ヒト肺組織における細菌の局在および宿主相互作用のイメージング

蛍光標識された 黄色ブドウ球菌 の懸濁液と、同じ蛍光標識菌に感染したヒト肺胞組織を例に取ります。

繊維付き共焦点蛍光顕微鏡の先端を細菌の懸濁液に挿入し、スキャンします。

明るい蛍光信号は細菌の膜標識とプローブ活性化の成功を確認させます

プローブがサスペンションを通過する際の蛍光を記録してください。

過酸化水素浸透レンズをクリアリング組織で拭き取り、残留細菌を除去し背景蛍光を防ぐためにプローブを拭きます

洗浄したプローブを組織に直接当て、表面をスキャンします。

組織内では、コラーゲンとエラスチンの繊維が自己蛍光マトリックスとして現れ、蛍光標識された細菌は明確な明るい斑点として見えます。

蛍光を欠く肺胞空間は暗い領域として現れます。

組織付着細菌と緩やかに結合した細菌の両方を撮影する動画を撮影し、宿主肺胞組織内の細菌感染をリアルタイムで可視化できるようにします。

データ収集を開始するには、画面の「スタート」をクリックするか、左足のペダルを押してレーザーを起動してください。次に、細菌の懸濁サンプルを画像化します。FCFMイメージングファイバーの遠位端を挿入し、線維を懸濁液内をゆっくりと移動させてサンプルを照会します。

右足のペダルを踏むか画面上の録画コントロールを選択することで、ファイバーがサンプルの周りをゆっくり動く中で、長さの動画を録画できます。FCFMの遠位端を8%過酸化水素で洗浄し、サンプル間にはレンズクリーニング組織を施します。各肺組織サンプルを画像化するには、FCFMの遠位端をサンプルに挿入し、線維の端と組織が直接接触するようにします。

次に、イメージングファイバーの端を優しく動かしてサンプルを照会します。繊維の端を組織から持ち上げると、組織は焦点面から外れます。しかし、組織に付着していない標識細菌の画像化には利用されることがあります。

右足のペダルを踏むか画面上の録画コントロールを選択することで、ファイバーがサンプルの周りをゆっくり動く中で、長さの動画を録画できます。