Name: Preparazione di Mycobacterium abscessus incluso nella perla di agar per inoculare topi immunocompetenti per via intratracheale (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-25T13:20:00.000+00:00
Duration: 5 min 40 s
Description: Impara a preparare Mycobacterium abscessus incluso in perle di agar per inoculo intratracheale in topi immunocompetenti. Questo modello preclinico consente di testare l'efficacia di nuovi antibiotici contro infezioni polmonari croniche.

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<ol><li>Dartois, V., Dick, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+development+challenges+in+nontuberculous+mycobacterial+lung+disease%3A+Tb+to+the+rescue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Drug development challenges in nontuberculous mycobacterial lung disease: Tb to the rescue.</a> J Exp Med. 219 (6), e20220445(2022).</li>
<li>Martiniano, S. L., Nick, J. A., Daley, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nontuberculous+mycobacterial+infections+in+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chest+Med%22%5BJournal%5D)">Nontuberculous mycobacterial infections in cystic fibrosis.</a> Clin Chest Med. 43 (4), 697-716 (2022).</li>
<li>Maurer, F. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lack+of+antimicrobial+bactericidal+activity+in+mycobacterium+abscessus%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Lack of antimicrobial bactericidal activity in mycobacterium abscessus.</a> Antimicrob Agents Chemother. 58 (7), 3828-3836 (2014).</li>
<li>Wu, M. L., Aziz, D. B., Dartois, V., Dick, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ntm+drug+discovery%3A+Status%2C+gaps+and+the+way+forward%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Discov+Today%22%5BJournal%5D)">Ntm drug discovery: Status, gaps and the way forward.</a> Drug Discov Today. 23 (8), 1502-1519 (2018).</li>
<li>Egorova, A., Jackson, M., Gavrilyuk, V., Makarov, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pipeline+of+anti-mycobacterium+abscessus+small+molecules%3A+Repurposable+drugs+and+promising+novel+chemical+entities%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Res+Rev%22%5BJournal%5D)">Pipeline of anti-mycobacterium abscessus small molecules: Repurposable drugs and promising novel chemical entities.</a> Med Res Rev. 41 (4), 2350-2387 (2021).</li>
<li>Nuermberger, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+animal+models+to+develop+new+treatments+for+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Using animal models to develop new treatments for tuberculosis.</a> Semin Respir Crit Care Med. 29 (5), 542-551 (2008).</li>
<li>Nuermberger, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+efficacy+testing+of+new+drug+candidates%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Spectr%22%5BJournal%5D)">Preclinical efficacy testing of new drug candidates.</a> Microbiol Spectr. 5 (3), (2017).</li>
<li>Nicola, F., Cirillo, D. M., Lore, N. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+murine+models+to+study+lung+infection+with+mycobacterium+abscessus+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Tuberculosis+%28Edinb%29%22%5BJournal%5D)">Preclinical murine models to study lung infection with mycobacterium abscessus complex.</a> Tuberculosis (Edinb). 138, 102301(2023).</li>
<li>Dartois, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+murine+models+for+the+testing+of+antimicrobials+against+mycobacterium+abscessus+pulmonary+infections%3A+Current+practices+and+recommendations%5BTitle%5D)+AND+%22Tuberculosis+%28Edinb%29%22%5BJournal%5D)">Preclinical murine models for the testing of antimicrobials against mycobacterium abscessus pulmonary infections: Current practices and recommendations.</a> Tuberculosis (Edinb). 147, 102503(2024).</li>
