方法論記事

採用プロテアーゼ及び酸触媒ラベリングワークフロー

11.6K 閲覧数

⸱

DOI：

10.3791/3891

⸱

2013年2月20日

 , 
1Boston Biomedical Research Institute

この記事について

サマリー

採用した安定同位体標識のワークフロー 18 O-濃縮水（LEO-ワークフロー）を定量的および定性的プロテオミクス研究のための多目的ツールです。プロテアーゼアシスト（古）のワークフローでは、 18 O原子は、タンパク質分解切断、およびプロテアーゼによって媒介されるカルボキシル酸素交換反応によって導入されます。酸触媒（アレオ）ワークフローでは、 18 O原子は低pHでカルボキシル酸素交換によって導入されます。

要約

安定同位体は、生物学質量分析に不可欠なツールです。歴史的に見ると、18 O安定同位体は、広範囲に1から3のタンパク質分解酵素の触媒機構を研究するために使用されている。質量分析ベースのプロテオミクスの出現により、安定同位体濃縮された水の18 O原子の酵素によって触媒された定款は、定量的タンパク質発現レベル（Fenselauとヤオ4県、宮城県、ラオ5とYeによって見直さ比較する一般的な方法となっているら6）18 O標識は、化学物質（ 例えば iTRAQ、ICAT）と（ 例えば SILAC）代謝標識技術7に簡単かつ低コストの代替手段を構成する。利用プロテアーゼに応じて、18 O標識は、切断産物3のC末端カルボキシル基に2つの18 O原子までの取り込みをもたらすことができ8に細分することができる。酵素18 O標識の私たちのパレオ（P 18 O濃縮水をmploying 電子 abeling rotease-ssisted リットル ）の適応では、独特の同位体比の挙動を得るために50パーセント18 O濃縮水を利用した。高解像度のマトリックス支援レーザー脱離イオン化 - 飛行時間型タンデム質量分析（MALDI-TOF/TOF MS / MS）との組み合わせでは、特徴的な同位体エンベロープは特異性の高いレベルで切断産物を同定するために用いることができる。我々は以前に検出し、特徴づける内因性プロテアーゼ9とタンパク質分解反応10-11を監視するために古の方法論を使用してきました。パレオは、タンパク質分解的切断反応の本質をエンコードしているので、実験のセットアップは簡単で、生化学ENRIです切断産物のchmentステップは回避することができます。古法は容易にタンパク質分解的切断反応のダイナミクスと生理的条件を表す複雑な生物学的サンプル中のタンパク質分解の（ii）の分析の監視（i）が経時実験に拡張することができます。古経時実験は、複雑なタンパク質分解経路反応における律速処理ステップと反応中間体を識別するのに役立ちます。さらに、古反応は、私たちはそのようなその切断産物を再結合し、第二18 O原子の取り込みを触媒することが可能であるセリンプロテアーゼトリプシンなどのタンパク質分解酵素を識別することができます。このような"二重標識"酵素はペプチドが排他的にカルボキシル酸素交換反応によって標識されている、postdigestion 18 O標識のために使用することができます。私たちの3番目の戦略は酵素を超え18 O濃縮水を採用ラベリング延び、18 O安定同位体標識を導入するために酸性のpH条件を使用していますペプチドにatures。

プロトコル

提示LEO-ワークフローはタンパク質消化物や合成ペプチドの安定同位体標識を可能にします。これらのタイムコース実験（ 図1）は、比較および定量的プロテオミクス研究ならびにプロテアーゼの研究にも適用可能である。各ワークフローには、2つの実験の手順（ 図2）から構成されています）は、それぞれ18のO-安定同位体でエンコードされた反応（プロテアーゼ触媒によるペプチド切断の解決されたサンプリング時間;プロテアーゼ触媒によるカルボキシル基の酸素交換反応、酸触媒カルボキシル酸素交換質量分析および18 O-取り込み動態をグラフィカルに表現することにより反応A）とB）分析。

