動脈瘤高脂血症マウスモデルにおけるオイルレッドO染色全大動脈病変のイメージングと解析

サマリー

このプロトコルは 、マウスにおけるアテローム性動脈硬化負荷を分析するためのステップバイステップの手順を提供する。研究者は、このプロトコルを使用して、異なる動物におけるアテローム性動脈硬化病変の存在量、位置、およびサイズを比較することができる。

要約

アポリポタンパク質E(Apoe)-または低密度リポタンパク質受容体(Ldlr)欠損高脂血症マウスは、アテローム性動脈硬化症研究に最も一般的に使用される2つのモデルである。それらは、アテローム性動脈硬化病変形成に対する様々な遺伝的要因および異なる細胞型の影響を研究し、ならびに新しい治療法の開発をテストするために使用される。大動脈全体の単離、切除、およびオイルレッドO染色されたアテローム性動脈硬化病変の定量化は、アテローム性動脈硬化負荷を評価するために使用される基本的な形態測定法である 。このプロトコルの目標は、Oil Red Oを用いてマウス大動脈のアテローム性動脈硬化病変を解剖、灌流固定、単離、染色、画像化、分析するための最適化された段階的な外科的方法を記述することです。無気球硬化性病変は大動脈樹全体のどこにでも形成され得るので、この大動脈全体オイルレッドO染色法は、大動脈全体およびすべての枝の脂質を含むプラークを単一のマウスで評価するという利点を有する。オイルレッドO染色に加えて、新鮮な単離された全大動脈は、様々なインビトロおよびインビボ実験および細胞単離に使用することができる。

概要

米国における主要な死因である冠状動脈疾患は、通常、動脈壁内部のプラークの蓄積につながるアテローム性動脈硬化症によって引き起こされます¹。高脂血症を起こしやすいApoeおよびLdlr欠損マウスは、アテローム性動脈硬化症およびその合併症の調査および治療法の開発の中心である2,3,4,5。エンフェイス大動脈からのアテローム性動脈硬化病変の定量化は、異なる細胞型における遺伝子操作の影響を評価するための重要なエンドポイント分析である。また、アテローム性動脈硬化性疾患の開始、進行、および退行に影響を与えるように設計された新しい治療法の研究にも役立ちます。アテローム性動脈硬化病変は、大動脈およびその枝(すなわち、胸部の腕頭症、頸動脈および鎖骨下動脈、ならびに横隔膜の下の腎動脈、総腸骨動脈および大腿動脈)のどこにでも形成され得る⁶。アテローム性動脈硬化症の負担と適切な治療の包括的な評価は、異なる場所での疾患負担の評価を必要とし、しばしば見過ごされがちな課題である。

このプロトコルは、未開封の大動脈全体から始ま....

プロトコル

mT/mG(ストック番号007676)、およびApoe^-/-(ストック番号002052)マウスをジャクソン研究所から購入した。Myh11-CreERT2マウスは、Stefan Offermanns(ストック番号019079としてジャクソン研究所から入手可能)からの贈り物であった。Tgfbr2fl^/flマウスはハロルド・L・モーゼス(ヴァンダービルト大学)から入手した。すべての動物処置は、イェール大学機関動物ケアおよび使用委員会によって承認されたプロトコルを使用して実施された。

1. マウス

1. MYH11-CreERT2;mT/mGf/^fを生成する。アポエ-^/-およびMYH11-CreERT2;Tgfbr2f/f;mT/mGf^/f;前述のようにアポエ-^/-マウス⁷。変異株をC57BL/6Jの背景に10世代以上にわたって繁殖させた。<....