<li>Obregon-Henao, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Susceptibility+of+mycobacterium+abscessus+to+antimycobacterial+drugs+in+preclinical+models%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Susceptibility of mycobacterium abscessus to antimycobacterial drugs in preclinical models.</a> Antimicrob Agents Chemother. 59 (11), 6904-6912 (2015).</li>
<li>Lerat, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+evaluation+of+antibiotic+activity+against+mycobacterium+abscessus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">In vivo evaluation of antibiotic activity against mycobacterium abscessus.</a> J Infect Dis. 209 (6), 905-912 (2014).</li>
<li>Saliu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+infection+by+nontypeable+haemophilus+influenzae+fuels+airway+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22ERJ+Open+Res%22%5BJournal%5D)">Chronic infection by nontypeable haemophilus influenzae fuels airway inflammation.</a> ERJ Open Res. 7 (1), (2021).</li>
<li>Rodgers, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biologically+relevant+murine+models+of+chronic+pseudomonas+aeruginosa+respiratory+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Pathogens%22%5BJournal%5D)">Biologically relevant murine models of chronic pseudomonas aeruginosa respiratory infection.</a> Pathogens. 12 (8), 1053(2023).</li>
<li>Hoover, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+robust+pneumonia+model+in+immunocompetent+rodents+to+evaluate+antibacterial+efficacy+against+s.+Pneumoniae%2C+h.+Influenzae%2C+k.+Pneumoniae%2C+p.+Aeruginosa+or+a.+Baumannii%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A robust pneumonia model in immunocompetent rodents to evaluate antibacterial efficacy against s. Pneumoniae, h. Influenzae, k. Pneumoniae, p. Aeruginosa or a. Baumannii.</a> J Vis Exp. (119), e55068(2017).</li>
<li>Lore, N. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+aminoglycoside-modifying+enzyme+eis2+represents+a+new+potential+in+vivo+target+for+reducing+antimicrobial+drug+resistance+in+mycobacterium+abscessus+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Respir+J%22%5BJournal%5D)">The aminoglycoside-modifying enzyme eis2 represents a new potential in vivo target for reducing antimicrobial drug resistance in mycobacterium abscessus complex.</a> Eur Respir J. 60 (6), 2201541(2022).</li>
<li>Riva, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+model+of+chronic+mycobacterium+abscessus+lung+infection+in+immunocompetent+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">A new model of chronic mycobacterium abscessus lung infection in immunocompetent mice.</a> Int J Mol Sci. 21 (18), 6590(2020).</li>
<li>Chang, V., Phillips, P. P. J., Imperial, M. Z., Nahid, P., Savic, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+clinical+development+pathways+to+advance+tuberculosis+regimen+development%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">A comparison of clinical development pathways to advance tuberculosis regimen development.</a> BMC Infect Dis. 22 (1), 920(2022).</li>
<li>Yang, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathological+granuloma+fibrosis+induced+by+agar-embedded+mycobacterium+abscessus+in+c57bl%2F6jnarl+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Pathological granuloma fibrosis induced by agar-embedded mycobacterium abscessus in c57bl/6jnarl mice.</a> Front Immunol. 14, 1277745(2023).</li>
<li>Poerio, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+host-+and+pathogen-directed+therapy+for+the+control+of+mycobacterium+abscessus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Spectr%22%5BJournal%5D)">Combined host- and pathogen-directed therapy for the control of mycobacterium abscessus infection.</a> Microbiol Spectr. 10 (1), e0254621(2022).</li>
