このビデオはの使用方法を示しています in vivoで生物発光イメージング。
このコンテンツを表示するには、JoVEへの購読が必要です。 または、無料トライアルをお申し込みください。
この記事について
サマリー
要約
心臓組織工学の様々な技法がネイティブまたはバイオ人工どちら足場材料、などのフィブリンやコラーゲンなどのヒドロゲルにおける心筋細胞の捕捉と筋細胞の単層1のスタッキングを使用して足場の戦略などは過去数十年間で追求されています。これらの概念は、標的の心機能の回復（心筋梗塞後など）で、または実験的なモデル（例えば、予測毒性学と物質のスクリーニングや疾患のモデリング）として目指しています。人工心臓の組織の移植後の細胞生存率（EHT）の正確なモニタリングは、現在、生物発光イメージング（BLI）のテクニック2 -生体内で使用可能となった。ここでは、ホタルルシフェラーゼのユビキタス発現（、3 ROSA /ルシフェラーゼ- LEW Tg）を持つトランスジェニックラット系統からフィブリンベースのEHTの生成を説明します。注入はEHTの移植後の宿主の免疫応答を評価するために別のラット系統の大網に実行されます。 BLIと酵素結合免疫スポット法（ELISPOT）によって生成された結果の比較は、免疫応答の評価のためのBLIの有用性を確認する。
プロトコル
1。 EHTの生成と培養条件
フィブリンベースのEHTの製造は、他の4に記載のように行った。簡単に言うと、移植の目的のためにフィブリンベースEHTを生成するために、マスターミックスは、新生児のROSA /ルシフェラーゼ- LEWトランスジェニックラットの心臓、ウシフィブリノーゲン及びマトリゲルから単離した細胞を含む調製した。アガロース鋳型は6ウェル培養皿に置かれたテフロンのスペーサを用いて調製した。アガロースの凝固した後、スペーサを除去し、シリコンポストラックは、鋳型に達するポストで培養皿上に置いた。 EHTを生成するには、マスターミックスは、簡単にトロンビンの計算量と混合し、金型に分注した。フィブリノーゲンの重合した後、ポストに付着EHTsシリコーンラックを静かにカスタムメイドを使用して、新しい6ウェル細胞培養皿に移し、37 ° C、7％CO 2インキュベーター内で維持さアガロースの鋳型、から削除されました細胞培養培地。
EHTは、日tenまで、細胞の培養条件下で飼育した。この期間中は、新生児ラットの心臓細胞は細長い、相互接続を開始し、シリコンの支柱の間に磁力線に沿って整列します。注入の時に、自発的な一貫性の収縮は、シリコーンの投稿を偏向、観察された。
2。 EHT注入
....
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
ディスカッション
心臓修復のためのEHT技術の臨床実施の前に、そのような移植後の細胞とマトリックスの両方のコンポーネントの免疫原性や移植片生存としての基本的な質問は、実験モデルで評価する必要がある。 生体内生物発光イメージングは、移植後のモニタリングの細胞の生存のための有用な新技術を表します。 。我々は正常に確立プロトコル4の適応により、ルシフェラーゼ正（リュック+）心臓の細胞を含むフィブリンベースのEHTを生成する。これらのEHTは、レシピエントラットの大網に移植した。特定の基質（D -ルシフェリン）の腹腔内注射は、IVISのバイオイメージングプラットフォーム（Xenogen）を使用して検出可能であった信号を生成します。接木EHTs内のセルの数の代用パラメータとして役立った光子/秒/ cm 2で / steridianで測定されたベースラインでの信号強度（注入後120分）。移植片生着の非侵襲的な縦assessementに許可される毎日の測定。拒絶反応のモデルでは、時間をかけて信号強度の低下が異なるラット系統における急性拒絶反応の強さと速度と相関していた。
....アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
開示事項
利害の衝突は宣言されません。
謝辞
ソーニャSchrepfer、レナードコンラーディとアルネハンセンは、ドイツ学術振興（; SCHR992/3-1、SCHR992/4-1、CO 858/1-1、HA 3423/3-1 DFG）から資金提供を受けた。仕事はまた、欧州連合（EU）からトーマスEschenhagen（EUGeneHeartとAngioscaff）への補助金によって支えられている。
....アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
材料
- LEW - Tgは（GT（ROSA）26Sor - LUC）11Jmskラット（NBPRのラット番号0299、http://www.anim.med.kyoto-u.ac.jp/NBR/）
- ウシフィブリノーゲン（ストック溶液：塩化ナトリウム200 mg / mlのプラスアプロチニン5μg/ mlのフィブリノゲン0.9％、シグマF4753）
- マトリゲル（BDバイオサイエンス356235）
- DMEM（生体色素F0415）
- ウマ血清（ギブコ社26050）
- ペニシリン/ストレプトマイシン（ギブコ15140）
- インスリン（Sigma - Aldrich社I9278）
- アプロチニン（シグマアルドリッチA1153）
- D -ルシフェリン（Biosynth L - 8220）
- 酵素結合免疫スポット（ELISPOT）アッセイプレート（Hassa Laborbedarf、S2EM004M99）
参考文献
- Eschenhagen, T., Zimmermann, W. H. Engineering myocardial tissue. Circ Res. 97, 1220-1231 (2005).
- van der Bogt, K. E., Schrepfer, S., Yu, J. Comparison of transplantation of adipose tissue- and bone marrow-derived mesenchymal stem cells in the infarcted heart. Tr....
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
再版と許可