結果

このプロトコールにおいて、TGFβR2iSMC-Apoeマウスにおけるアテローム性動脈硬化病変を、HCHF食餌で4ヶ月後に解析した⁷。広範なアテローム性動脈硬化症に加えて、これらのマウスは、以前に報告されたように、胸部および腹部大動脈瘤の両方を発症した。Apoe-^/-マウスと比較して、TGFβR2iSMC-Apoeマウスは大動脈壁が重度のアテローム性動脈硬化症を示し、病変を解剖することが困難であった(図2C、D、E)。さらに、動脈瘤は特に大動脈瘤下方に広範であり、高度なヒト大動脈瘤を高度に連想させる。

HCHFD給餌TGFβR2iSMC-Apoeマウスからの代表的な未開封大動脈オイルレッドO染色像を図3Eに示す。画像は、上行動脈瘤と腹部大動脈瘤の両方を発症した^{TGFβR2iSMC-Apo.......}

ディスカッション

アポリポタンパク質E(Apoe)および低密度リポタンパク質受容体(Ldlr)欠損マウスは、アテローム性動脈硬化症の発生および治療の研究に有用である。研究者は、大動脈全体のオイルレッドO染色を用いて、アテローム性動脈硬化症関連疾患の開始、進行、および退行に対する遺伝学および治療操作の影響を評価することができます⁹。大動脈オイルレッドO染色および病変の定量化は、アテローム性動脈硬化症研究のゴールドスタンダードエンドポイントです。この技術は安価であり、特別な装置を必要としない¹⁰。しかしながら、高品質のオイルレッドO染色組織を得ることは容易ではない。以前の経験に基づいて、このプロトコルには3つの重要なステップがあり、手順全体には練習と忍耐が必要です。最初の重要なステップは、オイルレッドO染色の前後に大動脈およびその枝の周りのすべての血管周囲脂肪組織を解剖、除去、および洗浄する能力である(図2D、 図

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
1.5 mL Eppendorf チューブ	DENVILLE	C2170
10 mL シリンジ	BD	302995
16% ホルムアルデヒド	Polysciences	18814-10
70% エタノール	VWR	RC2546.70-5	解剖ツールをきれいにするには
ブラック解剖ワックス	CR Scientific	C3541
コーン油	シグマ	タ	モキシフェン
&組織キット	QIAGEN	69506	マウスの耳からDNAを単離するには
Dulbecco'S リン酸緩衝生理食塩水 (1X DPBS)、pH 7.4	Gibco	14190-144
細かいはさみ	ファインサイエンスツール	14059-11	マウスの皮膚を切断し、胸郭を開くには
フィッシャーブランド経済 プレーンガラス顕微鏡スライド	フィッシャーサイエンティフィック	12-550-A3
高コレステロール高脂肪ダイエット	研究ダイエット	D12108	アテローム性動脈硬化症を誘発する
イメージングソフトウェア	国立衛生研究所	画像 J	大動脈病変 定量化
イソプロパノール	VWR	JT9079-5
Kimwipes	フィッシャーサイエンティフィック	06-666A	ガラス顕微鏡スライドを掃除するには
McPherson-Vannas マイクロ解剖スプリングハサミ	ROBOZ	RS-5602	心臓と大動脈を分離し、大動脈と大動脈の枝
を切り開くには顕微鏡制御ソフトウェア	オリンパス	DPコントローラ	大動脈イメージング用
微細ピン	ファインサイエンスツール	26002-10
ニードル-25G	BD	305124
スポンジ	マッケッソン	94442000
オイルレッド O	シグマ	O-0625	アテローム性動脈硬化症の病変を染色するには
ポール・アクロディスク 滅菌シリンジスーパーメンブレン付きフィルター	VWR	28143-312	作動油 レッドO溶液
スプリングシザース	ファインサイエンスツール	15021-15	大動脈を解剖し、洗浄する
統計ソフトウェア	GraphPad	プリズム 8	静的分析
実体顕微鏡	ニコンSMZ1000		大動脈解剖用
実体顕微鏡	リンパス	SZX16	大動脈イメージング用
タモキシフェン	シグマ	T5648	Cre-loxP組換えを誘導する
Tissue-Tek O.C.Tコンパウンド、さくら Finetek	VWR	25608-930
ピンセット スタイル 4	電子顕微鏡科学	0302-4-PO	マウスの皮膚を切って胸郭を開く
ピンセットスタイル 5	電子顕微鏡科学	0302-5-PO	解剖して洗浄する大動脈

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