<li>Pearce, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhaled+tigecycline+is+effective+against+mycobacterium+abscessus+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Antimicrob+Chemother%22%5BJournal%5D)">Inhaled tigecycline is effective against mycobacterium abscessus in vitro and in vivo.</a> J Antimicrob Chemother. 75 (7), 1889-1894 (2020).</li>
<li>De Groote, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gm-csf+knockout+mice+for+preclinical+testing+of+agents+with+antimicrobial+activity+against+mycobacterium+abscessus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Antimicrob+Chemother%22%5BJournal%5D)">Gm-csf knockout mice for preclinical testing of agents with antimicrobial activity against mycobacterium abscessus.</a> J Antimicrob Chemother. 69 (4), 1057-1064 (2014).</li>
<li>Facchini, M., De Fino, I., Riva, C., Bragonzi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+term+chronic+pseudomonas+aeruginosa+airway+infection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Long term chronic pseudomonas aeruginosa airway infection in mice.</a> J Vis Exp. (85), e51019(2014).</li>
<li>Degiacomi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+novel+drug+candidate+vomg+kills+mycobacterium+abscessus+and+other+pathogens+by+inhibiting+cell+division%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Antimicrob+Agents%22%5BJournal%5D)">The novel drug candidate vomg kills mycobacterium abscessus and other pathogens by inhibiting cell division.</a> Int J Antimicrob Agents. 64 (4), 107278(2024).</li>
<li>Rimal, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T405%2C+a+new+penem%2C+exhibits+in+vivo+efficacy+against+m.+Abscessus+and+synergy+with+beta-lactams+imipenem+and+cefditoren%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">T405, a new penem, exhibits in vivo efficacy against m. Abscessus and synergy with beta-lactams imipenem and cefditoren.</a> Antimicrob Agents Chemother. 66 (6), e0053622(2022).</li>
<li>Maggioncalda, E. C., Story-Roller, E., Ammerman, N. C., Nuermberger, E. L., Lamichhane, G. Progressive mycobacterium abscessus lung infection in c3heb/fej mice associated with corticosteroid administration. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMaggioncalda%2C+EC+%22bioRxiv%22">bioRxiv</a>. , (2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Flacone da 125 ml</td><td>Corning</td><td>8388</td><td>Rack sterile</td></tr><tr><td>per il supporto di provette 3 x 3</td><td>Fisher</td><td>5972-0030PK</td><td>Disinfettato prima dell'uso</td></tr><tr><td>Supporto per mouse stampato in 3D</td><td>Transworld Marketing&nbsp;</td><td>progettato e prodotto su misura</td><td>Disinfettato prima dell'uso Piastra di</td></tr><tr><td>diluizione a 48 pozzetti</td><td>Celltreat&nbsp;</td><td>229192</td><td>Provette da</td></tr><tr><td>centrifuga sterili da 50 ml</td><td>Greiner Bio-One</td><td>227261</td><td>Macchina sterile</td></tr><tr><td>per anestea</td><td>Sistemi</td><td>EZ-AF9000 SISTEMA</td><td>n/a</td></tr><tr><td>Avanti J-15R&nbsp;</td><td>Beckman Coulter</td><td>&nbsp; B99517</td><td></td></tr><tr><td>Puntali per pipette a barriera per centrifuga in rack con coperchio sollevabile 1000G</td><td>Thermo Scientific ART&nbsp;</td><td>21-236-2A</td><td>Sacca sterile</td></tr><tr><td>per rischi biologici</td><td>Fisherbrand</td><td>22-044561</td><td></td></tr><tr><td>Anello connettore&nbsp;</td><td>pluriSelect</td><td>41-50000-03</td><td></td></tr><tr><td>Applicatori con punta in cotone</td><td>Puritan&nbsp;</td><td>22-029-571</td><td></td></tr><tr><td>Passanti di inoculazione monouso sterili gialli sterili 100 in busta a chiusura lampo</td><td>Cole-Parmer Essentials&nbsp;</td><td>03-391-562</td> Telo <td>sterile</td></tr><tr><td>monouso per asciugamani polifoderati</td><td>Dynarex</td><td>19-310-671</td> Soluzione <td></td></tr><tr><td>salina tamponata con fosfato sterile di Dulbecco</td><td>Thomas Scientific</td><td>21-031-CM</td><td></td></tr><tr><td>Imbuto</td> sterile <td>pluriSelect</td><td>42-50000</td><td></td></tr><tr><td>Spettrofotometro</td><td>sterile GE Ultrospec 10</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>GE80211630</td></tr><tr><td>Gentlemacs Dissociatore tissutale</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-096-427</td> Siringa Hamilton <td>non attivata a caldo</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Hamilton</td><td>80801</td><td>Disinfettato prima dell'uso</td></tr><tr><td>Olio minerale pesante</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>330760-1L</td> Soluzione <td>sterile</td></tr> di <tr><td>isoflurano Flacone da 250 ml</td><td>Covetrus</td><td>29405</td><td>Corrosione/irritazione cutanea: Categoria 2, Gravi lesioni oculari/Irritazione oculare: Categoria 2A, Tossicità sistemica specifica per organi bersaglio (esposizione singola): Categoria 3 Può causare sonnolenza e vertigini, Provoca grave irritazione oculare, Provoca irritazione cutanea. Non inalare, utilizzare in un'area ben ventilata.</td></tr><tr><td>M Tubes (gentleMACS)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-096-335</td><td>Agitatore magnetico sterile</td></tr><tr><td>MR Hei-Connect&nbsp;</td><td>Heidolph</td><td>505-40000-13-1</td><td></td></tr><tr><td>Barra di agitazione magnetica</td><td>Thomas Scientific</td><td>&nbsp; 1181L08</td><td>Pipetta</td></tr><tr><td>meccanica sterile 100&ndash; 1000 &micro; L&nbsp;</td><td>Gilson PIPETMAN L&nbsp;</td><td>FA10006M</td><td>Disinfettato prima dell'uso</td></tr><tr><td>Pipetta meccanica 20... 200 &micro; L&nbsp;</td><td>Gilson PIPETMAN L&nbsp;</td><td>FA10003MG</td><td>Disinfettato prima dell'uso</td></tr><tr><td>Ago per l'alimentazione degli animali in metallo 24 G</td><td>Braintree Scientific</td><td>N-VP 24G-1S</td><td>Deve essere sterilizzato (sterilizzato in autoclave)</td></tr><tr><td>Middlebrook 7H10 Agar</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M0303-500G</td><td>Sterilizzato (in autoclave)</td></tr><tr><td>Middlebrook 7H11 Agar</td><td>Thermo Fisher</td><td>R4554002</td><td>Sterilizzato (in autoclave)</td></tr><tr><td>Middlebrook 7H9 medio</td><td>Beckton Dickinson</td><td>271310</td> Parti del supporto per mouse <td>sterilizzate (autoclavate)</td></tr> <tr><td></td><td>Soluzioni TriMech&nbsp;</td><td>SRV-AMS-FDM</td><td>Disinfettato prima dell'uso</td></tr><tr><td>Sutura di seta non assorbibile</td><td>Fisher Scientific</td><td>18020-50</td><td>n/a</td></tr><tr><td>OADC Arricchimento liquido per l'uso con Middlebrook Media 500 ml</td><td>Thermo Scientific Remel&nbsp;</td><td>R450605</td><td>PBS sterile</td></tr><tr><td>(10x), pH 7,4 Filtrato sterile 500 mL</td><td>Gibco</td><td>70-011-044</td><td>Salviette sterili</td></tr><tr><td>in peroxiguardia</td><td>Peroxigard</td><td>29221</td><td>n/a</td></tr><tr><td>Piastre Petri con coperchio trasparente Rotondo 100mmx 15mm</td><td>Fisherbrand&nbsp;</td><td>FB0875712</td><td></td></tr><tr><td>Sterile PluriStrainer 200 mm</td><td>pluriSelect</td><td>43-50200-03</td><td>Sterile; filtro cellulare</td></tr><tr><td>Flaconi a rullo</td><td>Corning</td><td>430165</td><td>Pipetta</td></tr><tr><td>sierologica</td> sterile <td>Corning</td><td>4489</td><td>Cuvette sterili</td>per</tr><tr><td>spettrofotometro 1,5 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>14955127</td><td>Sterilizzato (autoclavato)</td></tr><tr><td>Tappi per siringhe o clip (nylon)</td><td>Trimech&nbsp;</td><td>SRV-AMS-MJF</td><td>Disinfettato prima dell'uso</td></tr><tr><td>Brodo di soia triptico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8907-500G</td><td></td></tr><tr><td>Tween sterile 80&nbsp;</td><td>Filtro</td><td>Fisher 170793</td><td>sterilizzato&nbsp;</td></tr><tr><td>Puntali per pipette filtrati a foro largo Rack per coperchio sollevabile 200G&nbsp;</td><td>Thermo Scientific ART</td><td>21-236-1A</td><td>Sterile</td></tr></tbody></table>