Aの経時実験

I.古経時：タンパク質分解的切断のプロテアーゼ触媒によるラベリング

  1. （オプション）タンパク質（10μM）およびペプチド（250μM）のジスルフィド結合は、DTT（最終濃度2.5 mM）で還元される50℃で30分インキュベートすることにより、25mMのNH 4 HCO 3（両方の新たに調製）で
  2. （オプション）無料システインは、暗所で室温で30分間インキュベートすることにより、25mMのNH 4 HCO 3で（最終濃度10mM）ヨードアセトアミドでアルキル化されています。
  3. 興味のあるプロテアーゼに応じて、タンパク質/ペプチドのソリューションは、残った液、アルキル化剤を除去するためにクリーンアップする必要があります。タンパク質試料用のバッファを交換するためにペプチドのクリーンアップとVivaspin遠心コンセントレータ（ザルトリウス）のPepClean C-18スピンカラム（サーモ）を使用します。
  4. 1:1（v / v）の最終的なH 2を含む：;：20μlのプロテアーゼ反応緩衝液（25mMのNH 4 HCO 3、pH8.0でトリプシン50mMのMES-KOH、pH5.5で、ECE-1）に交換ペプチド/タンパク質/を再溶解（18）O（95％、シグマアイソテック）。
  5. 前プロテアーゼの添加をゼロ時点サンプルを撤回：ミックス反応混合物の0.5μlと0.5μlのアルファシアノ-4 - ヒドロキシを酸マトリックス（50％アセトニトリル中に10 mg / ml、0.1％TFA）。のOpti-TOF 384 MALDIターゲットプレート（AB SCIEX）上のスポットサンプルを、室温で溶媒液滴のまま乾燥するまで（約5分）。
  6. 2つのアリコートに反応液を分割します。室温または特定の酵素のための推奨温度で：;：最初のアリコートは、関心のあるプロテアーゼ（0.04 nMでトリプシン75nmのECE-1）と共にインキュベートされます。第二のアリコートを、プロテアーゼなしでインキュベートされ、コントロールサンプルとして使用されます。第一のアリコートは、プロテアーゼ触媒による18 O標識のための標準試料を表しており、タンパク質分解的切断反応のペプチドやタンパク質同定、タンパク質分解活性の検出およびモニタリングに使用することができます。第二のアリコートは、18 O取り込みがプロテアーゼによって誘導されることを示すために使用されているため、どちらのラベルも切断はこのサンプル用に期待されています。
  7. 反応液の一部を除去し、DESとしてそれらをスポッティングすることにより反応をフォローフィット思えるような時間間隔でステップ5にcribed。上記の反応条件は4日間（約24箇所）までのタンパク質分解反応を監視するために使用されています。 30分まで、5分毎のサンプリングを開始し、8時間、4日までのすべての8時間まで、2時間まで30分ごとに、すべての時間を見つける。切断産物は、最初の12時間以内に表示されるべきであり、基板は24時間後に完全に加水分解されなければなりません。拡張反応のインキュベーション時間はさらに処理される反応中間体から離散的で安定した反応生成物を定義することができます。リサーチクエスチョンと与えられた酵素 - 基質ペアに応じて、スポッティング倍、培養温度は最適反応サンプリングを確保するために調節されることがあります。
  8. 最終反応時点をスポットまたは拡張スポッティング間隔の間にされた後、後述するように、MALDIターゲットプレート（セクションB）MALDI-TOF/TOF MS / MS分析に送信されます。

