batteria.

Passare il filo K nel canale midollare del frammento distale attraverso il sito di frattura. Quindi, perforare il filo K attraverso l'estremità distale del femore. Dopo aver ridotto la frattura, far avanzare il filo K dall'estremità distale nel canale del frammento prossimale fino a quando non ottiene l'acquisto nella regione trocanterica.

Tagliare la parte distale del filo K che sporge attraverso la pelle usando un tagliafilo. Piegare la punta del filo K a circa 90 gradi usando le pinze e utilizzare una benda di garza imbevuta di Betadine per la medicazione del sito di spillo. Il filo K agisce come una stecca intramidollare per mantenere la frattura in una posizione ridotta.

Applicare pressione sull'area sanguinante utilizzando una garza sterile o una pinza arteriosa per fermare qualsiasi sanguinamento. Assicurarsi un'emostasi completa prima di chiudere la pelle utilizzando una sutura di nylon 4-0. Pulire la ferita con Betadine e coprirla con garza sterile e nastro adesivo a micropore.

Per la cura postoperatoria, riportare i ratti nelle loro gabbie e continuare a dare una dieta semi-sintetica standard, nonché antibiotici e analgesici per via intraperitoneale per cinque giorni dopo la procedura. Infine, valutare la guarigione ossea mediante radiografia del sito fratturato una volta alla settimana. Qui vengono mostrati i raggi X del femore del ratto con il filo K NC2 prima di indurre la frattura e un giorno dopo l'intervento chirurgico.

La guarigione della frattura viene monitorata radiologicamente eseguendo radiografie settimanali sequenziali del sito operato per valutare la formazione del callo. La frattura rimane ridotta e immobilizzata con il filo K intramidollare. Dopo il sacrificio in un punto temporale predeterminato, il femore è stato accuratamente conservato in formalina, seguito dalla decalcificazione ossea.

L'osso con callo è stato ottenuto dopo una decalcificazione ottimale. Il callo intatto e la sezione sagittale del callo sono mostrati qui. Il callo viene valutato in modo intermittente per garantire una decalcificazione ottimale prima di valutarlo utilizzando altre tecniche.

Qui sono mostrate immagini a basso ingrandimento e ad alto ingrandimento della sezione colorata con ematossilina ed eosina del sito di frattura. Le sezioni macchiate del sito di frattura mostrano un callo duro con formazione di cartilagine e nuovo osso. L'estremità fratturata dell'osso e la seconda regione corticale possono essere viste qui.

Il periostio più sensibile al dolore della ferita, ed è essenziale infiltrare il periostio nel sito di frattura con un anestetico locale prima dell'osteotomia. Può essere seguito da analisi immunoistochimiche e radiologiche del calloso, micro-CT per istomorfometria quantitativa, analizzando la forza biomeccanica del callo analizza del siero. Questa tecnica è utile per determinare il potenziale osteogenico, il meccanismo d'azione e l'analisi comparativa di promettenti farmaci osteoanabolizzanti.