Name: Separazione e caratterizzazione differenziale delle vescicole extracellulari microbiche intestinali in ratti sensibili al sale in condizioni di dieta ad alto contenuto di sale (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-06T15:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 21 s
Description: Scopri l'isolamento e la caratterizzazione delle vescicole extracellulari microbiche intestinali in ratti sensibili al sale con dieta iper-salina. Questo metodo migliora l'integrità e la riproducibilità per studi sull'ipertensione.

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<ol><li>Thursby, E., Juge, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Introduction+to+the+human+gut+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">Introduction to the human gut microbiota.</a> Biochem J. 474 (11), 1823-1836 (2017).</li>
<li>Aschtgen, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rotation+of+Vibrio+fischeri+Flagella+Produces+Outer+Membrane+Vesicles+That+Induce+Host+Development%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Rotation of Vibrio fischeri Flagella Produces Outer Membrane Vesicles That Induce Host Development.</a> J Bacteriol. 198 (16), 2156-2165 (2016).</li>
<li>Gurung, S., Perocheau, D., Touramanidou, L., Baruteau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+exosome+journey%3A+from+biogenesis+to+uptake+and+intracellular+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Comm+Signal%22%5BJournal%5D)">The exosome journey: from biogenesis to uptake and intracellular signalling.</a> Cell Comm Signal. 19 (1), 47(2021).</li>
<li>Avila-Calderón, E. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outer+Membrane+Vesicles+of+Gram-Negative+Bacteria%3A+An+Outlook+on+Biogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Outer Membrane Vesicles of Gram-Negative Bacteria: An Outlook on Biogenesis.</a> Front Microbiol. 12, 557902(2021).</li>
<li>Melo-Marques, I., Cardoso, S. M., Empadinhas, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+extracellular+vesicles+at+the+interface+of+gut+microbiota+and+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Gut+Microbes%22%5BJournal%5D)">Bacterial extracellular vesicles at the interface of gut microbiota and immunity.</a> Gut Microbes. 16 (1), 2396494(2024).</li>
<li>Kim, N. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+gut+microbiota-derived+metabolites+and+extracellular+vesicles+on+neurodegenerative+disease+in+a+gut-brain+axis+chip%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Converg%22%5BJournal%5D)">Effect of gut microbiota-derived metabolites and extracellular vesicles on neurodegenerative disease in a gut-brain axis chip.</a> Nano Converg. 11 (1), 7(2024).</li>
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<li>Qi, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salvia+miltiorrhiza+bunge+extract+improves+the+Th17%2FTreg+imbalance+and+modulates+gut+microbiota+of+hypertensive+rats+induced+by+high-salt+diet%5BTitle%5D)+AND+%22J+Funct+Foods%22%5BJournal%5D)">Salvia miltiorrhiza bunge extract improves the Th17/Treg imbalance and modulates gut microbiota of hypertensive rats induced by high-salt diet.</a> J Funct Foods. 117, 106211(2024).</li>
<li>Wilck, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salt-responsive+gut+commensal+modulates+T%28H%2917+axis+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Salt-responsive gut commensal modulates T(H)17 axis and disease.</a> Nature. 551 (7682), 585-589 (2017).</li>
<li>Jiang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+Gastrin%2FCCKBR+%28Cholecystokinin+B+Receptor%29+Ameliorates+Salt-Sensitive+Hypertension+by+Inhibiting+Intestinal+Na%28%2B%29%2FH%28%2B%29+Exchanger+3+Activity+Through+a+PKC+%28Protein+Kinase+C%29-Mediated+NHERF1+and+NHERF2+Pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Intestinal Gastrin/CCKBR (Cholecystokinin B Receptor) Ameliorates Salt-Sensitive Hypertension by Inhibiting Intestinal Na(+)/H(+) Exchanger 3 Activity Through a PKC (Protein Kinase C)-Mediated NHERF1 and NHERF2 Pathway.</a> Hypertension. 79 (8), 1668-1679 (2022).</li>
<li>Zheng, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypertension+of+liver-yang+hyperactivity+syndrome+induced+by+a+high+salt+diet+by+altering+components+of+the+gut+microbiota+associated+with+the+glutamate%2FGABA-glutamine+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Nutr%22%5BJournal%5D)">Hypertension of liver-yang hyperactivity syndrome induced by a high salt diet by altering components of the gut microbiota associated with the glutamate/GABA-glutamine cycle.</a> Front Nutr. 9, 964273(2022).</li>
<li>Mulligan, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+TEM+Specimen+Preparation+and+Analysis+of+Plasmonic+Nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Microanal%22%5BJournal%5D)">Multiplexed TEM Specimen Preparation and Analysis of Plasmonic Nanoparticles.</a> Microsc Microanal. 21 (4), 1017-1025 (2015).</li>