Ⅱ。古経時：Postdigタンパク質分解末端のestionラベリング

  1. （オプション）タンパク質（10μM）およびペプチド（250μM）のジスルフィド結合は、50℃で30分インキュベートし、25mMのNH 4 HCO 3（両方の新たに調製）にDTT（最終濃度2.5 mM）で還元される
  2. （オプション）無料システインは、暗所で室温で30分間インキュベートすることにより、25mMのNH 4 HCO 3で（最終濃度10mM）ヨードアセトアミドでアルキル化されています。
  3. 興味のあるプロテアーゼに応じて、タンパク質/ペプチドのソリューションは、残った液、アルキル化剤を除去するためにクリーンアップする必要があります。タンパク質のバッファー交換のためのペプチドのクリーンアップとVivaspin遠心コンセントレータのためPepClean C-18スピンカラムを使用します。
  4. 再溶解/クリーンアップされたペプチド製品/タンパク質20μlのプロテアーゼ反応緩衝液（ 例えば、トリプシン：25mMのNH 4 HCO 3、pH8.0）に交換する（ 例えばトリプシン完成に関心のプロテアーゼで、ダイジェストを：0.04 nMで、37℃、12時間）。
  5. PepClean C-18スピンカラムによるクリーンアップの切断産物。このステップでは、残存プロテアーゼ活性を除去することができます。
  6. 1:1（v / v）の最終的なH 2 18 Oを含む：20μlのプロテアーゼ反応緩衝液（25mMのNH 4 HCO 3、pH8.0でトリプシン）でクリーンアップされたペプチド生成物を再溶解/交換
  7. 反応混合物のミックス0.5μlおよび0.5μlのアルファシアノ-4 - ヒドロキシ桂皮酸マトリックス（50％アセトニトリル中に10 mg / ml、0.1％TFA）：事前の酵素の添加をゼロ時点サンプルを撤回します。スポットMALDIターゲットプレート上の試料と乾燥（約5分）になるまで室温で溶媒液滴のままにしておきます。
  8. 2つのアリコートに反応液を分割します。室温または特定の酵素のための推奨温度で：最初のアリコートは、関心のあるプロテアーゼ（0.04 nMで例えばトリプシン）と共にインキュベートされます。第二のアリコートを、プロテアーゼなしでインキュベートされ、コントロールとして機能します。最初のアリコートプロテアーゼ触媒による18 O postdigestionラベリングのための標準試料を表しており、ペプチドやタンパク質の定量化のために使用することができます。第二のアリコートは、18 O取り込みがプロテアーゼによって触媒されることを示すために使用されているため、全く標識はこのサンプル用に想定されていません。
  9. 反応液の一部を除去して、ステップ7で説明し、それらをスポッティングすることにより、反応に従ってください）​​時間間隔でフィット見えるように。例えば、私たちは、トリプシンによって触媒カルボキシル酸素交換反応を監視するために、その後最初に最大30分および15分毎にのために5分毎に斑点を付けた。
  10. 最終反応時点が目撃されているか、（セクションB）下記のように拡張された間隔の間にスポッティングMALDIターゲットプレートがMALDI-TOF/TOF MS / MS分析に提出された後。

Ⅲ。アレオ-経時：カルボキシル基の酸触媒によるラベリング

  1. 1:1（v / v）のtの18 O濃縮水を使用して個々のペプチド（50 nM）をインキュベート0.1％の彼は有無（制御）（v / v）の最終のトリフルオロ酢酸（総体積30μl）を。
  2. アルファシアノ-4 - ヒドロキシ桂皮酸マトリックス（50％アセトニトリル中に10 mg / ml、0.1％TFA）で直接MALDIターゲット上の0.5μlとの混合物との共スポッティングを0.5μlアリコートで48日間毎日サンプルの反応生成物プレート。
  3. スポッティング間隔の間、そして、セクションBに下記のようにMALDI-TOF/TOF MS / MS分析のためのMALDIターゲットプレートを提出し、最終反応時点のスポッティング後

