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方法論記事

JUMPn:プロテオミクスにおけるタンパク質共発現クラスタリングとネットワーク解析のための合理化されたアプリケーション

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DOI:

10.3791/62796

2021年10月19日

この記事について

サマリー

我々は、データの前処理、共発現クラスタリング、経路濃縮、タンパク質間相互作用ネットワーク解析を含む詳細なプロトコルを用いて、定量的プロテオミクスデータのネットワーク解析を実行および視覚化するためのシステム生物学ツールJUMPnを提示する。

要約

質量分析ベースのプロテオミクス技術の最近の進歩により、何百ものプロテオームのディーププロファイリングがますます実現可能になっています。しかし、このような貴重なデータセットから生物学的な洞察を引き出すことは困難です。ここでは、システム生物学ベースのソフトウェアJUMPnと、モジュール(タンパク質複合体など)によって接続されたサンプルおよびタンパク質間相互作用(PPI)ネットワークにわたってプロテオームをタンパク質共発現クラスターに編成するための関連プロトコルを紹介します。R/Shinyプラットフォームを使用して、JUMPnソフトウェアは、統合されたデータ視覚化とユーザーフレンドリーなインターフェースにより、共発現クラスタリング、経路エンリッチメント、PPIモジュール検出の分析を合理化します。プロトコルの主なステップには、JUMPnソフトウェアのインストール、発現差のあるタンパク質または(dys)調節プロテオームの定義、意味のある共発現クラスターおよびPPIモジュールの決定、および結果の視覚化が含まれます。このプロトコルは、等圧標識ベースのプロテオームプロファイルを使用して実証されていますが、JUMPnは一般に、広範囲の定量データセット(例えば、ラベルフリープロテオミクス)に適用可能です。したがって、JUMPnソフトウェアとプロトコルは、定量的プロテオミクスにおける生物学的解釈を容易にする強力なツールを提供します。

概要

質量分析ベースのショットガンプロテオミクスは、複雑なサンプル1のプロテオーム多様性を分析するための重要なアプローチとなっています。質量分析装置23クロマトグラフィー45、イオン移動度検出6、取得方法(データ非依存7およびデータ依存取得8)、定量アプローチ(多重鎖等圧ペプチド標識法例えば、TMT910、および標識フリー定量1112)およびデータ分析戦略における最近の進歩/ソフトウェア開発13、14、15、161718は、プロテオーム全....

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プロトコル

注:このプロトコルにおいて、JUMPnの使用は、TMT等圧標識試薬27によって定量されたB細胞分化中の全プロテオームプロファイリングの公開されたデータセットを利用することによって例示される。

1. JUMPnソフトウェアのセットアップ

メモ: JUMPn ソフトウェアの設定には、(i) 個人使用のためにローカルコンピュータにインストールする 2 つのオプションがあります。(ii)複数のユーザーのためのリモートシャイニーサーバーへのJUMPnの展開。ローカルインストールの場合、インターネットアクセスと≥ 4 GBのRAMを備えたパーソナルコンピュータは、サンプルサイズが小さいデータセット(n<30)のデータセットに対してJUMPn分析を実行するのに十分です。大規模なコホート分析(例えば、n = 200サンプル)には、より大きなRAM(例えば、16Gb)が必要である。

  1. ソフトウェアをローカル コンピューターにインストールします。インストール後、Web ブラウザーが JUMPn を起動し、ローカル コンピューターで分析を実行できるようにします。
    1. アナコンダ42 またはミニ コンダ43 をオンラインの指示に従ってインストールします。

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結果

我々は、JUMPnの性能を最適化および評価するために、公開されたディーププロテオミクスデータセット25262730(図5および図6)およびデータシミュレーション57(表1)を使用した。WGCNAを介した共発現タンパク質クラスタリング解析では、サンプル間で有意に変化するタンパク質(統計解析によって検出された発現差(DE)タンパク質など)を入力として利用することをお勧めします。非DEタンパク質を解析に含めると、(入力サイズが大きいため)プログラムによって返される共発現クラスターが増える可能性がありますが、システムレベルの解析のために実際のシグナル(DEタンパク質など)とバックグラウン.......

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ディスカッション

ここでは、深い定量的プロテオミクスデータ25,26,27,30,64を用いて分子機構を解剖するための複数のプロジェクトに適用されているJUMPnソフトウェアとそのプロトコルを紹介しました。JUMPnソフトウェアとプロトコルは、共発現ネットワーク解析のためのDEタンパク質の検討、包括的で高品質のPPIネットワークのコンパイル、合理化されたユーザーフレンドリーなインターフェースを備えた厳格な統計分析(例えば、複数の仮説検定の検討による)など、完全に最適化されています。JUMPnによって同定された複数のタンパク質モジュールは、機能実験研究2527または独立した患者コホート26に.......

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開示事項

著者らは開示するものは何もありません。

謝辞

資金援助は、国立衛生研究所(NIH)(R01AG047928、R01AG053987、RF1AG064909、RF1AG068581、およびU54NS110435)およびALSAC(米国レバノンシリア関連慈善団体)によって提供されました。MS解析は、NIHがんセンター支援助成金(P30CA021765)によって部分的に支援されたセントジュード小児研究病院のプロテオミクスおよびメタボロミクスセンターで実施された。コンテンツは著者の責任であり、必ずしも国立衛生研究所の公式見解を表すものではありません。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
2.3 GHzクアッドコアプロセッサを搭載したMacBook Pro(OS 10.15.7を実行)。アップル株式会社MacBook Pro 13インチハードウェアは、ソフトウェア開発とテストに使用される
AnocondaAnaconda、Inc.version 4.9.2https://docs.anaconda.com/anaconda/install/
minicondaアナコンダ株式会社version 4.9.2https://docs.conda.io/en/latest/miniconda.html
RStudioRStudio 公益法人version 4.0.3
https://www.rstudio.com/products/rstudio/download/ Shiny ServerRStudio 公益法人https://shiny.rstudio.com/articles/shinyapps.html

参考文献

  1. Aebersold, R., Mann, M. Mass-spectrometric exploration of proteome structure and function. Nature. 537, 347-355 (2016).
  2. Senko, M. W., et al. Novel parallelized quadrupole/linear ion trap/orbitrap ....

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再版と許可

タグ

PPI R Shiny