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<li>Tulkens, J., De Wever, O., Hendrix, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyzing+bacterial+extracellular+vesicles+in+human+body+fluids+by+orthogonal+biophysical+separation+and+biochemical+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Analyzing bacterial extracellular vesicles in human body fluids by orthogonal biophysical separation and biochemical characterization.</a> Nat Protoc. 15 (1), 40-67 (2020).</li>
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<li>Maldonado, R. F., Sá-Correia, I., Valvano, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipopolysaccharide+modification+in+Gram-negative+bacteria+during+chronic+infection%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Microbio+Rev%22%5BJournal%5D)">Lipopolysaccharide modification in Gram-negative bacteria during chronic infection.</a> FEMS Microbio Rev. 40 (4), 480-493 (2016).</li>
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<li>Guzik, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+T+cell+in+the+genesis+of+angiotensin+II+induced+hypertension+and+vascular+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Role of the T cell in the genesis of angiotensin II induced hypertension and vascular dysfunction.</a> J Exp Med. 204 (10), 2449-2460 (2007).</li>
<li>Huang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+vesicles+as+a+novel+mediator+of+interkingdom+communication%5BTitle%5D)+AND+%22Cytokine+Growth+Factor+Rev%22%5BJournal%5D)">Extracellular vesicles as a novel mediator of interkingdom communication.</a> Cytokine Growth Factor Rev. 73, 173-184 (2023).</li>
<li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alleviation+of+colitis+by+honeysuckle+MIR2911+via+direct+regulation+of+gut+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Alleviation of colitis by honeysuckle MIR2911 via direct regulation of gut microbiota.</a> J Control Release. 376, 123-137 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Essential Supplies</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Filtro centrifugo (10nkDa 2 mL)</td><td>Millipore</td><td>UFC903096</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga Tude (50 mL)</td><td>BKMAN</td><td>20220404</td> Centrifuga Tudes BECKMAN COULTER <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>Z30815SCA</td><td></td></tr><tr><td>Sistema di filtrazione sottovuoto</td><td>Biosharp</td><td>24902581</td><td></td></tr><tr><td>Kit per il dosaggio dell'endotossina LAL strong</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Chromogenic LAL</td><td>Beyotime</td><td>022124240705</td><td></td></tr><tr><td>Coomassie Blue Soluzione di colorazione rapida</td><td>Beyotime</td><td>Z972241010</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Damas-beta</td><td>P3117308</td><td></td></tr><tr><td>Kit per il dosaggio delle proteine BCA potenziato</td><td>Beyotime</td><td>A006241112</td><td></td></tr><tr><td>Etanolo</td><td>KESH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HCl</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>OptiPrep (60% wt/vol, iodixanol)</td><td>Serumwerk</td><td>00124</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Labshark</td><td>130114005</td><td></td></tr><tr><td>acido fosfotungstico</td><td>RUIXIN</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Saccarosio</td><td>Damas-beta</td><td>P1917057</td><td></td></tr><tr><td>Tris (VWR)</td><td>Damas-beta</td><td>P3061764</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione colorante blu di tripano (0,4%)</td><td>Beyotime</td><td>BD07242904</td><td></td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Absorbance Microplate Reader</td><td>SpectraMax</td><td>ABP01690</td><td></td></tr><tr><td>Biomicroscope</td><td>Motic</td><td>BA210Digital</td><td></td></tr><tr><td>Desk centrifuge</td><td>Cence</td><td>CHT210R</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifuga da tavolo ad alta velocità</td><td>DLAB</td><td>D3024</td><td></td></tr><tr><td>Rotore in alluminio ad angolo fisso + Cence</td><td></td><td></td><td></td>a tazza centrifuga da 500 mL</tr><tr><td>Bilancia elettronica ad alta precisione</td><td>SKR</td><td>BN-200</td><td></td></tr><tr><td>Armadio a flusso laminare</td><td>Nantong Hunan Scientific Instrument Co., Ltd.</td><td>SW-CJ-2FDS</td><td></td></tr><tr><td>SW 32.1 Ti Girevole a secchiello oscillante + SW 32.1 Ti Secchio a rotore</td><td>BECKMAN COULTER</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscopio elettronico a trasmissione</td><td>JEOL</td><td>JEM-1400FLASH</td><td></td></tr><tr><td>Rotatore</td><td></td><td></td><td></td>per provette</tr><tr><td>Ultracentrifuga</td><td>BECKMAN COULTER</td><td>Optima XE-100</td><td></td></tr><tr><td>Sistema ad acqua ultrapura</td><td>ULPHW</td><td>UPR-II-15TNZ</td><td></td></tr><tr><td>Pompa a vuoto multifunzione per acqua-cieculazione</td><td>Qiang Qiang</td><td>SHZ-D(III)</td><td></td></tr></tbody></table>