B. MALDI-TOF/TOF MS / MSのデータ収集と分析

  1. 質量スペクトルは4800 MALDI TOF / TOFアナライザ（AB SCIEX）に取得されています。
  2. 分析前に、測定器は±50 ppmと一致するように、6つのピークの最小数の最大質量測定誤差の許容範囲を有するペプチド規格（AB SCIEX TOF / TOF機器のキャリブレーションのための質量標準キット）の混合物で校正されています。
  3. MSスペクトル（質量範囲45000 - 2000の許容ベースピーク強度範囲とステップサイズ50）、400 - 3800 - 4000 メートル/ z）は調整可能なレーザー強度（3400と正イオンモードを用いて三重に獲得されます。シングルショットは合計400ショット/スペクトルと、サブスペクトルを取得し、800のサブスペクトル後に発効する停止条件（合格または不合格）が取得されるか400のサブスペクトルパス合格基準。低濃度サンプルの場合や複雑な生物学的背景の存在下でMS検出範囲の下限は800のm / zに引き上げるべきである。また、LC分離したり、前述のように、サンプルクリーンアップステップと塩と他の干渉成分を除去することが必要かもしれません。
  4. MSデータファイル（。T2Dファイル）は4000シリーズExplorerデータ収集ソフトウェアからエクスポートして、スペクトル処理、ピーク検出のマスコットDistillerのソフトウェア（マトリックスサイエンス）を利用して、社内の研究室情報システムにインポートされます。同位封筒自動的にメイソンらによって記載されたものと同様のアルゴリズムを用いて決定し、デコンボリューションおよび18 O-混入比率は12であり、当社グループ9で適応した。あるいは、このようなZoomQuant 13とバイパー14と同様に、このような市販のソフトウェアパッケージなどのソフトウェアツールは、 BioWorksエクスプレス（サーモフィッシャーサイエンティフィック）とマスコットキャラクターDistillerの定量ツールとして（マトリックスサイエンス）18 O型データ15,16をデコンボリューションすることができます18、O-取り込み比（ すなわち 、16を含むペプチドの個々のペプチドの同位体種の相対的な寄与として表されているO、18 O 1ま ​​たは18 O 2）を全体同位封筒へ。
  5. 各時間経過の実験のために、分子量（[M + H] +）、検出されたすべてのペプチド種は、関連付けられたMSデータファイルから抽出された値が100 ppmの質量幅でビニングされるため。
  6. A少なくともトン3 [M + H] +のビンを移入するために必要とされるように設定されている。既知の基質の場合では、フィルタリングされたビンのリストがExPASy FindPeptツール17（使用基質ペプチド配列から予測されるタンパク質分解切断製品のリストと比較されhttp://au.expasy.org/tools/findpept.html ）と200 ppmの質量誤差の許容公差。
  7. MS / MSスペクトルをFindPeptツールによって、それらに関連付けられた18 O取り込みを持つビン値に対する予測切断産物の全質量の値で取得されています。 MS / MSデータは、オフモードで固定されたレーザー4200の強度と、CIDガスで、1kVのリフレクターポジティブイオンモードで4800 MALDI TOF / TOFアナライザで取得されています。 50ショットはアップスポットあたり40サブスペクトル（2000ショット/スポットの合計が得られる）との合計に対するサブスペクトル当たり無作為パターンで取得されています。
  8. MS / MSデータファイル（。T2Dファイル）は、4000シリーズの爆発からエクスポートされたRERのデータ収集ソフトと社内の検査情報システムにインポートされ、ピークが検出されるとMS / MSピークリストは、対応するビニングMSデータに関連付けられています。
  9. 無酵素特異性、150ppmの前駆イオンと0.2 Daのフラグメントイオンの質量の許容差：ペプチド同定は、MS / MSピークリストは次の検索パラメータを指定してMASCOT検索エンジンを使用して、SwissProtデータベースに対して検索されます。
  10. ペプチド同定はさらにシェフチェンコらによって説明されているようにYシリーズのフラグメントイオンを越え特性18 O取り込みパターンを確認することにより、データエクスプローラソフトウェア（AB SCIEX）を使用して検証することができます18。

スペクトルの時間および18 O-定款プロットのRNAサンプルの調製

スペクトルの時間プロット：各反応時間ポイントのMSデータファイル（。T2Dファイル）を使用して、ASCIIファイルとしてデータエクスプローラソフトウェアからエクスポートされたマクロとデータ解析とグラフィックソフトウェアプログラム（OriginLabの起源などによる）にインポートして、ウォーターフォールプロット（ 図3）として表示されます。

18 O取り込みプロット：各ビニングペプチド切断の製品については、個々のペプチドの同位体種の相対的な寄与（16 O、18 O 1ま ​​たは18 O 2）をすべて反応時間ポイント間で抽出されます（ 図4）を時間に対してプロットした。

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

結果

我々は、動的にタンパク質分解酵素によって生成されたペプチドの切断産物に18 O安定同位体の取り込みを監視するために古経時ワークフローを使用していました。提示されたアプローチは比較的異なる基板とプロテアーゼの組み合わせに分解性プロセシング経路を研究するための多目的ツールです。反応の過程で繰り返しタンパク質分解反応をサンプリングすることにより、古経時実験は、基質と生成物の存在量と処理内容の時間分解スナップショットを提供します。ターゲットプレート上の酸性マトリックス溶液とのコ·スポッティングサンプルが酵素反応とマトリックスの結晶化がさらに試料組成を保持し停止します。したがって、時点を遡及的に酵素反応の終結後MALDI-TOF/TOF MS / MSで分析することができます。これらの実験のワークフローのデータが豊富な自然に適応するために、我々は18のO-incorporatを計算する半自動バイオインフォマティクスシステムを実装各ペプチドのイオン比図3は、ECE-1によるペプチドEndokinin Cの処理の代表的なスペクトルの経時変化のプロットを示します。古経時データ...

