Method Article

出芽酵母の複製寿命の測定

DOI:

10.3791/1209

⸱

June 25th, 2009

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1Department of Biochemistry, University of Washington, 2Department of Pathology, University of Washington

In This Article

Summary

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この記事では、酵母の母細胞の複製寿命を測定するための一般的なプロトコルを提示する。

Abstract

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老化は細胞成分と死亡率をもたらす細胞内小器官の進行性の悪化によって特徴付け変性過程です。出芽酵母

Protocol

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パート1：複製の寿命解析のための準備菌株とプレート

このセクションでは、複製寿命の実験と寿命解析のための酵母細胞の調製のための固体YEPDプレートの準備について説明します。

  1. 適切な無菌操作を使用して、培養の酵母細胞および複製寿命解析のために使用されるYEPD寒天プレート（1％酵母エキス、2％バクト - ペプトン、2％寒天、2％グルコース）を準備。あなたは、寿命の実験で分析するすべての4から5株のために少なくとも2枚を準備する必要があります。プレートは、少​​なくとも2日間の寿命の実験の前に準備し、寿命のアッセイを開始する前に乾燥させる必要があります。実験はプレートを注ぐの4-5日以内に開始されない場合は、冷蔵インキュベーター内に配置し、dessicationを防ぐためパラフィルムやプラスチックでラップする必要があります。
  2. YEPD寒天プレート上に単一のコロニーのために凍結ストックとストリークから酵母株を取り外します。最大6系統まで簡単に同じ大きさの扇形のウェッジに板を分割することによって同じYEPDプレートにストリークすることができます。
  3. 2日間、30℃で細胞をインキュベートする。
  4. 新鮮なYEPDプレート上にインキュベーターと単一コロニーからのパッチの細胞から細胞を取り除きます。二つの異なるコロニーからの2つのパッチが各菌株に生成される必要があります。この時点では、分析対象の菌株は、解析部は、個々の菌株の身元がわからないどこに複製寿命の実験は....

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Acknowledgements

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この作品は、エリソン医学財団からMKとBKKへの助成金によって支えられている。 MKは、高齢化のエリソン医学財団新奨学生です。私たちは、撮影時の支援をSoumya Kotireddyに感謝します。

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
寒天試薬Fisher ScientificDF0145-17-0 (214530)
バクトペプトン試薬Fisher ScientificDF0118-17-0 (211677)
酵母抽出試薬Fisher ScientificDF0886-17-0 (288620)
グルコース

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kaeberlein, M., Burtner, C. R., Kennedy, B. K. Recent developments in yeast aging. PLoS Genet. 3, (2007).
  2. Kaeberlein, M. Handbook of models for human aging. Conn, P. M. , Elsevier Press. Boston. 109-120 (2006).
  3. Smith, E. D.

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