separazione e caratterizzazione differenziale delle vescicole extracellulari microbiche intestinali in ratti sensibili al sale in condizioni di dieta ad alto contenuto di sale

Separation and Differential Characterization of Gut Microbial Extracellular Vesicles in Salt-Sensitive Rats under High-Salt Diet Conditions

Le concentrazioni di EVs sono state determinate in diverse frazioni (Figura 2A). I risultati sperimentali hanno mostrato che la concentrazione delle EV mostrava un tipico pattern di distribuzione normale in una serie di soluzioni a gradiente di densità (Figura 2B). In particolare, nella frazione 9, la concentrazione di EV ha raggiunto il suo punto più alto (3,85 x 109), suggerendo che la frazione di distribuzione principale dei EV potrebbe essere 9<su...

Separazione e caratterizzazione differenziale delle vescicole extracellulari microbiche intestinali in ratti sensibili al sale in condizioni di dieta ad alto contenuto di sale

High salt intake is a major risk factor for hypertension, and its underlying mechanism may be closely linked to extracellular vesicles (EVs) secreted by ...

separation-differential-characterization-gut-microbial-extracellular

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Fonte: Cian, M. B. et. al., Separazione dell'involucro cellulare per batteri Gram-negativi in frazioni di membrana interna ed esterna con aggiustamenti tecnici per Acinetobacter baumannii. J. Vis. Exp. (2020)Questo video mostra la separazione delle frazioni di membrana interna ed esterna dei batteri Gram-negativi utilizzando l'ultracentrifugazione a gradiente di saccarosio. Le frazioni di membrana vengono purificate e conservate a basse temperature per un'analisi mirata dei componenti specifici...

Separazione delle frazioni di membrana interna ed esterna di batteri Gram-negativi

Fonte: Watson, DC, et.al. Isolamento e purificazione scalabili di vescicole extracellulari da Escherichia coli e altri batteri. J. Vis. Exp. (2021)Questo video mostra l'isolamento e la concentrazione di vescicole extracellulari (EV) derivate dalla membrana esterna di batteri geneticamente modificati. Il processo prevede la coltura dei batteri per rilasciare le vescicole extracellulari, seguita da fasi sequenziali di centrifugazione e filtrazione per rimuovere cellule e detriti. Infine,...

Isolamento e arricchimento di vescicole extracellulari derivate dalla membrana esterna da batteri

Mycobacterium tuberculosis mostra un aumento della produzione e del rilascio di vescibole extracellulari in risposta a basse condizioni di ferro. Questo lavoro descrive in dettaglio un protocollo per la generazione di basse condizioni e metodi di ferro per la purificazione e la caratterizzazione delle vesciche extracellulari micobatteriche rilasciate in risposta alla carenza di ferro.