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

ディスカッション

時間分解方法で、安定同位体標識と​​高分解能質量分析を組み合わせることで、古経時方法は、ペプチド生成物の生成の動的解析が可能になります。アッセイは、定量的および定性的プロテオミクス研究のための安定同位体で標識されたペプチドを生成するとプロテオティピックペプチドが生成されることにより反応速度を評価するために用いることができる。さらに、古経時は、特定の、生理学的に関連する条件を ex vivoでタンパク質分解経路を評価するために設計されています。内因性タンパク質、ペプチド、およびプロテアーゼならびに合成ペプチド及び組換えプロテアーゼがワークフローで利用することができる。調査されるべき特定のタンパク質分解反応に応じて、アッセイ条件とスポッティング時間は反応プロセスの最適なサンプリングを提供するために調整することができます。我々の経験では、それは、部屋、低い酵素濃度を使用することによって（ 例えば、タンパク質分解反応を遅くしておくと便利です。便利な手動のサンプリング間隔を可能にする温度）は、他の安定同位体標識方法論と同様に、実験的な18...

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

開示事項

特別な利害関係は宣言されません。

謝辞

この作品は、NIH / NIDCRグラント1R01DE019796によってサポートされていました。

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
材料の名称 会社 カタログ番号
PepClean C-18スピンカラムサーモ 89870
のOpti-TOF 384 MALDIターゲットプレート AB SCIEX 1016629
4800 MALDI TOF / TOF AB SCIEX

表1材料

試薬の名称 会社 カタログ番号
アルファシアノ-4 - ヒドロキシ桂皮酸シグマアルドリッチ 70990-1G-F
ウシ血清アルブミン（BSA） シグマアルドリッチ A3294-10G
ジチオスレイトール（DTT） アクロス 16568-0050
ヨードアセトアミド（IAM） シグマアルドリッチ 1149-5G
酵素-1（ECE-1）を変換エンドセリン R＆Dシステムズ 1784-ZN
トリプシンゴールドプロメガ V5280
水- 18 O、97原子％ の18 O シグマアルドリッチ 329878-1G
トリフルオロ酢酸（TFA） サーモ 28904
AB SCIEX TOF / TOF機器のキャリブレーションのための質量標準キット AB SCIEX 4333604