preparazione di mycobacterium abscessus incluso nella perla di agar per inoculare topi immunocompetenti per via intratracheale

Preparation of Agar Bead Embedded Mycobacterium abscessus to Inoculate Immunocompetent Mice Intratracheally

Dimensione e carico del tallone Per visualizzare le perle di agar e la loro carica batterica, la proteina fluorescente rosso mCherry è stata espressa sotto il promotore costitutivo Hsp60 nel ceppo di tipo Mab ATCC 19977 e ha incorporato questo ceppo nelle perle di agar come descritto sopra. La Figura 1A mostra l'intervallo di dimensione del cordone (barra della scala = 200 μm). La Figura 1B mostra il carico di 6 preparazioni indipendenti di perline, dimostrando la riproducibilità della procedura come descritto.
Placcatura del push-through della siringa e impianto batterico dopo inoculazione intratracheale L'inoculazione intratracheale è stata ottimizzata in due fasi. Le CFU/mL sono state enumerate nell'inoculo prima e dopo il passaggio attraverso la siringa di vetro per garantire che non si verificassero perdite di perline o batteri mentre le perle passavano attraverso la siringa e il tubo collegato. La Tabella 1 mostra il titolo batterico iniziale di due preparazioni di microsfere indipendenti (prove 1 e 2) e il numero di CFU recuperate per 100 mL di campioni "spinti" da un singolo carico di siringa. Per evitare perdite di microsfere e batteri, è necessaria una siringa di vetro collegata a un tubo metallico. Le perle di agar tendono ad aderire alle superfici plastiche.
L'enumerazione delle CFU nel tempo nella preparazione delle microsfere ha mostrato che la carica batterica delle perle è rimasta stabile a 4 °C per 1 settimana, con una perdita di ~2 volte della carica batterica ogni 2 settimane e una deposizione polmonare non compromessa. Successivamente, gruppi di 5-8 topi sono stati infettati con tre preparati di perline indipendenti per testare la riproducibilità della procedura di inoculazione intratracheale. La Tabella 2 mostra il numero di CFU polmonari per topo, enumerato 24 ore dopo l'infezione come descritto.
Infine, la riproducibilità inter-operatore dell'infezione è stata valutata infettando tre gruppi di 10 topi CD-1, ciascuno eseguito da un operatore diverso. Le CFU polmonari enumerate 24 ore dopo l'infezione sono mostrate nella Figura 2.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67602/67602fig01.jpg"> 
Figura 1: Esperimento pilota per valutare le dimensioni delle perle, visualizzare e quantificare la carica batterica di M. abscessus . (A) Perle di agar contenenti il ceppo ATCC 19977 di M. abscessus , ingegnerizzate per esprimere la proteina fluorescente rosso mCherry sotto il promotore costitutivo hsp60. Cinque μl di sospensione di perle sono stati sparsi su un vetrino e analizzati con un microscopio a fluorescenza dotato di una fotocamera (obiettivo 10x). Ogni punto rosso è una cellula batterica fluorescente, racchiusa all'interno di perle di agar di diametro compreso tra ~70 e 250 μm. (B) Carica batterica, in CFU/mL, di 6 singole preparazioni di perle che dimostrano la riproducibilità del metodo. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67602/67602fig01large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67602/67602fig02.jpg"> 
Figura 2: Riproducibilità interoperatoria dell'infezione. Gruppi di 10 topi femmina CD-1 sono stati infettati intratrachealmente da tre operatori indipendenti come descritto, utilizzando la stessa preparazione di perline. Vengono mostrate le CFU polmonari enumerate 24 ore dopo l'infezione. O1, O2, O3: operatori 1, 2 e 3. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67602/67602fig02large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td colspan="2">UFC/100 μL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">Preparazione delle perline</td>
			<td>Prova 1</td>
			<td>Prova 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.13E+05</td>
			<td>2.40E+05</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Campione push-through con siringa</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1</td>
			<td>1.14E+05</td>
			<td>5.10E+05</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2</td>
			<td>1.36E+05</td>
			<td>4.10E+05</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3</td>
			<td>9.30E+04</td>
			<td>3.90E+05</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4</td>
			<td>9.80E+04</td>
			<td>3.60E+05</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5</td>
			<td>1.14E+05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nella media</td>
			<td>1.11E+05</td>
			<td>4.18E+05</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SD</td>
			<td>1.69E+04 (15%)</td>
			<td>6.50E+04 (16%)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabella 1: Unità formanti colonie (CFU) per campione da 100 μL dopo il passaggio attraverso la siringa di vetro e l'ago di alimentazione in metallo.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td colspan="2">Prova 1</td>
			<td colspan="2">Prova 2</td>
			<td colspan="2">Prova 3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse ID</td>
			<td>UFC polmonare/topo</td>
			<td>Mouse ID</td>
			<td>UFC polmonare/topo</td>
			<td>Mouse ID</td>
			<td>UFC polmonare/topo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M-1</td>
			<td>6.50E+03</td>
			<td>M-6</td>
			<td>2.20E+05</td>
			<td>M-11</td>
			<td>6.80E+04</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M-2</td>
			<td>1.10E+04</td>
			<td>M-7</td>
			<td>2.70E+05</td>
			<td>M-12</td>
			<td>1.70E+05</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M-3</td>
			<td>1.40E+04</td>
			<td>M-8</td>
			<td>8.10E+04</td>
			<td>M-13</td>
			<td>2.10E+05</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M-4</td>
			<td>3.20E+03</td>
			<td>M-9</td>
			<td>1.40E+05</td>
			<td>M-14</td>
			<td>4.40E+04</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M-5</td>
			<td>4.50E+03</td>
			<td>M-10</td>
			<td>1.30E+05</td>
			<td>M-15</td>
			<td>7.50E+04</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>M-16</td>
			<td>1.01E+05</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>M-17</td>
			<td>7.00E+04</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>M-18</td>
			<td>5.80E+03</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nella media</td>
			<td>7.84E+03</td>
			<td>Nella media</td>
			<td>1.68E+05</td>
			<td>Nella media</td>
			<td>9.30E+04</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SD</td>
			<td>4.54E+03 (58%)</td>
			<td>SD</td>
			<td>7.57E+04 (45%)</td>
			<td>SD</td>
			<td>6.67E+04 (72%)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabella 2: Impianto di M. abscessus incorporato in perline di agar nei polmoni di topo 24 ore dopo l'inoculazione