Isolamento e caratterizzazione delle vescicoli extracellulari prodotti da micobatteri a limite di ferro

Le vescicole batteriche svolgono un ruolo importante nella patogenesi e hanno promettenti applicazioni biotecnologiche. L'eterogeneità delle vescicole complica l'analisi e l'uso; pertanto, è necessario un metodo semplice e riproducibile per separare le varie dimensioni delle vescicole. Qui, dimostriamo l'uso della cromatografia di esclusione dimensionale per separare vescicole eterogenee prodotte da Aggregatibacter actinomycetemcomitans.

Cromatografia di esclusione dimensionale per analizzare l'eterogeneità delle vescicole della membrana esterna batterica

I batteri secernono vescicole extracellulari (EV) di dimensioni nanometriche che trasportano molecole biologiche bioattive. La ricerca EV si concentra sulla comprensione della loro biogenesi, del ruolo nelle interazioni e malattie microbo-microbo e ospite-microbo, nonché sulle loro potenziali applicazioni terapeutiche. Viene presentato un flusso di lavoro per l'isolamento scalabile dei veicoli elettrici da vari batteri per facilitare la standardizzazione della ricerca sui veicoli elettrici.

Isolamento scalabile e purificazione di vescicole extracellulari da Escherichia coli e altri batteri

Il presente protocollo fornisce descrizioni dettagliate per l'isolamento, la concentrazione e la caratterizzazione di vescicole extracellulari da colture cianobatteriche. Vengono inoltre discussi gli approcci per purificare le vescicole da colture a diverse scale, i compromessi tra le metodologie e le considerazioni per lavorare con i campioni sul campo.

Isolamento e caratterizzazione delle vescicole extracellulari cianobatteriche

L'obiettivo qui è quello di delineare un protocollo per studiare i meccanismi della disbiosi nelle malattie cardiovascolari. Questo documento discute come raccogliere e trapiantare asetticamente campioni fecali murini, isolare l'intestino e utilizzare il metodo "Swiss-roll", seguito da tecniche di immunocolorazione per interrogare i cambiamenti nel tratto gastrointestinale.

Isolamento fecale murino e trapianto di microbiota

Questo studio descrive un metodo per isolare e purificare le vescicole extracellulari batteriche (BEV) arricchite da feci umane tramite centrifugazione a gradiente di densità (DGC), identifica le caratteristiche fisiche dei BEV dalla morfologia, dalla dimensione delle particelle e dalla concentrazione e discute le potenziali applicazioni dell'approccio DGC nella ricerca clinica e scientifica.

Isolamento e purificazione di vescicole extracellulari batteriche da feci umane mediante centrifugazione a gradiente di densità

Questo articolo descrive: (1) somministrazione orale tramite gavage di molecole di prova ai topi neonatali già a partire dal DOL 6; e (2) valutazione ex vivo della funzione della barriera epiteliale del colon nelle biopsie dai cuccioli DOL 10 allo svezzamento (DOL 20) valutando la permeabilità paracellulare e transcellulare con camere di Ussing.

Gavage orale nei cuccioli neonatali di topo e valutazione funzionale dell'integrità della barriera intestinale utilizzando camere di uso

Interazioni ospite-microbo intestino sono stati valutati utilizzando un approccio innovativo che unisce una comunità orale sintetica, la digestione gastrointestinale in vitro e un modello dell'epitelio dell'intestino tenue. Presentiamo un metodo che può essere adattato per valutare l'invasione delle cellule degli agenti patogeni e multispecie biofilm, o anche per testare la capacità di sopravvivenza dei probiotici formulazioni.

Valutare la fattibilità di un consorzio batterico sintetico sull'interfaccia ospite-microbo In Vitro Gut

Scopri l'isolamento e la caratterizzazione delle vescicole extracellulari microbiche intestinali in ratti sensibili al sale con dieta iper-salina. Questo metodo migliora l'integrità e la riproducibilità per studi sull'ipertensione.

Separazione e caratterizzazione differenziale delle vescicole extracellulari microbiche intestinali in ratti sensibili al sale in condizioni di dieta ad alto contenuto di sale (Video) | JoVE Journal

Separazione e caratterizzazione differenziale delle vescicole extracellulari microbiche intestinali in ratti sensibili al sale in condizioni di dieta ad alto contenuto di sale

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