細菌感染の可視化のためのマウス膀胱組織の準備

0 views • 5:23 min • January 30th, 2026

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

まずは、病原性細菌に感染した膀胱が露出した安楽死マウスから始めます。

細菌は尿路上皮に侵入し、コロニーを形成します。成熟すると、これらの細菌は上皮細胞を破裂させ、周囲の細胞に感染します。

固定剤が入った注射器に接続されたカテーテルを挿入します。膀胱を膨らませて構造を保つために、ゆっくり固定剤を注入します。

尿道をクランプして固定剤を保持し、膀胱の形を保ちましょう。

カテーテルを抜き、尿道を切ります。膀胱を新しい固定液に移し、構造を保存するために培養してください。

膀胱を2つの半分カップに分けて尿路皮を露出させ、バッファーですすぎます。

金属系の試薬でコントラストを強調し、その後超純水で洗います。

エタノール勾配で断片を脱水し、その後臨界点乾燥を行います。

乾燥した膀胱カップをそれぞれ半分に切ります。

サンプルは現在、宿主と病原体の相互作用を可視化するための下流処理の準備が整っています。

ツベルクリンを固定剤でスリップチップ注射器にしたら、カテーテルを注射器のマーキングの反対側に面取りして取り付けます。

針の先端から1〜2ミリ離れた余分なチューブを切り取り、針先が露出しないように注意してください。シリンジをひねって気泡を取り除き、プランジャーを空の空気に押し込みます。次に、マイクロ遠心分離機チューブでカテーテルに固定液を充填します。麻酔をかけて生け贄にした後、脚を固定したら、鉗子と外科用ハサミでネズミの骨盤部分を開き、膀胱を露出させます。隣接する脂肪を慎重に押しのけて、膀胱はそのままにしてください。

注射器は利き手で持ち、針は下に向けます。カテーテルの先端を滅菌潤滑剤に浸し、尿道口にカテーテルの先端を位置付け、注射器のバレルをマウスの体に30〜45度の角度で持ち出します。

わずかに時計回りに下方向に圧力をかけ、カテーテルを優しく尿道に挿入します。カテーテルの先端が入ったら、注射器をマウスの尾に向かってヒンジしつつ、カテーテルをさらに尿道の奥へ滑らせて、注射器のバレルが作業面と平行になるまで続けます。カテーテルの針軸全体がマウスに入り、カテーテルの先端が膀胱腔内に位置します。ゆっくり50〜80マイクロリットルの固定剤を投与し、膀胱を風船のように膨らませます。

カテーテルをそのままにし、注射器を少し持ち上げて先端を上に傾けます。もう一方の手で止血栓を開き、尿道の交差点でカテーテル針の下に一本の針を滑り込ませます。止血剤を部分的に閉じて、針に触れる程度にしてください。

カテーテルの針を膀胱から優しく引き抜きつつ、同時に止血剤の流出を防ぐために止血止めを完全に締めてロックしてください。止血器を作業面と平行に握り、膀胱をその上に置きます。止血鉗をゆっくりと下から切って、止血鉗がまだついたまま膀胱を取り出します。

膀胱と固定器を温めた固定液が入ったファルコンチューブに入れます。膀胱が液体に完全に浸かり、チューブの壁に押し付けられていないことを確認してください。

走査型電子顕微鏡で膀胱をイメージングするには、きれいな両面カミソリの刃またはメスで矢状面で膀胱を二分し、止血鉗に接線状に2回目の切断をして膀胱を解放します。これにより、2つの半膀胱カップが完成します。もし膀胱の外側に脂肪パッドが残っている場合は、優しく取り除いてください。

膀胱の半分をナトリウムカコジレートバッファーで3回洗い流します。0.15モルカコジレート緩衝液に1%四酸化オスミウムを室温で1時間染色します。この工程は染色容器をホイルで包んで暗い環境を保ちます。染色後、膀胱の半分を超純水で3回洗い流します。

水面に浸透油が見られた場合は、乾燥工程中の汚染を防ぐために吸引またはウィックで除去してください。組織を脱水させた後、清潔な両面カミソリで膀胱の半分を半分に切り、合計4つの破片を作ります。

05:19

核磁気共鳴化学発癌剤誘発マウス膀胱腫瘍の評価

Related Videos

0 Views

06:36

膀胱充填中にスブロテリウムに直接アクセスするために脱皮筋を除去した分散型(Ex Vivo)マウス膀胱モデル

Related Videos

0 Views

05:35

エクスビボ 尿路上皮細胞における機械的に活性化されたCa2+ トランジェントの解析

Related Videos

0 Views

09:24

マウス尿路感染症の経尿道的誘導

Related Videos

0 Views

02:56

細胞内細菌群集を含むマウス膀胱上皮細胞の単離

Related Videos

0 Views

03:14

生物発光を用いたマウスモデルにおける尿路感染症の可視化

Related Videos

0 Views

02:06

感染マウス膀胱内の細胞内細菌群集の可視化

Related Videos

0 Views

06:10

蛍光In Situハイブリダイゼーションによる膀胱生検切片の細菌の可視化

Related Videos

0 Views

08:40

マウスモデルにおけるUTIとCAUTIの樹立とその性状

Related Videos

0 Views

10:23

小動物モデルにおける尿路感染症: 雌雄マウスの尿道カテーテル

Related Videos

0 Views

Last updated: 11 July 2026