Preparazione di Mycobacterium abscessus incluso nella perla di agar per inoculare topi immunocompetenti per via intratracheale

Robust mouse models of chronic infection with Mycobacterium abscessus, an environmental pathogen that preferably infects the lungs, are badly needed. ...

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Fonte: Bernut, A., et al., Decifrazione e imaging della patogenesi e cordaggio di Mycobacterium abscessus negli embrioni di pesce zebra. J. Vis. Exp. (2015).Questo video mostra un protocollo per isolare e quantificare Mycobacterium abscessus da un embrione infetto di pesce zebra. La procedura prevede l'eutanasia embrionale, la lisi tissutale e l'omogeneizzazione per rilasciare i batteri, seguita da centrifugazione e risospensione in un tampone di tensioattivo. Infine, la sospensione batterica...

Isolamento e coltivazione di batteri da embrioni di pesce zebra per valutare il carico infettivo

Questo video dimostra l'induzione di un'infiammazione sistemica in un topo anestetizzato. L'iniezione di depositi adiuvanti di antigene micobatterico innesca il rilascio di citochine e l'infiammazione localizzata. I vasi linfatici si aprono, consentendo l'ingresso delle cellule immunitarie nei linfonodi e l'attivazione delle cellule T, che rilasciano citochine pro-infiammatorie, portando a un'infiammazione diffusa.

Iniezione sottocutanea di antigene batterico per indurre infiammazione sistemica in un modello murino

Questo video dimostra un metodo per generare un modello murino di uveite micobatterica innescata (PMU) per lo studio dell'uveite post-infettiva. Dopo l'induzione della PMU mediante iniezione intravitreale di Mycobacterium tuberculosis ucciso con il calore in un topo precedentemente immunizzato con lo stesso immunogeno, la progressione dell'infiammazione cronica nell'occhio viene analizzata mediante imaging ed esame...