表2試薬

参考文献

  1. Bender, M., Kemp, K. Oxygen-18 Studies of the Mechanism of the alpha-Chymotrypsin-catalyzed Hydrolysis of Esters. Journal of the American Chemical Society. 79, 111-116 (1957).
  2. Sharon, N., Grisaro, V., Neumann, H. Pepsin-catalyzed exchange of oxygen atoms between water and carboxylic acids. Archives of Biochemistry and Biophysics. 97, 219-221 (1962).
  3. Antonov, V., Ginodman, L., Rumsh, L., Kapitannikov, Y., Barshevskaya, T., Yavashev, L., Gurova, A., Volkova, L. Studies on the mechanisms of action of proteolytic enzymes using heavy oxygen exchange. European Journal of Biochemistry. 117, 195-200 (1981).
  4. Fenselau, C., Yao, X. 18O2-labeling in quantitative proteomic strategies: a status report. Journal of Proteome Research. 8, 2140-2143 (2009).
  5. Miyagi, M., Rao, K. C. S. Proteolytic 18O-labeling strategies for quantitative proteomics. Mass Spectrom. Rev. 26, 121-136 (2007).
  6. Ye, X., Luke, B., Andresson, T., Blonder, J. 18O stable isotope labeling in MS-based proteomics. Brief Funct. Genomic Proteomic. 8, 136-144 (2009).
  7. Bantscheff, M., Schirle, M., Sweetman, G., Rick, J., Kuster, B. Quantitative mass spectrometry in proteomics: a critical review. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 389, 1017-1031 (2007).
  8. Yao, X., Afonso, C., Fenselau, C. Dissection of proteolytic 18O labeling: endoprotease-catalyzed 16O-to-18O exchange of truncated peptide substrates. Journal of Proteome Research. 2, 147-152 (2003).
  9. Robinson, S., Niles, R. K., Witkowska, H. E., Rittenbach, K. J., Nichols, R. J., Sargent, J. A., Dixon, S. E., Prakobphol, A., Hall, S. C., Fisher, S. J., Hardt, M. A mass spectrometry-based strategy for detecting and characterizing endogenous proteinase activities in complex biological samples. Proteomics. 8, 435-445 (2008).
  10. Cottrell, G. S., Padilla, B. E., Amadesi, S., Poole, D. P., Murphy, J. E., Hardt, M., Roosterman, D., Steinhoff, M., Bunnett, N. W. Endosomal endothelin-converting enzyme-1: a regulator of beta-arrestin-dependent ERK signaling. The Journal of Biological Chemistry. 284, 22411-22425 (2009).
  11. Subramanian, S., Hardt, M., Choe, Y., Niles, R. K., Johansen, E. B., Legac, J., Gut, J., Kerr, I. D., Craik, C. S., Rosenthal, P. J. Hemoglobin cleavage site-specificity of the Plasmodium falciparum cysteine proteases falcipain-2 and falcipain-3. PLoS ONE. 4, e5156(2009).
  12. Mason, C., Therneau, T., Eckel-Passow, J., Johnson, K., Oberg, A., Olson, J., Nair, K., Muddiman, D. C., Bergen, H. A method for automatically interpreting mass spectra of 18O-labeled isotopic clusters. Molecular & Cellular Proteomics. 6, 305-318 (2007).
  13. Hicks, W. A., Halligan, B. D., Slyper, R. Y., Twigger, S. N., Greene, A. S., Olivier, M. Simultaneous quantification and identification using 18O labeling with an ion trap mass spectrometer and the analysis software application "ZoomQuant". J. Am. Soc. Mass Spectrom. 16, 916-925 (2005).
  14. Qian, W. -J., Petritis, B. O., Nicora, C. D., Smith, R. D. Trypsin-catalyzed oxygen-18 labeling for quantitative proteomics. Methods Mol. Biol. 753, 43-54 (2011).
  15. Ye, X., Luke, B. T., Johann, D. J., Ono, A., Prieto, D. A., Chan, K. C., Issaq, H. J., Veenstra, T. D., Blonder, J. Optimized method for computing (18)O/(16)O ratios of differentially stable-isotope labeled peptides in the context of postdigestion (18)O exchange/labeling. Anal. Chem. 82 (18), 5878-5886 (2010).
  16. Hardt, M., Lam, D. K., Dolan, J. C., Schmidt, B. L. Surveying proteolytic processes in human cancer microenvironments by microdialysis and activity-based mass spectrometry. Proteomics Clin. Appl. 5, 636-643 (2011).
  17. Gattiker, A., Bienvenut, W., Bairoch, A., Gasteiger, E. FindPept, a tool to identify unmatched masses in peptide mass fingerprinting protein identification. Proteomics. 2, 1435-1444 (2002).
  18. Shevchenko, A., Chernushevich, I., Ens, W., Standing, K. G., Thomson, B., Wilm, M., Mann, M. Rapid 'de novo' peptide sequencing by a combination of nanoelectrospray, isotopic labeling and a quadrupole/time-of-flight mass spectrometer. Rapid Commun. Mass Spectrom. 11, 1015-1024 (1997).
  19. Niles, R. K., Witkowska, H. E., Allen, S., Hall, S. C., Fisher, S. J., Hardt, M. Acid-catalyzed oxygen-18 labeling of peptides. Analytical Chemistry. 81, 2804-2809 (2009).
  20. Bender, M., Stone, R., Dewey, R. Kinetics of Isotopic Oxygen Exchange between Substituted Benzoic Acids and Water. Journal of the American Chemical Society. 78, 319-321 (1956).
  21. Kuster, B., Schirle, M., Mallick, P., Aebersold, R. Scoring proteomes with proteotypic peptide probes. Nature Reviews Molecular Cell Biology. 6, 577-583 (2005).

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

再版と許可

このJoVE記事のテキストまたは図の再利用許可をリクエスト

許可をリクエスト

タグ

18OPALeOMALDI TOF MS

関連記事