Un modello murino di uveite micobatterica innescata per studiare l'uveite post-infettiva

Descriviamo il metodo di agar-perle di stabilire persistente a lungo termine infezione delle vie respiratorie Pseudomonas aeruginosa cronica nel modello di topo.

Long Term cronica<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Infezione delle vie aeree nei topi

Gli embrioni di pesce zebra otticamente trasparenti sono ampiamente utilizzati per studiare e visualizzare in tempo reale le interazioni tra microrganismi patogeni e cellule immunitarie innate. La microiniezione di Mycobacterium abscessus, combinata con l'imaging a fluorescenza, viene utilizzata per esaminare le caratteristiche patogene essenziali come la formazione del cordone negli embrioni di zebrafish.

Decifrare e Imaging Patogenesi e Cording di<em&gt; Mycobacterium abscessus</em&gt; In Zebrafish embrioni

Viene descritto un test nei topi per tracciare la migrazione cellulare dalla pelle al linfonodo drenante che consente la caratterizzazione delle cellule dendritiche cutanee mobilizzate al linfonodo dopo l'infezione del cuscinetto del piede con Bacille Calmette-Guérin.

Un test CFSE-based per studiare la migrazione delle cellule dendritiche murini della pelle in drenanti linfonodi durante l&#39;infezione con<em&gt; Mycobacterium bovis</em&gt; Bacille Calmette-Guérin

Descriviamo l'imaging ottico dei topi infettati con la tubercolosi del micobatterio (M. tuberculosis) usando la fluorescenza di enzima reporter (REF). Questo protocollo facilita la rilevazione sensibile e specifica di M. tuberculosis in modelli animali preclinici per la ricerca di patogenesi, terapeutica e vaccino.

Tubercolosi del micobatterio in topi con fluorescenza enzima Reporter di imaging

Qui, presentiamo due protocolli per studiare le interazioni fagocita -abscessus del micobatterio : lo screening di una libreria di mutante trasposone per carenza intracellulare batterica e la determinazione del trascrittoma batterica intracellulare da RNA sequenziamento. Entrambi gli approcci forniscono approfondimenti i vantaggi genomici e trascrittomica adattamenti migliorare fitness batteri intracellulari.

Identificazione di fattori di virulenza di Mycobacterium abscessus per replica intracellulare nei fagociti

In questo rapporto presentiamo un protocollo che consente allo sperimentatore di generare un modello murino di uveite intraoculare. Più comunemente indicato come uveite autoimmune sperimentale (EAU), questo modello consolidato cattura molti aspetti della malattia umana. Qui, descriveremo come indurre e monitorare la progressione della malattia utilizzando diverse letture.

Uveite autoimmune sperimentale: un modello murino infiammatorio intraoculare

Questo protocollo delinea i passaggi per indurre l'uveite micobatterica innescata (PMU) nei topi. Questo metodo delinea i passaggi per aiutare a produrre un'infiammazione oculare affidabile e robusta nel sistema modello murino. Utilizzando questo protocollo, abbiamo generato occhi uveitici e occhi non infiammati da singoli animali per ulteriori valutazioni con saggi immunologici, trascrittomici e proteomici.

Uveite micobatterica innescata (PMU) come modello per l'uveite post-infettiva

Qui presentiamo un protocollo per l'esecuzione di un'inoculazione intradermica a basse dosi di Mycobacterium avium in un orecchio di topo per riflettere le condizioni di esposizione.

Inoculazione intradermica di Mycobacterium avium nell'orecchio del topo

Impara a preparare Mycobacterium abscessus incluso in perle di agar per inoculo intratracheale in topi immunocompetenti. Questo modello preclinico consente di testare l'efficacia di nuovi antibiotici contro infezioni polmonari croniche.

Preparazione di Mycobacterium abscessus incluso nella perla di agar per inoculare topi immunocompetenti per via intratracheale

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